本文關(guān)鍵詞：ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生與演進(jìn)中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPVs)與宮頸癌存在病因?qū)W關(guān)系,其早期基因E6的持續(xù)表達(dá)是其致癌的重要因素。鋅指蛋白(zinc finger protein, ZNF)家族與多種腫瘤的發(fā)生與演進(jìn)密切相關(guān),ZNF84是ZNF家族重要成員之一。本課題組經(jīng)Agilent人基因表達(dá)譜芯片分析,發(fā)現(xiàn)沉默E6表達(dá)后,ZNF84基因表達(dá)下調(diào)。HPV16 E6與ZNF84的關(guān)系尚不清楚。目的以HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細(xì)胞株(宮頸癌SiHa細(xì)胞)以及HPV16 E6表達(dá)陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細(xì)胞株(宮頸癌C33-A細(xì)胞)為研究對(duì)象,研究ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生與演進(jìn)中的表達(dá)及作用,為進(jìn)一步研究HPV16相關(guān)宮頸癌防治措施提供科學(xué)依據(jù)。方法1.通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)ZNF84在宮頸癌SiHa細(xì)胞(HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性)和宮頸癌C33-A細(xì)胞(HPV16E6表達(dá)陰性)中的表達(dá)。2.通過(guò)免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)染色方法檢測(cè)ZNF84在HPV16E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織和HPV16 E6表達(dá)陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達(dá),并分析二者之間表達(dá)的關(guān)系。3. 設(shè)計(jì)以ZNF84 mRNA為靶點(diǎn)的短發(fā)夾RNA (short hairpin RNA, shRNA)序列,構(gòu)建pGenesil-1-shRNA-ZNF84重組質(zhì)粒和含無(wú)關(guān)序列的pGenesil-1-shRNA-vect對(duì)照質(zhì)粒。4.經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)將上述質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入HVP16 E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞,其中轉(zhuǎn)染pGenesil-1-shRNA-ZNF84重組質(zhì)粒的SiHa細(xì)胞命名為SiHa-shRNA-ZNF84細(xì)胞,轉(zhuǎn)染pGenesil-1-shRNA-vect對(duì)照質(zhì)粒的SiHa細(xì)胞命名為SiHa-shRNA-vect細(xì)胞。篩選鑒定后,通過(guò)Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)等觀察HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞在ZNF84表達(dá)沉默后遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果1. Western blotting結(jié)果顯示：HPV16 E6在宮頸癌C33-A細(xì)胞中不表達(dá),而HPV16 E6在宮頸癌SiHa細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)。ZNF84在HPV16 E6表達(dá)陰性的C33-A細(xì)胞和HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性的SiHa細(xì)胞中均呈陽(yáng)性表達(dá),但C33-A細(xì)胞中ZNF84的表達(dá)顯著低于SiHa細(xì)胞(P0.01)。2.IHC結(jié)果顯示：ZNF84在HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)均分別顯著高于其在HPV16 E6表達(dá)陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá),二者表達(dá)呈正相關(guān)(P0.01)。3. 以ZNF84 mRNA為靶點(diǎn)的shRNA對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞中ZNF84表達(dá)的沉默效應(yīng)。Western blotting方法檢測(cè)各組細(xì)胞中ZNF84表達(dá)(以(3-actin為內(nèi)參照)的結(jié)果顯示：ZNF84在SiHa-shRNA-ZNF84細(xì)胞中的表達(dá)顯著低于其在SiHa細(xì)胞和SiHa-shRNA-vect細(xì)胞中的表達(dá)(P0.01),沉默效率為：95.630%。與SiHa細(xì)胞相比,ZNF84在SiHa-shRNA-vect細(xì)胞中的表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。4.ZNF84表達(dá)沉默對(duì)HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響,Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均顯示：SiHa-shRNA-ZNF84細(xì)胞穿過(guò)小室底膜的細(xì)胞數(shù)顯著少SiHa-shRNA-vect細(xì)胞(P0.01)結(jié)論1.證明了E6和ZNF84在HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性和陰性的宮頸癌細(xì)胞株和不同病變階段宮頸組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。2.ZNF84表達(dá)沉默對(duì)HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性的宮頸癌SiHa細(xì)胞的遷移和侵襲能力具有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：宮頸鱗癌 人乳頭瘤病毒16型 鋅指蛋白84 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一部分 從細(xì)胞和組織水平分析HPV16 E6與ZNF84表達(dá)的關(guān)系12-32
• 1 材料與方法12-21
• 2 結(jié)果21-32
• 第二部分 靶向沉默ZNF84的表達(dá)對(duì)HPV16 E6表達(dá)陽(yáng)性宮頸癌SiHa細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響32-42
• 1 材料與方法32-38
• 2 結(jié)果38-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 綜述：鋅指蛋白的研究進(jìn)展49-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 附錄 英文縮略詞60-61
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況61-62
• 致謝62-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張霞;千新來(lái);崔靜;李新強(qiáng);李永真;張潔;趙杰;治亞平;;乳腺良、惡性病變組織中Livin和Smac的表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年04期

  本文關(guān)鍵詞：ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生與演進(jìn)中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：263538