【摘要】：【研究目的】宮頸癌在全球范圍內(nèi)是女性腫瘤中的高發(fā)疾病,盡管有廣泛的篩查和先進(jìn)的治療手段,致死率有所降低,5年生存率有較大提高,但仍然存在較高的罹患率和病死率。早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌并進(jìn)行有效治療,對提高患者生存率和生存質(zhì)量有重要意義。宮頸癌發(fā)病原因未明,目前公認(rèn)的是人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)持續(xù)感染是發(fā)生宮頸癌的重要原因。有研究提出HPV與雌激素協(xié)同作用可能促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,雌激素和孕酮可能促進(jìn)HPV DNA整合到宿主細(xì)胞基因組中,雌激素受體α(Estrogen Receptor alpha,ERα)表達(dá)下調(diào)是高危型HPV感染的宮頸病變進(jìn)程中的一種早期改變。G蛋白偶聯(lián)受體30(G-protein coupled receptor 30,GPR30)與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥等有關(guān)。有學(xué)者認(rèn)為GPR30在宮頸癌組織中的表達(dá)提示患者預(yù)后良好。孕酮促進(jìn)HPV DNA與ras致癌基因?qū)λ拗骷?xì)胞致癌性轉(zhuǎn)化作用,并增加E6和E7的表達(dá),但有關(guān)性激素在宮頸癌病變中的作用研究較少,與HPV感染的關(guān)系知之甚少,還有待進(jìn)一步研究。本課題為進(jìn)一步研究雌激素受體與宮頸病變的關(guān)系,尋找宮頸癌的輔助治療藥物,檢測雌激素受體家族ERα、GPR30及孕激素受體(Progesterone Receptor,PR)、核增殖指數(shù)Ki67、多腫瘤抑制基因p16在宮頸病變中的表達(dá)及其變化趨勢,探討性激素在宮頸病變中的作用。檢測雌激素受體拮抗劑(Selective Estrogen Receptor Modulator,SERM)-Raloxifene對癌細(xì)胞生長的影響,尋找宮頸癌的輔助治療或聯(lián)合治療藥物,以改善腫瘤細(xì)胞的耐藥性�！静牧吓c方法】1.收集活檢及手術(shù)切除標(biāo)本的石蠟包埋組織60例,其中正常宮頸組織10例,低級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(LSIL)11例,高級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(HSIL)21例,宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)18例。進(jìn)行免疫組織化學(xué)(IHC)染色檢測ERα、GPR30、PR、Ki67、p16在宮頸病變中的表達(dá)。2.選擇宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株C33-A(HPV-)和Caski(HPV16+)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),給予雌激素受體拮抗劑Raloxifene藥物,觀察細(xì)胞生長情況,并收集細(xì)胞蛋白進(jìn)行Western Blot定量檢測ERα表達(dá),評估Raloxifene對宮頸癌細(xì)胞生長的影響�！狙芯拷Y(jié)果】1.石蠟包埋組織IHC檢測結(jié)果:(1)ERα染色評分:正常宮頸組織平均分10.30,LSIL平均分9.09,HSIL平均分6.57,SCC平均分3.68,P0.001,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)GPR30染色評分:正常組GPR30平均分2.00,LSIL組平均分3.18,HSIL組平均分3.38,SCC組平均分3.63,P0.05,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)PR染色評分:正常組PR平均分3.00,LSIL組平均分2.45,HSIL組平均分3.00,SCC組平均分2.68,P0.05,組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)Ki-67染色評分:正常組平均分1.40,LSIL組平均分2.27,HSIL組平均分3.10,SCC組平均分3.47,P0.001,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)P16染色評分:正常組平均分0.001,LSIL組平均分1.09,HSIL組平均分2.10,SCC組平均分2.61,P0.001,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.細(xì)胞藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果:Raloxifene抑制細(xì)胞株C33A和Caski細(xì)胞內(nèi)ERα蛋白表達(dá),觀察細(xì)胞生長受抑制,陰性對照組ERα蛋白灰度值與給藥組比較,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�！窘Y(jié)論】1.ERα表達(dá)與宮頸病變進(jìn)程有關(guān),正常宮頸組織和LSIL組織ERα高表達(dá),隨著宮頸病變進(jìn)展ERα表達(dá)逐漸減少,宮頸癌及高級別病變ERα表達(dá)減少或缺失。2.GPR30與宮頸病變進(jìn)程有關(guān),正常宮頸組織和LSIL組織GPR30低表達(dá)或不表達(dá),HSIL組織和SCC中GPR30過表達(dá)。3.PR表達(dá)與宮頸病變程度無明顯關(guān)聯(lián)性,不能作為判斷宮頸病變程度的指標(biāo)。4.Ki-67和p16與宮頸病變進(jìn)程有關(guān),正常宮頸組織不表達(dá)P16,Ki-67僅在宮頸基底細(xì)胞表達(dá),隨著宮頸病變進(jìn)展Ki-67和P16表達(dá)逐漸增多或高表達(dá)。5.Raloxifene通過特異性阻斷癌細(xì)胞內(nèi)ERα受體表達(dá),抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖。綜上所述,ERα、GPR30、Ki-67、p16在不同宮頸病變中的表達(dá)具有差異性,隨著宮頸病變惡性級別的增高,GPR30、Ki-67、p16表達(dá)呈上升趨勢;ERα表達(dá)程度與之相反,隨著宮頸病變惡性程度的增高,ERα表達(dá)降低或缺失。Raloxifene可以特異性降低宮頸癌細(xì)胞中ERα蛋白表達(dá)水平,抑制細(xì)胞生長,期望能作為宮頸癌輔助治療藥物。
【圖文】：

圖 1：HPV 感染與宮頸腫瘤形成機(jī)制[15]雌激素能刺激女性生殖道正常上皮的生長和分化，其體調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子雌激素受體α（ERα）而發(fā)揮作用的[，促進(jìn)乳腺和子宮內(nèi)膜腫瘤的發(fā)展，，這些腫瘤累計(jì)占[20]。ERα、ERβ、G 蛋白偶聯(lián)受體 30（GPR30）同屬又稱 ESR 1）位于 6q25 染色體上，由八個外顯子和 140,000 堿基[21-22]。ERα主要表達(dá)于垂體前葉、子宮

收集大理大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 2013 年-2017 年病理診斷為 LSIL、HSIL、SCC 病例共 927 例，其中 LSIL308 例、HSIL388 例、SCC178 例，將不同宮頸病變類型劃分相同的年齡區(qū)間，進(jìn)行流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)，探討相同年齡在不同宮頸病變中的發(fā)病率有無差異，每一病變的發(fā)病年齡高峰有無差異。表 1-1 不同宮頸病變年齡分布情況病變年齡LSIL HSIL SCC 合計(jì)≤30 42（13.60%) 27（7%） 4（2.25%） 7331-40 86（27.9%） 101（26%） 23（12.92%） 21041-50 126（40.90%） 165（42.50%） 64（35.96%） 35551-60 45（14.60%） 65（16.80%） 51（28.65%） 161≥61 9（2.90%） 30（7.70%） 36（20.22%） 75合計(jì) 308 388 178 874
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2631924