【摘要】：在全球范圍內(nèi),宮頸癌的發(fā)病率僅低于乳腺癌,它在女性癌癥中名列第二,極大地?fù)p害了女性的健康。目前化療是宮頸癌最常見(jiàn)的治療選擇之一,特別是在中晚期宮頸癌的治療中起著重要作用。作為一種高效的廣譜抗癌藥物,阿霉素獨(dú)自或與聯(lián)合其他抗腫瘤藥物對(duì)宮頸癌的治療有較好的效果,是一種較強(qiáng)力的化療藥物。而化療過(guò)程中產(chǎn)生的阿霉素耐受現(xiàn)象是影響患者臨床化療治愈率的重要因素之一,但其分子機(jī)理還沒(méi)有完全查明。因此本課題采用人宮頸癌Hela細(xì)胞以及體外構(gòu)建的宮頸癌阿霉素耐藥細(xì)胞Hela/Dox作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞及其相應(yīng)的阿霉素耐藥細(xì)胞Hela/Dox進(jìn)行測(cè)序,從而得到兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本之間差異表達(dá)的基因,再結(jié)合GO、COG、KEGG三大數(shù)據(jù)庫(kù)的注釋結(jié)果以及相關(guān)文獻(xiàn),能夠比較全面的獲得該細(xì)胞中的基因功能及其結(jié)構(gòu),探尋與宮頸癌阿霉素獲得性耐藥相關(guān)的靶基因和信號(hào)通路,從而篩選出宮頸癌阿霉素耐藥發(fā)生過(guò)程中的分子靶標(biāo)。最后我們利用RNA干擾技術(shù)對(duì)分析所得的與宮頸癌阿霉素耐藥相關(guān)的基因進(jìn)行敲減,進(jìn)一步證實(shí)該靶標(biāo)對(duì)阿霉素獲得性耐藥中的作用。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序共獲得2562個(gè)差異基因,其中有1269個(gè)基因在Hela/Dox細(xì)胞樣本中表達(dá)為上調(diào),1293個(gè)基因在Hela/Dox細(xì)胞樣本中表達(dá)為下調(diào)。并且KEGG的注釋結(jié)果表明富集差異基因最多的通路有Pathways in cancer、P13K-Akt、MAPK、HTLV-1 infection pathway、Rap1、Proteoglycans in cancer等,推測(cè)這些信號(hào)途徑可能參與人宮頸癌阿霉素耐藥形成過(guò)程。我們選取基因表達(dá)差異倍數(shù)在前100的基因,將之對(duì)應(yīng)在KEGG通路中,發(fā)現(xiàn)只有39個(gè)基因可以對(duì)應(yīng)至相應(yīng)的通路中,再查閱諸多文獻(xiàn)的研究結(jié)果,發(fā)現(xiàn)WNT10B這個(gè)基因可能與人宮頸癌Hela細(xì)胞阿霉素耐藥機(jī)制相關(guān)。因此我們選擇WNT10B基因作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的主要研究對(duì)象,當(dāng)利用干擾RNA敲減Hela/Dox細(xì)胞株中的Wnt10B基因后,Hela/Dox細(xì)胞對(duì)阿霉素的藥敏性得到明顯增強(qiáng),敲除前后Hela/Dox細(xì)胞的耐藥指數(shù)是1.37,對(duì)其耐藥性有一定的緩解作用。以上結(jié)果表明,Wnt10B基因在控制Hela細(xì)胞阿霉素耐藥過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用,為宮頸癌的化療耐藥奠定了理論基礎(chǔ),同時(shí)也給宮頸癌的精準(zhǔn)治療提供了新的方向。
【圖文】：

圖 1 阿霉素化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure 1 The chemical structure of doxorubicin作用機(jī)理如圖 2 所示，它是通過(guò)嵌入細(xì)胞 DNA 的堿基對(duì)DNA 的空間構(gòu)架，從而阻滯細(xì)胞中 DNA 的復(fù)制以及 DNA 所期性非特異性藥物，可以在腫瘤細(xì)胞的各級(jí)生長(zhǎng)周期發(fā)揮

圖 1 阿霉素化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure 1 The chemical structure of doxorubicin霉素的作用機(jī)理如圖 2 所示，它是通過(guò)嵌入細(xì)胞 DNA 的堿基對(duì)中，破環(huán) DNA 的空間構(gòu)架，從而阻滯細(xì)胞中 DNA 的復(fù)制以及 DNA 所控制為周期性非特異性藥物，可以在腫瘤細(xì)胞的各級(jí)生長(zhǎng)周期發(fā)揮其毒
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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2 司馬妮;王薇;徐茜;田訓(xùn);羅愛(ài)月;盧運(yùn)萍;王世宣;馬丁;;人乳頭瘤病毒16型E6、E7反義RNA對(duì)人宮頸癌SiHa細(xì)胞的惡性逆轉(zhuǎn)作用[J];癌癥;2007年01期

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本文編號(hào)：2614291