【摘要】：目的本研究將人胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPDMSCs)在體外誘導(dǎo)為胰島樣細(xì)胞(Islet-like cells,ILCs)后,分別將兩種細(xì)胞植入妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)鼠體內(nèi),檢測(cè)GDM鼠體內(nèi)血糖、脂聯(lián)素、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)的水平,研究hPDMSCs及ILCs對(duì)妊娠期糖尿病的治療效果,為將來(lái)干細(xì)胞治療妊娠期糖尿病提供理論依據(jù)。方法取得健康足月剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦的胎盤(pán),從其中提取出間充質(zhì)干細(xì)胞,進(jìn)行分離、培養(yǎng)及鑒定,將鑒定完畢的間充質(zhì)干細(xì)胞在體外誘導(dǎo)為胰島樣細(xì)胞,并將誘導(dǎo)后的胰島樣細(xì)胞進(jìn)行雙硫腙(DTZ)染色,以確定胰島細(xì)胞的特異性。選擇雌性SD大鼠50只,雄性SD大鼠25只,其中10只雌性大鼠正常飲食喂養(yǎng),另外40只雌性大鼠高糖高脂肪喂養(yǎng),4周后,雄性和雌性大鼠按比例1:2交配,40只雌鼠受孕后注射鏈脲佐菌素(STZ),空腹血糖16.7mmol/L即為GDM鼠造模成功。將10只普通喂養(yǎng)的雌性大鼠定為正常孕鼠組(A組),其余40只GDM鼠隨機(jī)分為4組,即GDM鼠未千預(yù)組(B組)、GDM鼠生理鹽水干預(yù)組(C組)、GDM鼠人胎盤(pán)來(lái)源干細(xì)胞(未誘導(dǎo))干預(yù)組(D組)、GDM鼠胰島樣細(xì)胞干預(yù)組(E組),隨后對(duì)各組進(jìn)行不同處理。在妊娠第6、12、18日檢測(cè)各組空腹血糖,并在剖宮產(chǎn)術(shù)日(妊娠18日)檢測(cè)血清脂聯(lián)素、TNF-α、IL-6。結(jié)果1.從胎盤(pán)中提取出干細(xì)胞進(jìn)行傳代、培養(yǎng),得到的第三代hPDMSCs,通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行鑒定,結(jié)果為CD44和CD105呈陽(yáng)性表達(dá),證實(shí)獲得的細(xì)胞是人胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞,并可用于隨后的研究。2.將hPDMSCs誘導(dǎo)后,隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞形態(tài)從梭形變?yōu)閳A形,并向中央靠攏聚集成團(tuán),誘導(dǎo)分化28天后的干細(xì)胞通過(guò)雙硫腙染色變?yōu)樽丶t色,證明誘導(dǎo)后的細(xì)胞是胰島樣細(xì)胞。3.雌鼠空腹血糖16.7mmol/L則建立GDM鼠模型。實(shí)驗(yàn)共分為五組:正常孕鼠組(A組)、GDM鼠未干預(yù)組(B組)、GDM鼠生理鹽水干預(yù)組(C組)、GDM鼠人胎盤(pán)來(lái)源干細(xì)胞(未誘導(dǎo))干預(yù)組(D組)、GDM鼠胰島樣細(xì)胞干預(yù)組(E組)。妊娠第6、12、18日分別測(cè)量所有實(shí)驗(yàn)組的空腹血糖,同一時(shí)間點(diǎn)4組GDM鼠的血糖水平均比正常孕鼠組(A組)高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);未干預(yù)組(B組)和生理鹽水組(C組)之間血糖水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與B、C組相比,hPDMSCs組(D組)和ILCs組(E組)的血糖水平有所下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);E組在妊娠第12、18日血糖水平均低于D組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);D組、E組組內(nèi)比較,妊娠第12日血糖水平較第6日低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),妊娠第18日和妊娠第12日之間血糖水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與A組相比,B組和C組的脂聯(lián)素水平降低,TNF-α、IL-6水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。B組和C組之間脂聯(lián)素、TNF-α、IL-6水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。D、E組與B、C組比較,脂聯(lián)素水平上升,TNF-α、IL-6水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。D、E組相比較,E組脂聯(lián)素水平較高,TNF-α、IL-6水平較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.人胎盤(pán)來(lái)源干細(xì)胞及胰島樣細(xì)胞均能夠降低GDM鼠血糖,降低TNF-α、IL-6水平,提升脂聯(lián)素水平,其治療GDM鼠有效。2.人胎盤(pán)來(lái)源干細(xì)胞和胰島樣細(xì)胞比較,胰島樣細(xì)胞降低血糖、TNF-α、IL-6及提升脂聯(lián)素水平更明顯,胰島樣細(xì)胞治療GDM鼠的效果優(yōu)于未誘導(dǎo)的人胎盤(pán)來(lái)源干細(xì)胞。
【圖文】：

逡逑（７）加終止液，讀數(shù)。在完成添加終止液之后，測(cè)量光密度（ＯＤ值）。逡逑（８）計(jì)算結(jié)果。各個(gè)所得數(shù)值用平均數(shù)進(jìn)行計(jì)算，畫(huà)標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)其計(jì)逡逑算出樣品的實(shí)際濃度。逡逑（六）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理逡逑使用ＳＰＳＳ１９．０軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所得數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表逡逑示，Ｐ邋＜邋０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)實(shí)驗(yàn)所得的每組數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性逡逑檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布且方差齊，則各組間比較采用方差分析，兩組之間比逡逑較采川ＳＮＫ檢驗(yàn)。逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑（ ）ｈＰＤＭＳＣｓ鑒定結(jié)果逡逑通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)鑒定第三代ｈＰＤＭＳＣｓ，得到結(jié)果：表面抗原ＣＤ４４和ＣＤ１０５逡逑：者均呈卩丨丨性，這Rヅ湯叢醇涑渲剩裕肯赴磯溝吶┐鎰閬嚳�，见哇E�。辶x，

本文編號(hào)：2594189