【摘要】：第一部分妊娠期糖尿病小鼠子代模型的建立及肝臟代謝基因表達(dá)情況目的:研究宮內(nèi)高糖環(huán)境出生的子一代小鼠糖代謝狀況,并探討其是否與肝臟糖脂代謝異常相關(guān)。材料和方法:STZ建立妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)小鼠模型,子一代(GDM-F1)出生后由正常母鼠哺乳至3周后正常喂養(yǎng)。對(duì)成年后8周和20周的正常對(duì)照組及F1-GDM組進(jìn)行糖耐量和胰島素耐量試驗(yàn);并提取肝臟組織的RNA,Real-Time PCR觀察其與糖代謝相關(guān)基因表達(dá)情況。結(jié)果:GDM子一代小鼠在8周和20周與對(duì)照組相比均表現(xiàn)出糖耐量異常,并且存在輕微的胰島素抵抗。GDM-F1肝臟組織糖原合成相關(guān)基因表達(dá)總體呈下降趨勢(shì),脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)下降。結(jié)論:宮內(nèi)高糖環(huán)境下出生的子一代小鼠葡萄糖耐量明顯異常,肝臟糖代謝與脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)異常,提示宮內(nèi)高糖導(dǎo)致子代糖脂代謝紊亂可能是通過(guò)肝臟引起的。第二部分宮內(nèi)高糖環(huán)境下出生的子一代小鼠肝臟免疫相關(guān)受體表達(dá)改變和慢性肝損傷目的:研究妊娠期糖尿病子一代小鼠肝臟免疫受體表達(dá)情況,從而判斷高糖環(huán)境是否對(duì)子代造成慢性肝損傷。方法:分別取胎鼠,8周和20周子一代雄鼠,HE染色觀察其肝臟受損情況。Trizol法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR(Real-TimePCR)檢測(cè)肝臟免疫受體IL-1β,IL-6r,CD36和CD248等mRNA的表達(dá)情況。提取肝臟組織總蛋白后,Western-blot觀察20周子代小鼠IL-6r及其調(diào)控通路(JAK2/STAT3)蛋白水平表達(dá)情況,免疫組化觀察IL-6r表達(dá)位置及水平。高糖環(huán)境培養(yǎng)小鼠肝細(xì)胞Hepal-6后Real-Time PCR檢測(cè)其免疫介質(zhì)的表達(dá)情況。結(jié)果:子代雄鼠胚胎時(shí)期及成年后肝臟IL-1β,IL-6r和CD248等mRNA水平表達(dá)均上調(diào),其中胎鼠時(shí)期免疫受體上調(diào)較為明顯,8周成年時(shí)差異略有減少,至20周小鼠免疫受體上調(diào)最為明顯。Western-blot和免疫組化結(jié)果表明20周小鼠肝細(xì)胞表面IL-6r蛋白水平表達(dá)顯著增加,JAK2/STAT3磷酸化水平上調(diào)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)高糖培養(yǎng)的Hepal-6肝細(xì)胞免疫介質(zhì)的表達(dá)明顯上調(diào)。結(jié)論:宮內(nèi)高糖環(huán)境可直接導(dǎo)致子代從胚胎時(shí)期開(kāi)始肝臟免疫相關(guān)受體表達(dá)上調(diào),揭示其炎癥反應(yīng)高于正常妊娠出生子代,這可能是促使成年至老年慢性肝損傷發(fā)病的重要原因。
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浙江大學(xué)碩N學(xué)位論義邐第－部分１．３實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑研究表明腹腔注射０．０１ｍｌ／ｇ胰島素液后，血糖測(cè)定儀測(cè)定血糖值，逡逑相比于對(duì)照組８周的妊娠期糖尿病子代小鼠僅于３０ｍｉｎ，６０ｍｉｎ有輕微的胰島素抵逡逑抗現(xiàn)象，隨即恢復(fù)正常水平。而相比之下２０周齡小鼠S椧鵲核氐摯瓜窒蟾饗�。辶x，

本文編號(hào)：2590455