發(fā)布時間：2017-03-23 10:24

  本文關(guān)鍵詞：ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生與演進中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPVs)與宮頸癌存在病因?qū)W關(guān)系,其早期基因E6的持續(xù)表達是其致癌的重要因素。鋅指蛋白(zinc finger protein, ZNF)家族與多種腫瘤的發(fā)生與演進密切相關(guān),ZNF84是ZNF家族重要成員之一。本課題組經(jīng)Agilent人基因表達譜芯片分析,發(fā)現(xiàn)沉默E6表達后,ZNF84基因表達下調(diào)。HPV16 E6與ZNF84的關(guān)系尚不清楚。目的以HPV16 E6表達陽性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株(宮頸癌SiHa細胞)以及HPV16 E6表達陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株(宮頸癌C33-A細胞)為研究對象,研究ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸癌發(fā)生與演進中的表達及作用,為進一步研究HPV16相關(guān)宮頸癌防治措施提供科學(xué)依據(jù)。方法1.通過Western blotting方法檢測ZNF84在宮頸癌SiHa細胞(HPV16 E6表達陽性)和宮頸癌C33-A細胞(HPV16E6表達陰性)中的表達。2.通過免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)染色方法檢測ZNF84在HPV16E6表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織和HPV16 E6表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達,并分析二者之間表達的關(guān)系。3. 設(shè)計以ZNF84 mRNA為靶點的短發(fā)夾RNA (short hairpin RNA, shRNA)序列,構(gòu)建pGenesil-1-shRNA-ZNF84重組質(zhì)粒和含無關(guān)序列的pGenesil-1-shRNA-vect對照質(zhì)粒。4.經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)將上述質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入HVP16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞,其中轉(zhuǎn)染pGenesil-1-shRNA-ZNF84重組質(zhì)粒的SiHa細胞命名為SiHa-shRNA-ZNF84細胞,轉(zhuǎn)染pGenesil-1-shRNA-vect對照質(zhì)粒的SiHa細胞命名為SiHa-shRNA-vect細胞。篩選鑒定后,通過Transwell遷移和侵襲實驗等觀察HPV16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞在ZNF84表達沉默后遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果1. Western blotting結(jié)果顯示：HPV16 E6在宮頸癌C33-A細胞中不表達,而HPV16 E6在宮頸癌SiHa細胞中呈陽性表達。ZNF84在HPV16 E6表達陰性的C33-A細胞和HPV16 E6表達陽性的SiHa細胞中均呈陽性表達,但C33-A細胞中ZNF84的表達顯著低于SiHa細胞(P0.01)。2.IHC結(jié)果顯示：ZNF84在HPV16 E6表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達均分別顯著高于其在HPV16 E6表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達,二者表達呈正相關(guān)(P0.01)。3. 以ZNF84 mRNA為靶點的shRNA對宮頸癌SiHa細胞中ZNF84表達的沉默效應(yīng)。Western blotting方法檢測各組細胞中ZNF84表達(以(3-actin為內(nèi)參照)的結(jié)果顯示：ZNF84在SiHa-shRNA-ZNF84細胞中的表達顯著低于其在SiHa細胞和SiHa-shRNA-vect細胞中的表達(P0.01),沉默效率為：95.630%。與SiHa細胞相比,ZNF84在SiHa-shRNA-vect細胞中的表達無明顯差異(P0.05)。4.ZNF84表達沉默對HPV16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞遷移和侵襲能力的影響,Transwell遷移和侵襲實驗的結(jié)果均顯示：SiHa-shRNA-ZNF84細胞穿過小室底膜的細胞數(shù)顯著少SiHa-shRNA-vect細胞(P0.01)結(jié)論1.證明了E6和ZNF84在HPV16 E6表達陽性和陰性的宮頸癌細胞株和不同病變階段宮頸組織中的表達呈正相關(guān)。2.ZNF84表達沉默對HPV16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞的遷移和侵襲能力具有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：宮頸鱗癌 人乳頭瘤病毒16型 鋅指蛋白84 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一部分 從細胞和組織水平分析HPV16 E6與ZNF84表達的關(guān)系12-32
• 1 材料與方法12-21
• 2 結(jié)果21-32
• 第二部分 靶向沉默ZNF84的表達對HPV16 E6表達陽性宮頸癌SiHa細胞遷移和侵襲能力的影響32-42
• 1 材料與方法32-38
• 2 結(jié)果38-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-49
• 綜述：鋅指蛋白的研究進展49-60
• 參考文獻56-60
• 附錄 英文縮略詞60-61
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況61-62
• 致謝62-63
• 個人簡歷63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張霞;千新來;崔靜;李新強;李永真;張潔;趙杰;治亞平;;乳腺良、惡性病變組織中Livin和Smac的表達[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年04期

  本文關(guān)鍵詞：ZNF84在HPV16相關(guān)宮頸鱗癌發(fā)生與演進中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：263538