【摘要】：目的:子宮頸癌是全球第四常見的女性惡性腫瘤,是全球一項重大的健康挑戰(zhàn)。2015年統(tǒng)計調查發(fā)現(xiàn),低收入和中等收入國家中約有27萬例宮頸癌患者死亡,這些國家的死亡率是發(fā)達國家的18倍。盡管近年來宮頸癌篩查的覆蓋面在不斷擴大,治療手段也隨著技術革新在進步。但是對于HPV感染、宮頸癌前病變及宮頸癌的診斷的準確性和治療的有效性仍存在較大的個體差異及局限性。青蒿素(Artemisinin,ARS)一直作為有效的抗瘧藥物為人們所熟知,研究表明其在抗癌、抗病毒、抗寄生蟲、抗真菌、過敏性炎癥、特異性炎癥、感染性炎癥以及白血病治療均有顯著效果。因此本研究擬從雙氫青蒿素的抗腫瘤的特性出發(fā),明確其對宮頸癌細胞的作用及其機制。方法:1.收集宮頸炎癥組織,低級別鱗狀上皮內病變(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高級別鱗狀上皮內病變(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)、宮頸鱗狀細胞癌(Cervical squamous cell carcinoma)組織共172例。使用免疫組化方法檢測不同級別宮頸病變組織中ki67、p16表達水平。2.使用宮頸癌HeLa細胞系作為宮頸癌細胞離體模型,CCK-8利用細胞活性和細胞毒性檢測試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)測定離體水平雙氫青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)作用宮頸癌細胞的50%抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50值),及藥物對宮頸癌細胞的增值能力的影響。使用western blot檢測細胞中凋亡相關蛋白及遷徙相關蛋白的表達水平;使用細胞劃痕實驗檢檢測雙氫青蒿素對于宮頸癌細胞遷移能力的影響。通過western blot檢測藥物處理后HeLa細胞中ki67、p16的表達情況,探究青蒿素是否同時具有抵抗HPV病毒基因引起的宮頸細胞惡性增殖的藥物作用。結果:1.ki67、p16在不同宮頸組織中的陽性表達率如下:其中炎癥組p16的陽性表達率為11.11%(4/36),低級別宮頸上皮內瘤變組的陽性表達率為60.00%(30/50),高級別宮頸上皮內瘤變組的陽性表達率為94.34(50/53),宮頸癌組陽性表達率為100.00%(33/33)。其中炎癥組ki67的陽性表達率為30.56%(11/36),低級別宮頸上皮內瘤變組的陽性表達率為56.00%(28/50),高級別宮頸上皮內瘤變組的陽性表達率為94.34(50/53),宮頸癌組陽性表達率為100.00%(33/33)。不同級別宮頸病變組織中的p16、ki67的陽性表達率進行比較(χ_1~2=87.474,P_10.001;χ_2~2=61.477,P_20.001),不同宮頸組織中p16、ki67的表達率差異有統(tǒng)計學意義。P16、ki67的陽性表達率與宮頸組織病變等級呈正相關。2.雙氫青蒿素對HeLa細胞的藥物作用主要以下幾個方面:(1)CCK-8細胞增殖活力實驗結果提示青蒿素對宮頸癌細胞增殖呈時間和濃度依賴性抑制作用。經(jīng)計算測得青蒿素對于HeLa細胞的IC50值為22.86±3.765umol/l。(2)可通過線粒體及內質網(wǎng)途徑促進HeLa細胞的凋亡。其中線粒體途徑中促凋亡蛋白clever-Caspase3、clever-Caspase9、clever-Caspase12表達量均上升,抑制凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表達下降。內質網(wǎng)應激途徑中相關蛋白Chop表達量增多。(3)細胞劃痕實驗表明DHA抑制宮頸癌細胞的遷徙。雙氫青蒿素處理后,HeLa細胞中E-鈣粘蛋白表達量增加。(4)青蒿素可能存在抵抗HPV感染引起的細胞惡性增殖的作用。檢測藥物處理36小時后HeLa中ki67蛋白表達明顯減少,p16蛋白的表達增加。結論:雙氫青蒿素對宮頸癌的發(fā)生發(fā)展具有一定的抑制作用,有著廣闊的臨床應用前景,可作為未來宮頸癌新型防治武器。
【圖文】：

圖①為正常對照組 HeLa 細胞放大 100 倍顯微鏡下圖像，圖②為圖①中方框區(qū)域放大圖像。圖③為實驗組 20umol/L 的 DHA 處理 24 小時后 HeLa 細胞放大 100 倍顯微鏡下圖像，圖④為圖③中方框區(qū)域放大圖像。圖 B
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33

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