發(fā)布時(shí)間：2020-04-11 22:25

【摘要】：目的:檢測(cè)二肽基肽酶8(DPP8)在宮頸癌組織和細(xì)胞中的表達(dá),評(píng)估DPP8蛋白表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系,研究DPP8對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其可能的機(jī)制。方法:采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)宮頸癌組織中DPP8蛋白表達(dá)水平,評(píng)估DPP8蛋白表達(dá)水平與宮頸癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。采用Western Blot和Real Time PCR方法檢測(cè)兩種宮頸癌細(xì)胞系和一種宮頸正常永生化細(xì)胞系中DPP8蛋白和mRNA表達(dá)水平。采用靶向DPP8基因的siRNA下調(diào)HeLa和SiHa細(xì)胞中DPP8基因的表達(dá)。采用靶向DPP8基因的pcDNA3.1-Flag上調(diào)HeLa和SiHa細(xì)胞中DPP8基因的表達(dá)。EDU測(cè)定HeLa和SiHa細(xì)胞增殖率。流式細(xì)胞PI單染法檢測(cè)HeLa和SiHa細(xì)胞各個(gè)增殖時(shí)期細(xì)胞比例的變化。流式細(xì)胞Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)HeLa和SiHa細(xì)胞各個(gè)凋亡時(shí)期細(xì)胞比例的變化。Transwell小室法檢測(cè)HeLa和SiHa細(xì)胞侵襲和遷移能力的改變。同時(shí),Westem Blot和Real Time PCR方法檢測(cè)Cyclin D1、BAX、Bcl-2、MMP2、MMP9的蛋白和mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果:與正常宮頸組織相比,宮頸癌組織中的DPP8蛋白表達(dá)明顯增加。DPP8蛋白表達(dá)水平與宮頸癌患者的年齡、臨床病理分型無明顯相關(guān)性(P0.05),但是DPP8蛋白表達(dá)水平與宮頸癌患者組織病理分級(jí)、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(P0.05)。下調(diào)DPP8表達(dá)后,HeLa和SiHa細(xì)胞的增殖能力減弱。下調(diào)DPP8表達(dá)后,處于增殖時(shí)期的HeLa和SiHa細(xì)胞比例明顯減少,處于G1期的HeLa和SiHa細(xì)胞比例明顯增多,處于S期和G2期的HeLa和SiHa細(xì)胞比例明顯減少,處于早期凋亡時(shí)期的HeLa和SiHa細(xì)胞比例明顯增多,侵襲和遷移到Transwell小室濾膜底層的HeLa和SiHa細(xì)胞數(shù)目顯著減少(P0.05)。上調(diào)DPP8表達(dá)時(shí),處于增殖時(shí)期的SiHa細(xì)胞比例明顯增多,處于G1期的HeLa和SiHa細(xì)胞比例明顯減少,處于S期和G2期的HeLa和SiHa細(xì)胞比例明顯增加,侵襲和遷移到Transwell小室濾膜底層的HeLa和SiHa細(xì)胞數(shù)目明顯增多(P0.05)。DPP8 還能調(diào)控 HeLa 和 SiHa細(xì)胞中 CyclinD1、Bc1-2、Bax、MMP2、MMP9的表達(dá)。DPP8表達(dá)下調(diào)時(shí),CyclinD1、BAX、MMP2、MMP9蛋白和mRNA的表達(dá)量降低,BCL-2蛋白和mRNA表達(dá)量增高(P0.05)。DPP8上調(diào)時(shí)CyclinD1、BAX、MMP2、MMP9蛋白和mRNA表達(dá)明顯升高,BCL-2蛋白和mRNA表達(dá)量減少(P0.05)。結(jié)論:與正常宮頸組織相比,DPP8蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)增加,與宮頸D1、Bc1-2、BAX、MMP2、MMP9的表達(dá)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲,抑制宮頸癌細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為DPP8作為宮頸癌治療靶點(diǎn)提供了新的依據(jù)。
【圖文】：

癌細(xì)胞系（ＨｅＬａ）、宮頸上皮永生化細(xì)胞系（Ｈ８）中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與逡逑正常宮頸永生化細(xì)胞Ｈ８相比，在ＳｉＨａ和ＨｅＬａ細(xì)胞中ＤＰＰ８表達(dá)量較高，差異均逡逑有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（；？＜０．０５）。（見圖２）逡逑２－°１邐g逡逑ＨｅＬａ邐ＳｉＨａ邐Ｈ８邐｜邋１５＇邐ｔ逡逑ｏｐｐｓ邋ｍ邋ｒｎｍ邋ｍｍ邐Ｉ－邋■邋■邋ｍ逡逑ｓａｐｄｈ邐°0邋ｓ＇邋Ｗ逡逑圖２宮頸癌細(xì)胞系中ＤＰＰ８蛋白及ｍＲＮＡ表達(dá)水平逡逑２．３瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ后ＤＰＰ８的表達(dá)逡逑２．３．１測(cè)定轉(zhuǎn)染不同ｓｉＲＮＡ后ＤＰＰ８蛋白及ｍＲＮＡ的表達(dá)水平逡逑分別用邋ｓｉＲＮＡ－ＮＣ、ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋１、ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋２、ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋３、逡逑ｓｉＲＮＡ－ＤＰＰ８邋４轉(zhuǎn)染ＳｉＨａ和ＨｅＬａ細(xì)胞

轉(zhuǎn)染后SiHa細(xì)胞和HeLe細(xì)胞中DPPB蛋白的裊達(dá)
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Sumaiya Chowdhury;Yiqian Chen;Tsun-Wen Yao;Katerina Ajami;Xin M Wang;Yury Popov;Detlef Schuppan;Patrick Bertolino;Geoffrey W McCaughan;Denise MT Yu;Mark D Gorrell;;Regulation of dipeptidyl peptidase 8 and 9 expression in activated lymphocytes and injured liver[J];World Journal of Gastroenterology;2013年19期

2 ;Expression of a novel dipeptidyl peptidase 8(DPP8)transcript variant,DPP8-v3,in human testis[J];Asian Journal of Andrology;2005年03期

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本文編號(hào)：2623912