【摘要】：研究背景:薄型子宮內(nèi)膜的定義迄今尚未達(dá)成明確共識。適宜厚度的子宮內(nèi)膜為受精卵成功宮腔內(nèi)種植的必要條件。相關(guān)研究表明,在一定情況下,妊娠率與患者年齡及胚胎質(zhì)量無明顯關(guān)系,而與子宮內(nèi)膜厚度呈正相關(guān)。子宮內(nèi)膜過薄可能與螺旋動脈及卵巢動脈相關(guān),而動脈血流的灌注不足不僅影響受精卵著床,還可能由于局部缺氧不利于胚胎生長。薄型子宮內(nèi)膜不僅影響受精卵種植,還可增加生化妊娠/自然流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也是月經(jīng)過少,閉經(jīng)及不孕等的重要影響因素。薄型子宮內(nèi)膜的病因至今未明,全身因素(年齡及內(nèi)分泌),局部因素(宮腔操作史及子宮疾病史),外用藥物及其他基礎(chǔ)疾病因素,隱匿性不明因素等均被提出為薄型子宮內(nèi)膜發(fā)生發(fā)展過程的促進(jìn)因素;至今尚無任何學(xué)說系統(tǒng)闡述該疾病的發(fā)生發(fā)展過程;也尚無任何治療方式被證明顯著有效。因此探究該疾病可能的發(fā)病機(jī)制及治療途徑尤為必要。研究目的:1.通過雷帕霉素藥物治療雙側(cè)子宮動脈結(jié)扎的大鼠薄型子宮內(nèi)膜模型,在動物水平上研究雷帕霉素對薄型子宮內(nèi)膜的療效及可能的分子機(jī)制。2.通過雷帕霉素及3-MA藥物處理炎癥環(huán)境中的人子宮內(nèi)膜原代細(xì)胞,在細(xì)胞水平上探究雷帕霉素治療薄型子宮內(nèi)膜的分子機(jī)制。研究方法:1.利用周齡為8-10周的雌性SD大鼠,建立雙側(cè)子宮動脈結(jié)扎的子宮缺血缺氧薄型子宮內(nèi)膜模型并用雷帕霉素干預(yù)4周后,對離體子宮進(jìn)行切片、染色并組織形態(tài)學(xué)分析;RT-PCR檢測子宮內(nèi)膜的表型蛋白及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,初步探究雷帕霉素對缺血缺氧的子宮內(nèi)膜的影響及潛在分子機(jī)制。2.分離、培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞(HEEC)及間質(zhì)細(xì)胞(HESC);采用免疫熒光方法鑒定原代細(xì)胞;不同濃度的IL-1β分別處理HEEC及HESC,免疫熒光及Western blot檢測子宮內(nèi)膜標(biāo)志性蛋白Vimentin及Cytokeratin 8,自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3及p-mTOR的蛋白表達(dá)水平;雷帕霉素及3-MA分別干預(yù)IL-1β預(yù)處理的HEEC及HESC,免疫熒光及Western blot檢測子宮內(nèi)膜標(biāo)志性蛋白Vimentin及Cytokeratin 8,自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3及p-mTOR的蛋白表達(dá)水平,研究二者的相關(guān)性。研究結(jié)果:1.動情周期同一時(shí)期內(nèi),手術(shù)組的子宮內(nèi)膜測量厚度較假手術(shù)組減少;手術(shù)給藥組的子宮內(nèi)膜測量厚度較手術(shù)對照組增加;手術(shù)組的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志性蛋白vimentin的mRNA水平較假手術(shù)組減少,而子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞標(biāo)志性蛋白keratin8的mRNA水平各組間無顯著差異;自噬相關(guān)指標(biāo)的mRNA水平較假手術(shù)組減少;手術(shù)給藥組的子宮內(nèi)膜間質(zhì)上皮細(xì)胞標(biāo)志性蛋白vimentin的mRNA水平較手術(shù)對照組增加,子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞標(biāo)志性蛋白keratin8兩組間無顯著差異,自噬相關(guān)指標(biāo)Beclin1的mRNA水平較手術(shù)對照組增加,LC3B的mRNA水平較手術(shù)對照組無顯著差異。2.IL-1β能抑制子宮內(nèi)膜兩種重要細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白的表達(dá),IL-1β濃度為20ng/ml時(shí),標(biāo)志性蛋白均受到明顯抑制,為細(xì)胞水平上模擬薄型子宮內(nèi)膜病理生理過程的適宜造模濃度。3.IL-1β雙向調(diào)控HESC及HEEC的自噬水平;低濃度時(shí)促進(jìn)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá),高濃度時(shí)抑制自噬蛋白的表達(dá),當(dāng)濃度為20ng/ml時(shí),兩種細(xì)胞自噬均被明顯抑制。4.HESC及HEEC的表型蛋白與自噬水平存在一定相關(guān)性,自噬促進(jìn)表型蛋白的表達(dá);IL-1β通過雙向調(diào)控HESC及HEEC自噬水平,進(jìn)而影響其表型蛋白的表達(dá);雷帕霉素可上調(diào)HESC及HEEC的自噬水平,拮抗高濃度IL-1β對表型蛋白的抑制作用。研究結(jié)論:1.雷帕霉素通過調(diào)控子宮內(nèi)膜細(xì)胞自噬水平,減緩大鼠薄型子宮內(nèi)膜的形成。2.不同濃度的IL-1β調(diào)控HESC及HEEC的標(biāo)志性蛋白的表達(dá)。3.不同濃度的IL-1β雙向調(diào)控HESC及HEEC的自噬水平。4.雷帕霉素通過調(diào)控自噬,拮抗IL-1β對HESC及HEEC表型蛋白的抑制作用。
【圖文】：

大鼠薄型子宮內(nèi)膜的造模方式

圖 1-2 各組大鼠體重情況；Sham + DMSO：假手術(shù)對照組，Sham + RA：假手術(shù)給藥組；Operated + DMSO：手術(shù)對照組；Operated + RA：手術(shù)給藥組。如圖 1-2 所示，，各組大鼠在處理前體重?zé)o明顯差異（P＞0.05），在藥物處
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R711.74

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本文編號：2626595