【摘要】：目的:檢測細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal regulates kinase,ERK)蛋白激酶抑制劑FR180204對多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢顆粒細(xì)胞ERK絲氨酸磷酸化及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4(Glucose transporters-4,GLUT-4)蛋白表達(dá)的影響,從分子水平探討PCOS的發(fā)生機(jī)制。方法:收集行體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的PCOS患者和非PCOS患者取卵當(dāng)日卵泡液各20份,分離純化得到黃素化顆粒細(xì)胞。將PCOS患者每份細(xì)胞樣本一分為二,置于2個(gè)培養(yǎng)瓶中分別進(jìn)行培養(yǎng),其中一組培養(yǎng)液中添加FR180204為研究組,即PCOS+IN組(n=20);另一組不添加FR180204,作為PCOS組(n=20)。非PCOS患者的黃素化顆粒細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)作為對照組,即N-PCOS組(n=20)。采用Western blot方法對各個(gè)組別顆粒細(xì)胞中的ERK絲氨酸磷酸化進(jìn)行測定,并分析GLUT-4蛋白的表達(dá)程度。結(jié)果:(1)PCOS組與非PCOS組在年齡、不孕年限、體重指數(shù)、基礎(chǔ)雌二醇、卵泡刺激素、泌乳素、Gn啟動量、Gn總用量方面比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為0.000,1.870,0.828,1.480,0.099,0.261,1.376,0.924,均P0.05);相比于N-PCOS組,PCOS組有較高的基礎(chǔ)促黃體生成激素、睪酮水平以及獲卵數(shù)量,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為7.582,4.577,2.330,均P0.05)。(2)三組患者ERK絲氨酸磷酸化及GLUT-4蛋白表達(dá)量比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F值分別為36.773,593.955,均P0.05);相比于對照組,PCOS組的ERK絲氨酸磷酸化明顯較高,但是其GLUT-4蛋白的表達(dá)程度較低(P0.05);FR180204處理后ERK絲氨酸磷酸化明顯降低,GLUT-4蛋白表達(dá)量仍較N-PCOS組低,但較FR180204未處理組表達(dá)量高(P0.05)。結(jié)論:(1)FR180204在降低ERK絲氨酸磷酸化的同時(shí)還能夠在一定程度上促進(jìn)顆粒細(xì)胞中GLUT-4蛋白的表達(dá);(2)胰島素的兩條信號通路之間存在相互聯(lián)系,FR180204通過降低ERK絲氨酸磷酸化,可抑制MAPK/ERK通路活性,從而使得卵巢顆粒細(xì)胞中PI3K通路的活性得到一定的提升,進(jìn)而促進(jìn)下游蛋白GLUT-4的進(jìn)一步表達(dá);(3)PCOS的發(fā)生與MAPK/ERK通路異常激活密切相關(guān)。
【圖文】：

換液后再觀察，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中紅細(xì)胞幾乎全部去除。48 h及 72 h 后的顆粒細(xì)胞形態(tài)基本無明顯變化。見圖1.1,1.2(Fig.1.1,Fig.1.2)1注:PCOSGroup VS N-PCOSGroup,*P＜0.05

圖 1.1 培養(yǎng)24小時(shí)的細(xì)胞形態(tài)（×100） 圖 1.2 培養(yǎng)24小時(shí)的細(xì)胞形態(tài)（×400）Fig.1.1 The cells after 24 hours cultivation（×100） Fig.1.2 The cells after 24 hours cultivation（×4003 Western blot 蛋白印跡法檢測各組ERK絲氨酸磷酸化及GLUT-4 蛋白表達(dá)3.1 三組患者的 ERK 絲氨酸磷酸化及 GLUT-4 蛋白表達(dá)比較PCOS組患者的ERK絲氨酸磷酸化較N-PCOS 組高，GLUT-4蛋白表達(dá)較N-PCO組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＜0.05)。見圖2.1,2.2(Fig.2.1,Fig.2.2)。3.2 加入 FR180204 后三組患者的 ERK 絲氨酸磷酸化及 GLUT-4 蛋白表達(dá)比較FR180204 處理后 PCOS+IN 組的 ERK 絲氨酸磷酸化明顯降低,但仍高于 N-PCOS組，GLUT-4 蛋白表達(dá)量較 PCOS 組升高，但仍低于 N-PCOS 組低，，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＜0.05)。見圖 2.1,2.2(Fig.2.1,Fig.2.2)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R714.8

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本文編號：2608769