【摘要】：目的探討攜帶miR-302a的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)來(lái)源的外泌體對(duì)子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma,EC)的作用,研究結(jié)果將為miRNA的有效運(yùn)輸提供了新方法,為外泌體的研究和子宮內(nèi)膜癌的治療提供新思路和新方法。方法1.從臨床來(lái)源的子宮內(nèi)膜癌組織和與其匹配的癌旁組織樣本中分析差異表達(dá)的microRNA(miRNA),通過(guò)qPCR驗(yàn)證獲得影響子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的、有抑癌作用的miRNA(miR-302a)。2.原代hUCMSCs的分離提取與鑒定:收集新鮮無(wú)菌的臍帶,采用組織貼壁法獲取原代hUCMSCs,培養(yǎng)基為α-MEM(10%胎牛血清)。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)hUCMSCs的表面標(biāo)記物CD45、CD73、CD90和CD105的表達(dá)。成脂和成骨分化能力的檢測(cè)。3.富含miR-302a的hUCMSCs來(lái)源的外泌體的提取與鑒定:構(gòu)建慢病毒載體感染hUCMSCs過(guò)表達(dá)miR-302a,收集培養(yǎng)48h的hUCMSCs無(wú)血清培養(yǎng)上清,采用ExoQuick TC試劑盒從hUCMSCs培養(yǎng)上清中提取其分泌的外泌體。通過(guò)透射電鏡觀察外泌體的形態(tài),運(yùn)用Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)技術(shù)檢測(cè)外泌體濃度粒徑。Western blot檢測(cè)外泌體的標(biāo)志分子CD63、CD81和HSP70的表達(dá)。4.富含miR-302a的hUCMSCs來(lái)源的的外泌體對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(Ishikawa和ECC-1)增殖、遷移等生物學(xué)功能的影響,并進(jìn)一步檢測(cè)靶基因Cyclin D1以及AKT的表達(dá)。結(jié)果1.通過(guò)臨床樣本的分析,獲得的差異表達(dá)miRNA中,miR-302a能夠有效抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(Ishikawa和ECC-1)增殖、遷移等功能。2.采用組織貼壁法可以從臍帶華通膠中提取hUCMSCs。hUCMSCs為貼壁細(xì)胞,呈長(zhǎng)梭形,生長(zhǎng)迅速。第三代hUCMSCs通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)高表達(dá)CD73、CD90和CD105,不表達(dá)CD45。hUCMSCs具有成脂和成骨分化的能力。3.通過(guò)ExoQuick TC試劑盒可從hUCMSCs培養(yǎng)上清中提取其分泌的外泌體。透射電鏡下觀察呈典型的杯口狀,NTA檢測(cè)外泌體的粒徑范圍介于40-200nm,Western blot結(jié)果顯示外泌體的標(biāo)記分子CD81和HSP70均陽(yáng)性。4.hUCMSCs來(lái)源的富含miR-302a的外泌體能抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(Ishikawa和ECC-1)增殖、遷移,并通過(guò)抑制AKT和Cyclin D1的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和遷移的抑制。結(jié)論1.過(guò)表達(dá)miR-302a能夠抑制子宮內(nèi)膜癌的增殖和遷移2.miR-302a可由間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體遞送至子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞并抑制其增殖和遷移3.miR-302a通過(guò)下調(diào)cyclinD1和AKT1抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和遷移。
【圖文】：

AAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTCGGGTTTATTCACTTTGGCCGCGGCTCGAGGGGGTTGGGGTGCCCTGGGTTTGCGCAGGGACGCGGCTGCTCAACGCAGCGGCGCCGACCCTGGGTCTCGCACCAGCGTCACCCGGATCTTCGCCGCTACCCTTGCTTCCTGCTCCGCCCCTAAGTCGGGAAGGTTGCCGGACGTGACAAACGGAAGCCGCACGTCTCGGACAGCGCCAGGGAGCAATGGCAGCGCGCGGCCAATAGCGGCTGCTCAGCAGGGCGCGCCAAGGGGCGGTGCGGGAGGCGGGGTGTGGGGTCCTGCCCGCGCGTGTTCCGCATTCTGCAAGC2a 感染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的效率，轉(zhuǎn)染慢病毒后，，miR-302a 在 ISK 和 ECC-1 細(xì)胞

R-302a 對(duì) EC 細(xì)胞增殖的影響( P < 0.01, a 過(guò)表達(dá)抑制體外 EC 細(xì)胞的遷移毒表達(dá)載體使ISK和ECC-1細(xì)胞過(guò)表達(dá)miR-3能的影響。如圖 3 所示，這兩種細(xì)胞的遷移能
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：2589788