本文關(guān)鍵詞：IGF-1R抗體抑制Herceptin耐藥卵巢癌細胞的機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:卵巢惡性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,死亡率位列各類婦科腫瘤的首位。手術(shù)聯(lián)合化療能抑制腫瘤發(fā)展,但是復(fù)發(fā)率高。特異性抗體靶向治療已經(jīng)成為卵巢癌臨床治療的研究熱點,先后有多種抗體進入臨床研究,能夠抑制疾病進展,具有良好的應(yīng)用前景。但是,抗體耐藥現(xiàn)象明顯影響了疾病預(yù)后。因此,探討卵巢癌抗體耐藥的分子機制、尋找有效的干預(yù)策略具有重要意義。在前期工作中,我們利用抗HER2抗體曲妥珠長期處理敏感細胞系SKOV3,篩選獲得一株抗體耐藥的細胞株SKOV3-T�；蛐酒治鼋Y(jié)果顯示,SKOV3-T細胞中HER2表達水平降低,而IGF-1R表達顯著上調(diào),提示耐藥細胞發(fā)生了HER2表位逃逸,而IGF-1R信號通路的激活可能與抗體耐藥相關(guān)。在此基礎(chǔ)上,本研究將進一步確定IGF-1R在抗體耐藥細胞系中的生物學功能,并嘗試利用抗IGF-1R特異性抗體逆轉(zhuǎn)耐藥,探索在誘導耐藥的過程中細胞發(fā)生適應(yīng)性改變的內(nèi)在機制。方法:利用流式細胞術(shù)、免疫印跡、細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤等方法,比較SKOV3和SKOV3-T細胞的生物學活性差異。利用真核轉(zhuǎn)染技術(shù)在SKOV3中轉(zhuǎn)入IGF-1R全長質(zhì)粒提高IGF-1R表達水平,同時在SKOV3-T中轉(zhuǎn)入IGF-1R-si RNA慢病毒下調(diào)IGF-1R的表達,借助克隆形成、細胞增殖、體內(nèi)成瘤、細胞內(nèi)信號等實驗,驗證IGF-1R在抗HER2抗體耐藥中潛在作用。針對IGF-1R篩選獲得了一種人源單克隆抗體LMAb1,借助細胞增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤、信號轉(zhuǎn)導等方法探討抗IGF-1R抗體對HER2耐藥的逆轉(zhuǎn)效應(yīng);進一步,我們還通過流式細胞術(shù)鑒定并分選腫瘤干樣細胞,利用細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤以及細胞內(nèi)信號等指標,初步探索耐藥發(fā)生過程中腫瘤干細胞適應(yīng)性改變的分子機制。結(jié)果:HER2抗體耐藥細胞SKOV3-T的增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力均明顯強于敏感細胞SKOV3;在敏感細胞中過表達IGF-1R使得細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力明顯增強,細胞周期S期延長,而在耐藥細胞中轉(zhuǎn)入IGF-1R-si RNA慢病毒,降低IGF-1R表達水平,可以引起細胞增殖延緩、克隆形成和體內(nèi)成瘤能力減弱,表明IGF-1R在耐藥細胞系中具有重要的生物學作用,與耐藥細胞的增殖和成瘤能力密切相關(guān);進一步,我們制備了IGF-1R抗體LMAb1,實驗表明,LMAb1能夠特異性的抑制SKOV3-T細胞增殖、克隆形成、遷移和體內(nèi)成瘤,提高荷瘤小鼠的生存率。細胞內(nèi)信號結(jié)果顯示,抗IGF-1R抗體能夠抑制IGF-1R活化,阻斷下游MAPK、AKT信號通路,部分逆轉(zhuǎn)曲妥珠耐藥;同時,流式細胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示,抗體耐藥細胞系中干樣細胞群比例明顯升高,分選獲得的干樣細胞增殖、克隆形成、體內(nèi)成瘤能力明顯強于非干樣細胞,提示在耐藥誘導過程中普通腫瘤細胞發(fā)生了干細胞化轉(zhuǎn)變。結(jié)論:IGF-1R分子在卵巢癌抗HER2抗體耐藥中發(fā)揮重要作用,介導耐藥細胞SKOV3-T的過度增殖、遷移、克隆形成、體內(nèi)成瘤等生物學活性;利用抗IGF-1R抗體LMAb1特異性阻斷IGF-1R信號,能夠顯著抑制耐藥細胞的增殖和成瘤,部分逆轉(zhuǎn)曲妥珠耐藥現(xiàn)象;同時,在抗體耐藥的過程中,卵巢癌干樣細胞數(shù)量的增加可能與耐藥細胞SKOV3-T的強致瘤性、耐藥性、快速分化增殖等特性相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 IGF-1R 抗體耐藥
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 第一部分 卵巢癌耐藥細胞系中IGF-1R的功能鑒定14-28
• 1.實驗?zāi)康?/span>14
• 2.材料與方法14-17
• 2.1 材料14-15
• 2.2 方法15-17
• 3.結(jié)果17-26
• 3.1 SKOV3-T與SKOV3細胞的比較17-19
• 3.2 IGF-1R促進SKVO3細胞的增殖和成瘤19-23
• 3.3 敲低IGF-1R的表達可抑制SKOV3-T的增殖和成瘤23-26
• 4.討論26-27
• 第一部分小結(jié)27-28
• 第二部分 抗IGF-1R抗體的功能鑒定及其作用機制的初步研究28-38
• 1.實驗?zāi)康?/span>28
• 2.材料與方法28-31
• 2.1 材料28-29
• 2.2 方法29-31
• 3.結(jié)果31-36
• 3.1 LMAb1的設(shè)計、瞬時表達和純化31-33
• 3.2 LMAb1抑制癌細胞體外增殖和克隆形成33-34
• 3.3 LMAb1抑制癌細胞遷移34-35
• 3.4 LMAb1具有良好的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)35-36
• 3.5 LMAb1通過抑制IGF-1R信號通路發(fā)揮抑瘤效應(yīng)36
• 4.討論36-37
• 第二部分小結(jié)37-38
• 第三部分 耐藥細胞發(fā)生適應(yīng)性改變的初步機制研究38-46
• 1.實驗?zāi)康?/span>38
• 2.材料和方法38-40
• 2.1 材料38-39
• 2.2 方法39-40
• 3.結(jié)果40-44
• 3.1 SKOV3-T干細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子檢測40-41
• 3.2 耐藥卵巢癌細胞SKOV3-T發(fā)生了干樣細胞轉(zhuǎn)變41-44
• 4. 討論44-45
• 第三部分小結(jié)45-46
• 全文總結(jié)46-48
• 參考文獻48-54
• 文獻綜述54-70
• 參考文獻62-70
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄70-72
• 致謝72-74

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2 唐U單

本文編號：263651