本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的HER2-shRNA對卵巢癌SKOV3細胞化療敏感性的體內(nèi)外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討HER2-短發(fā)夾狀(sh)RNA(HER2-short hairpin RNA,HER2-sh RNA)慢病毒載體體外感染人卵巢癌細胞SKOV3后,建立穩(wěn)定表達細胞株,研究其生物學(xué)行為的變化及其對順鉑化療敏感性的變化,并通過體內(nèi)移植瘤實驗研究靶向沉默人表皮生長因子受體2(HER2)基因后對卵巢癌化療敏感性的影響,探索RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)在卵巢癌基因治療方面的可行性。方法:利用本室保存的靶向HER2基因HER2-sh RNA慢病毒表達載體和陰性對照序列慢病毒載體感染人卵巢癌細胞SKOV3;利用嘌呤霉素加壓篩選,建立穩(wěn)定表達HER2-sh RNA的SKOV3細胞株(KD)及陰性對照細胞株(NC),組成KD組和NC組,以未感染的SKOV3細胞為CON組,體外通過Real time PCR和Western blot技術(shù)檢測3組細胞的HER2 m RNA及蛋白的表達;Transwell細胞侵襲實驗檢測3組細胞的侵襲能力;CCK-8法測定3組細胞對不同順鉑濃度(0、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μg/m L)的化療敏感性的變化;將各實驗組細胞接種于裸鼠,經(jīng)尾靜脈注射順鉑注射液(DDP)治療后,檢測各組裸鼠移植瘤的成瘤率、成瘤時間、瘤體大小、瘤體重量;免疫組化測定各實驗組HER2蛋白表達。結(jié)果:經(jīng)嘌呤霉素加壓篩選獲得穩(wěn)定表達有效干擾序列和陰性對照序列的實驗細胞株,通過熒光顯微鏡觀察及流式細胞學(xué)檢測,NC組和KD組的熒光表達率均在96%以上。Real time PCR結(jié)果顯示CON、NC、KD組細胞的HER2 m RNA相對含量(HER2/β-actin)分別為1.002±0.078、0.956±0.314、0.047±0.016,KD組HER2 m RNA的含量與CON和NC組相比明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示CON組、NC組及KD組HER2蛋白的相對表達量分別為(0.487±0.012)、(0.447±0.021)和(0.124±0.013),KD組明顯低于NC和CON組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。Transwell細胞侵襲實驗結(jié)果顯示KD組細胞侵襲能力顯著下降。隨著順鉑濃度的增加,三組細胞生長都受到抑制,但KD組細胞生長速度在順鉑濃度"g2.5μg/m L時明顯較CON組和NC組慢(P0.05),CON和NC組細胞兩組比較無顯著差異(P0.05)。體內(nèi)動物實驗結(jié)果顯示KD組卵巢癌移植瘤經(jīng)順鉑治療后較其他組平均瘤體體積、瘤體重量明顯減小(P0.05);免疫組化結(jié)果亦顯示KD+DDP組HER2蛋白的表達明顯下調(diào)。結(jié)論:慢病毒介導(dǎo)的HER2-sh RNA可以有效抑制HER2基因的表達,增加卵巢癌對順鉑的化療敏感性。
【關(guān)鍵詞】：卵巢腫瘤 腫瘤移植 RNA干擾 順鉑
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 實驗流程11-12
• 第一部分 HER2-SHRNA慢病毒載體對人卵巢癌細胞SKOV3 的體外實驗研究12-32
• 1 材料12-14
• 2. 方法14-20
• 3 實驗結(jié)果20-29
• 4 討論29-32
• 第二部分 HER2-SHRNA慢病毒載體對人卵巢癌細胞SKOV3 化療敏感性的體內(nèi)實驗研究32-39
• 1 材料32-33
• 2 方法33-34
• 3 結(jié)果34-37
• 4 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-43
• 綜述：HER2 在腫瘤治療中的研究進展43-52
• 參考文獻48-52
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文52-53
• 中英文對照縮略詞表53-54
• 致謝54-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：262151