【摘要】：目的:本文旨在通過研究虎杖苷(Polydatin)在改善多囊卵巢綜合征(PCOS)小鼠代謝綜合征及卵泡發(fā)育方面的作用,探究PCOS患者代謝綜合征的發(fā)生、進展的根源及其分子機制,初步探討卵泡膜細胞中雄激素合成的調(diào)節(jié)機制,從源頭為多囊卵巢綜合征的治療及預(yù)防提供新的思路,并且為臨床體外受精-胚胎移植以及卵胞漿內(nèi)單精子注射等輔助生殖治療手段中獲得優(yōu)質(zhì)卵子和胚胎提供新的線索。方法:首先,我們通過脫氫表雄酮(DHEA)誘導(dǎo)建立了PCOS小鼠模型,建模結(jié)束后治療組小鼠給予不同劑量梯度的虎杖苷干預(yù),對照組小鼠給予同等體積的生理鹽水,治療結(jié)束后測定口服葡萄糖耐量(OGTT)和空腹血清胰島素(FINS)水平來評估小鼠胰島素抵抗程度,ELISA試劑盒檢測小鼠血清雌二醇(E2)、黃體生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、血清游離睪酮(FT)的水平,評估虎杖苷對PCOS小鼠HPO軸的影響;卵巢組織石蠟切片IHC方法分析3β-HSD和StAR蛋白的表達水平,RT-PCR手段檢測卵巢組織及體外培養(yǎng)細胞內(nèi)CYP11a1,CYP17a1,3β-HSD,StAR及NR4A1基因的表達水平。結(jié)果:不同劑量(5mg/Kg,10mg/Kg)的虎杖苷分別作用于PCOS小鼠,給藥21天后,發(fā)現(xiàn)各濃度的虎杖苷對PCOS小鼠的體重及血清FSH水平并無明顯影響,各組之間無明顯差異;虎杖苷能夠明顯降低PCOS小鼠血清E2和血清T水平(P0.05);此外,虎杖苷在降低PCOS小鼠血清FINS水平方面也發(fā)揮重要的作用,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),此外,對胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)的分析也驗證了上述結(jié)果,對照組和虎杖苷治療組的胰島素抵抗指數(shù)差異顯著(P0.001);低劑量虎杖苷能夠增加PCOS小鼠血清LH濃度;卵巢內(nèi)卵泡計數(shù)結(jié)果顯示,虎杖苷治療組小鼠卵巢內(nèi)初級卵泡比例減少,處于更高發(fā)育階段的卵泡比例明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),并且在此基礎(chǔ)上,虎杖苷對于總卵泡數(shù)并無明顯影響,各組小鼠總卵泡數(shù)之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);蛋白水平分析發(fā)現(xiàn),治療組小鼠卵巢內(nèi)StAR及3β-HSD蛋白的表達顯著減少(P0.05),與RNA水平分析結(jié)果一致:CYP11a1,NR4A1基因的表達也明顯下調(diào);但是CYP17A1基因的表達水平卻在高劑量組表達增加(P0.01),在10mg/Kg時未見明顯改變;原代卵泡膜細胞內(nèi)RNA水平的分析發(fā)現(xiàn),虎杖苷能顯著下調(diào)CYP11a1,CYP17a1,3β-HSD,StAR及NR4A1基因的表達,且差異顯著(P0.01)。結(jié)論:虎杖苷能夠降低PCOS小鼠血清胰島素水平,減輕其胰島素抵抗狀態(tài);能通過下調(diào)卵泡膜細胞內(nèi)雄激素合成相關(guān)酶(CYP11a1,CYP17a1,3β-HSD,StAR及NR4A1)的表達水平,抑制PCOS小鼠卵巢內(nèi)卵泡膜細胞中雄激素的合成,顯著改善PCOS小鼠的代謝綜合征;能夠減少PCOS小鼠卵巢內(nèi)原始卵泡的募集,促進卵泡的發(fā)育、成熟;在PCOS小鼠的治療上發(fā)揮積極的作用,為探明多囊卵巢綜合征的發(fā)病機制提供新的視角。
【圖文】：

性心臟病的風(fēng)險；能夠在體內(nèi)有效清除細胞內(nèi)產(chǎn)生的氧自由氧化應(yīng)激產(chǎn)物的堆積，保護細胞內(nèi)線粒體的功能[6,7]。此外，虎RT-1，發(fā)揮保護神經(jīng)，治療糖尿病，減輕脂肪堆積的作用，研究通過一方面誘導(dǎo)脂肪細胞發(fā)生凋亡，抑制細胞的分化、增殖，，促代謝[8]，另一方面激活瘦素信號通路[9]，在減重過程中發(fā)揮重要研究發(fā)現(xiàn)，虎杖苷能夠通過激活小鼠體內(nèi) SIRT-1 基因的活性，內(nèi) PGC-1 蛋白的表達，增強肌細胞內(nèi)線粒體的氧化能力，促進改善肌細胞對胰島素的敏感性[10,11]。DNA 聚合酶在細胞的增殖要的作用，聚合酶活性下降可明顯減慢細胞的增殖速度，虎杖苷酶的活性方面的作用顯著，因而能抑制胞內(nèi) DNA 的生物合成胞增殖速度，發(fā)揮顯著抑制多種腫瘤細胞的生長與侵襲（肝癌，結(jié)腸癌細胞，胃癌細胞，白血病等）[12-18]。除上述眾多生物效還具有其他功效，比如抗菌[1,18]，調(diào)節(jié)免疫[19]，舒張呼吸道平滑21]等功效，因此針對于虎杖苷的研究也是近年來研究的熱點。

圖 2. 造模前后小鼠外觀1.6 小鼠口服糖耐量檢測在虎杖苷治療結(jié)束的第二天進行 OGTT 監(jiān)測。虎杖苷治療最后一日夜間禁 8-12h，自由飲水，次日晨取尾靜脈血進行空腹血糖的測定，灌胃服糖劑量：/Kg，然后測定服糖后 30min，60min，120min，180min 的血糖水平。1.7 小鼠血清、卵巢組織的獲取及檢測血清激素指標OGTT 監(jiān)測結(jié)束后立即恢復(fù)小鼠飲食，于當日夜再次對小鼠禁食 8-12h，不水，第二日通過摘除眼球方式收集小鼠血液，然后運用 4℃離心機，3500r 離 15min 后取血清，于-20℃冰箱冷凍保存，以備進行血清指標的檢測。剃干凈側(cè)卵巢周圍組織，一側(cè)卵巢用于石蠟切片的制作，置于 4%多聚甲醛中常溫固，另一側(cè)卵巢用于后期 RNA 實驗，置-80℃冰箱冷凍保存。ELISA 法測定小鼠血清中 E2、FSH、LH、T 及 INS 的水平，操作流程嚴格守試劑盒說明。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R711.75

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8 趙雨U

本文編號：2606699