【摘要】：惡性腫瘤嚴(yán)重危害人們的身心健康,隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高,腫瘤的發(fā)病率呈逐年上升的態(tài)勢(shì),目前卵巢癌已經(jīng)成為威脅廣大女性健康最常見的惡性腫瘤之一。早期卵巢癌經(jīng)過治療五年生存率超過70%,而初診時(shí)已經(jīng)晚期的卵巢癌五年生存率卻不到30%。卵巢癌的一線治療方案是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和以鉑類、紫杉醇為基礎(chǔ)的化療。盡管大多數(shù)患者對(duì)初始治療方案較為敏感,但仍有超過70%的患者在初次治療緩解后的16-18個(gè)月內(nèi)會(huì)出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,并最終死于卵巢癌。近年來(lái),卵巢癌的死亡率并沒有實(shí)質(zhì)性的減少。因此,我們需要尋找新的分子生物學(xué)標(biāo)記物及早期診斷和治療的方法以改善患者的預(yù)后。研究顯示BRCA1基因突變主要存在于家族遺傳性乳腺癌/卵巢癌中,在散發(fā)性卵巢癌中BRCA1基因突變率很低。然而散發(fā)性卵巢癌與家族遺傳性卵巢癌卻常常具有十分相似的生物學(xué)及臨床病理學(xué)表現(xiàn)。所以我們推測(cè),在散發(fā)性卵巢癌中除了基因突變外還可能存在其他分子生物學(xué)事件導(dǎo)致BRCA1等基因生物活性的異�！，F(xiàn)已被廣泛認(rèn)可的是在散發(fā)性卵巢癌中存在抑癌基因BRCA1的表觀遺傳學(xué)異常,即基因啟動(dòng)子的甲基化。多篇文獻(xiàn)表明,抑癌基因見ASSF1A的甲基化也是卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中非常重要的分子生物學(xué)事件。而且甲基化抑制劑可以增加腫瘤細(xì)胞中免疫相關(guān)分子的表達(dá),甲基化抑制劑與免疫抑制劑聯(lián)合應(yīng)用可以改善腫瘤患者的預(yù)后,明顯延長(zhǎng)生存期。與幾乎不可逆的基因突變不同,甲基化改變是可逆的,該特性提示甲基化有可能作為潛在的治療靶標(biāo)。本研究第一部分?jǐn)M探討B(tài)RCA1、RASSF1A基因甲基化與PD-L1蛋白表達(dá)之間的相互關(guān)系以及上述分子生物學(xué)標(biāo)記物的表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征、預(yù)后的相關(guān)性,以期為卵巢癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估以及甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑與PD-L1抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用等提供一定的理論依據(jù)和參考。免疫治療近年來(lái)正成為研究的熱點(diǎn),程序性死亡受體1(programmed death-1,PD-1)通路的免疫抑制劑在多種實(shí)體瘤,尤其是在惡性黑色素瘤、腎細(xì)胞癌和非小細(xì)胞肺癌中表現(xiàn)出了強(qiáng)大的抗腫瘤效果。但是對(duì)于晚期卵巢癌,由于體內(nèi)腫瘤負(fù)荷重,抗腫瘤免疫微環(huán)境發(fā)生了改變,機(jī)體不能啟動(dòng)有效的腫瘤免疫應(yīng)答反應(yīng),從而對(duì)單一的免疫治療不敏感。對(duì)于弱免疫源性的腫瘤如ID8卵巢癌,單一的免疫治療效果也并不理想。本研究第二部分?jǐn)M探索卡鉑聯(lián)合PD-L1抑制劑對(duì)小鼠ID8卵巢癌的抑制作用及其相應(yīng)的免疫學(xué)機(jī)制。本論文的兩部分簡(jiǎn)述如下:第一部分:選取散發(fā)性卵巢癌患者的腫瘤組織,分別用焦磷酸測(cè)序和免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)BRCA1、RASSF1A基因甲基化水平和PD-L1蛋白的表達(dá)情況,探討其與卵巢癌臨床特征、病理因素及預(yù)后的相關(guān)性,并探索BRCA1、RASSF1A甲基化與PD-L1蛋白表達(dá)之間的相互關(guān)系,為卵巢癌患者的早期診斷和個(gè)體化治療提供數(shù)據(jù)及理論基礎(chǔ),同時(shí)也為后續(xù)甲基化抑制劑與PD-L1拮抗劑的聯(lián)合應(yīng)用提供研究方向。結(jié)果顯示,BRCA1高甲基化與漿液性卵巢癌密切相關(guān)(P0.05);RASSF1A高甲基化與非漿液性卵巢癌、早期(FIGOI+II)卵巢癌及卵巢癌的低復(fù)發(fā)相關(guān)(P0.05)。RASSF1A基因高甲基化與早期卵巢癌存在顯著相關(guān)性提示RASSF1A甲基化可能是卵巢癌發(fā)生的早期生物學(xué)事件,從而為卵巢癌的早期診斷提供潛在的分子生物學(xué)標(biāo)記物。PD-L1的表達(dá)與卵巢癌的臨床病理特征、預(yù)后及BRCA1、RASSF1A基因甲基化狀態(tài)無(wú)顯著相關(guān)性(P0.05)。我們首次報(bào)道了卵巢癌BRCA1、RASSF1A基因甲基化與PD-L1蛋白表達(dá)的關(guān)系,在此基礎(chǔ)上經(jīng)過進(jìn)一步的研究有望為潛在的靶標(biāo)治療及預(yù)后評(píng)估提供一定的理論基礎(chǔ)和依據(jù),從而提高我國(guó)卵巢癌患者個(gè)體化治療的整體水平,推進(jìn)卵巢癌精準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展。第二部分:建立C57BL/6(6-8周齡)小鼠ID8卵巢癌模型,分為四個(gè)不同治療組:空白對(duì)照組、單藥PD-L1抗體組(PD-L1mAb)、單藥卡鉑組及卡鉑+PD-L1抗體聯(lián)合治療組,用藥后觀察腫瘤生長(zhǎng)、腹水形成情況及各組小鼠的總生存時(shí)間,比較各組荷瘤小鼠對(duì)不同治療方案的敏感性。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組小鼠腹水/腹腔灌洗液中腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞CD4+、CD8+、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg)及骨髓源性抑制細(xì)胞(myeloid derived suppressor cell,MDSC)的相對(duì)含量。結(jié)果顯示單藥卡鉑和聯(lián)合治療組較空白對(duì)照和單藥抗體組有較強(qiáng)的抗腫瘤效果,延長(zhǎng)了小鼠的腹水形成時(shí)間和總生存時(shí)間。對(duì)小鼠腹水進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)單藥卡鉑和聯(lián)合治療組明顯增加了腹水中CD4+,CD8+T細(xì)胞的比例而降低了 MDSC和Treg細(xì)胞的比例(P0.05);從而明顯增加了腹水中免疫效應(yīng)CD4+,CD8+ T細(xì)胞與免疫抑制MDSC、Treg細(xì)胞的絕對(duì)比值(P0.05)。這一發(fā)現(xiàn)為晚期難治性卵巢癌治療方案的選擇提供了一定的研究方向和參考。
【圖文】：

