【摘要】：腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)是一種腫瘤細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子,可特異性誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡。然而,由于很多腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL產(chǎn)生抗性,阻礙了TRAIL的臨床應(yīng)用,因此亟需開(kāi)發(fā)能夠增強(qiáng)TRAIL作用或克服其耐藥性的藥物制劑。本研究將本課題組開(kāi)發(fā)的Hsp90抑制劑SNX-2112與TRAIL聯(lián)合作用,探討SNX-2112與TRAIL協(xié)同誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制。研究結(jié)果表明,SNX-2112可顯著增強(qiáng)TRAIL對(duì)宮頸癌細(xì)胞的增殖抑制作用,SNX-2112與TRAIL聯(lián)合在HeLa細(xì)胞中表現(xiàn)為協(xié)同作用。進(jìn)一步的機(jī)制研究顯示,SNX-2112在TRAIL抗性的HeLa細(xì)胞中可以增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的caspase依賴的細(xì)胞凋亡,并下調(diào)HeLa細(xì)胞內(nèi)Bcl-2,Bcl-XL和FLIP等多個(gè)抗凋亡蛋白的表達(dá)水平,而HeLa細(xì)胞的死亡受體DR5表達(dá)水平則顯著上調(diào)。通過(guò)siRNA沉默DR5的基因表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),SNX-2112和TRAIL聯(lián)合作用誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡顯著降低。此外,我們發(fā)現(xiàn)SNX-2112在HeLa細(xì)胞內(nèi)可以通過(guò)抑制Akt/mTOR信號(hào)通路誘導(dǎo)自噬的發(fā)生。而采用BFA阻斷自噬流則會(huì)抑制SNX-2112誘導(dǎo)的DR5上調(diào)。另一方面,通過(guò)使用ROS抑制劑NAC和p53抑制劑PFTα證實(shí)了自噬介導(dǎo)的DR5上調(diào)是由SNX-2112刺激的ROS-p53信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)控。另外,由SNX-2112誘導(dǎo)的JNK的激活也在增強(qiáng)聯(lián)合用藥誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮調(diào)控作用。綜上所述,Hsp90抑制劑SNX-2112通過(guò)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與TRAIL協(xié)同作用誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡,從而克服宮頸癌細(xì)胞對(duì)TRAIL的耐藥性。本研究結(jié)果為宮頸癌的治療提供了新策略,并為Hsp90抑制劑SNX-2112作為T(mén)RAIL增敏劑的臨床應(yīng)用奠定了科學(xué)基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1.2.1 兩種途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[67]如圖 1.2.1，外源性細(xì)胞凋亡途徑獨(dú)立于 p53 發(fā)生，需要結(jié)合促凋亡配體如 TRAIL。TR以與四種膜結(jié)合受體，包括 TRAIL-R1-R4，和一種可溶性受體（OPG）相結(jié)合。但是只RAIL-R1 和 TRAIL-R2 上含有細(xì)胞質(zhì)死亡結(jié)構(gòu)域（DD），而 TRAIL 與受體結(jié)合后需要通結(jié)構(gòu)域來(lái)傳遞并觸發(fā)下游凋亡信號(hào)。TRAIL-R3 和 TRAIL-R4 也結(jié)合 TRAIL，但由于缺D，它們不能啟動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)。因此，它們又被稱為 TRAIL 的誘餌受體。TRAIL 與 TRAIL-R1結(jié)合導(dǎo)致銜接子 FADD 和前體 caspase-8 和-10 的募集以快速形成 DISC。Pro-caspase-8 和切割形成 caspase-8 和-10，其激活效應(yīng)子 caspase-3，，-6 和-7 使細(xì)胞凋亡。在 DISC 中，cF制 caspase-8 的活化，從而抑制下游凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)。內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑響應(yīng)細(xì)胞應(yīng)激化療和放療后啟動(dòng)。這導(dǎo)致 DNA 損傷誘導(dǎo)的 p53 基因進(jìn)一步激活促凋亡 Bcl-2 家族蛋白 BAK 和 BAX。結(jié)果，使得促凋亡蛋白細(xì)胞色素 c 和 Smac/DIABLO 從線粒體內(nèi)釋放到質(zhì)中。細(xì)胞色素 c 會(huì)進(jìn)一步與 APAF-1 形成蛋白質(zhì)復(fù)合體，即凋亡小體。凋亡小體形成活 caspase-9，后者又激活效應(yīng)子 caspase-3，-6 和-7，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外

圖 1.2.2 多種形式的 TRAIL 的應(yīng)用[67]迄今為止，已經(jīng)研究開(kāi)發(fā)了許多重組人 TRAIL 以增強(qiáng)其殺傷腫瘤潛力。一種可溶性RAIL（杜拉內(nèi)明）在非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物中具有約 30 分鐘的短血清半衰期，并且其具有與相同的受體結(jié)合[68]。由于其體積小，全身遞送的 TRAIL 可以通過(guò)腎臟迅速?gòu)捏w內(nèi)清除[此這需要重復(fù)給藥或更復(fù)雜的輸送方法來(lái)維持治療在循環(huán)中的有效水平，有待進(jìn)一步研發(fā)。更重要的是，腫瘤細(xì)胞對(duì) TRAIL 介導(dǎo)的殺傷作用反應(yīng)并不一致。雖然許多腫瘤細(xì)胞RAIL 介導(dǎo)的凋亡敏感，但在某些腫瘤細(xì)胞中 TRAIL 具有非凋亡信號(hào)特性，其耐藥性的發(fā)多種癌癥中也極為常見(jiàn)[70; 71]。在一項(xiàng)體外研究中，研究 TRAIL 對(duì)多種癌細(xì)胞系的功效顯多數(shù)情況下 TRAIL 表現(xiàn)出一定程度的細(xì)胞增殖抑制作用，但在 20%的細(xì)胞中沒(méi)有明顯作]。這些抗性可能是固有的（細(xì)胞總是耐受 TRAIL）或獲得性的（曾經(jīng)對(duì) TRAIL 敏感的在重復(fù)暴露后已經(jīng)變得耐受）。內(nèi)源性和獲得性 TRAIL 耐藥性在建立臨床有效的 TR
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：2593351