４３．８％），生存邋６３邋例（６３／１１２，５６＿３％）。逡逑１１２例卵巢癌患者中，２２例（２２／１１２，１９．６％）出現(xiàn)５及Ｇ４７基因啟動(dòng)子甲基逡逑化（基因啟動(dòng)子區(qū)域ＣｐＧ位點(diǎn)甲基化示意圖如圖１－１所示）�；蚣谆义匣c卵巢癌的組織學(xué)類型有關(guān)（Ｐ＝0．0３１），漿液性卵巢癌患者的甲基化頻率明逡逑顯高于非漿液性卵巢癌患者（２５．３％邋ｖｓ邋８．１％）。班基因甲基化在患者年齡、逡逑月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤側(cè)別、腫瘤分級(jí)、ＦＩＧＯ分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面無(wú)明顯差異（尸＞逡逑０．０５）。１１２例散發(fā)性卵巢癌患者中，ＰＤ－Ｌ１陽(yáng)性表達(dá)者為６６例（６６／１１２，邋５８．９％）。逡逑我們的研宄顯示，ＰＤ－Ｌ１蛋白在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)情況（圖１－２）與患者的臨逡逑床病理特征，包括患者的年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤側(cè)別、組織學(xué)類型、腫瘤分級(jí)、逡逑ＦＩＧＯ分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性（尸＞０．０５）。逡逑２４逡逑

邐１０邐ＬＳ７０ＺＳ３０３Ｓ４０４Ｓ５０ＳＳ６Ｉ）逡逑圖１－１基因啟動(dòng)子區(qū)域ＣＰＧ位點(diǎn)甲基化示意圖。藍(lán)色框中表示９個(gè)ＣｐＧ位點(diǎn)的逡逑甲基化水平，，ａ，從左到右分別為３％、２％、４％、１％、２％、５％、３％、３％、３％，逡逑該樣本甲基化水平為各位點(diǎn)甲基化的平均值，為３％；邋ｂ，從左到右分別為６６％、逡逑７６％、７９％、５９％、６８％、５８％、７３％、５０％、５６％，該樣本甲基化水平為邋６５％。逡逑按照５％的截點(diǎn)，ａ為未甲基化樣本，ｂ為甲基化樣本。逡逑２６逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 趙玲娣;高全立;;抗PD-1通路在腫瘤治療中的研究進(jìn)展[J];癌癥進(jìn)展;2015年01期

本文編號(hào)：2608780