【摘要】：目的:1研究盆腔器官脫垂患者(pop)和對照者骶韌帶組織中integrinβ1和nesprin-2的表達(dá)及意義;2機(jī)械力對骶韌帶原代培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中integrinβ1和nesprin-2的影響;3研究其在pop的發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:1研究對象:選取2016年3月一2016年9月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院東院區(qū)婦產(chǎn)科接受手術(shù)治療的12例盆腔器官脫垂患者(pelvic organ prolapse,POP)的骶韌帶為病例組;同期因子宮良性病變行子宮全切的12例非POP患者的骶韌帶作為對照組。兩組患者均無子宮內(nèi)膜異位癥、糖尿病及呼吸、消化、心血管系統(tǒng)等疾病,術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用性激素治療。病例組與對照組在年齡、產(chǎn)次、孕次、體重指數(shù)等方面比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2取材:經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院倫理委員會(huì)同意,所有患者簽署知情同意書。所取標(biāo)本為兩組患者近宮頸部分的骶韌帶組織,取新鮮組織一塊-20℃冷盒送實(shí)驗(yàn)室用于組織蛋白提取;一塊常溫甲醛固定常規(guī)脫水包埋備用。另取正�；颊呓鼘m頸部分的骶韌帶組織一塊置于加雙抗培養(yǎng)液中4℃冷盒送實(shí)驗(yàn)室,用于細(xì)胞培養(yǎng),整個(gè)取材運(yùn)輸過程小于2小時(shí)。3采用免疫組化及western blot方法對pop和非pop骶韌帶組織中Integrinβ1和nesprin-2表達(dá)做定性及定量研究。4培養(yǎng)和鑒定原代成纖維細(xì)胞:采用組織塊法進(jìn)行骶韌帶成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng),通過倒置相差顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。5細(xì)胞力學(xué)實(shí)驗(yàn):采用Flexcercell 4000柔性基底拉伸加載系統(tǒng),分別對3-5代處于對數(shù)期生長的非pop組骶韌帶成纖維細(xì)胞加力,加載過程在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行。加載參數(shù):幅度15%,正弦波,O.5Hz,時(shí)間分別為:0,6,12,24小時(shí)。在設(shè)定的時(shí)間將細(xì)胞培養(yǎng)板取出立即在倒置相差顯微鏡下觀察骶韌帶成纖維細(xì)胞的形態(tài)再進(jìn)行成纖維細(xì)胞蛋白提取,用免疫蛋白印記技術(shù)測定成纖維細(xì)胞在加力不同的時(shí)間后的integrinβ1和nesprin-2的表達(dá)。所得數(shù)據(jù)用spss21.0統(tǒng)計(jì)分析,以p0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1免疫組化染色結(jié)果integrinβ1位于成纖維細(xì)胞的細(xì)胞膜,陽性呈棕黃色;nesprin-2位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。用westernblot技術(shù)檢測pop組與非pop組盆底骶韌帶組織中integrinβ1和nesprin-2的表達(dá)結(jié)果顯示:在盆底韌帶正常組integrinβ1的表達(dá)和內(nèi)參的比值是(2.09士0.12)在病例組是(1.29士0.04),p0.05;在盆底韌帶正常組nesprin-2的表達(dá)和內(nèi)參的比值是(1.09士0.06)在病例組是(0.49士0.02),p0.05;與正常組相比病例組中integrinβ1和nesprin-2的表達(dá)蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明在盆腔器官脫垂患者中細(xì)胞骨架降低。2原代骶韌帶成纖維細(xì)胞于培養(yǎng)接種后5天開始出現(xiàn)游離的細(xì)胞核,7-10天開始有細(xì)胞自組織塊邊緣游離出來,貼壁生長,細(xì)胞較大,多數(shù)呈梭形或不規(guī)則三角形,邊界清楚;約15-20天左右單層細(xì)胞達(dá)80%-90%匯合時(shí)呈放射狀、編織狀排列(fig.10)傳代后完全伸展的骶韌帶成纖維細(xì)胞呈扁平長梭形。3培養(yǎng)的細(xì)胞波形蛋白表達(dá)于間質(zhì)來源的細(xì)胞,角蛋白表達(dá)于上皮來源的細(xì)胞。將培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色,中間絲波形蛋白(vimentin)表達(dá)陽性,棕黃色顆粒定位于胞質(zhì);而角蛋白染色陰性,結(jié)合取材部位證實(shí)為骶韌帶成纖維細(xì)胞。4拉伸前骶韌帶成纖維細(xì)胞形態(tài)多樣,為長梭形或不規(guī)則三角形,其排列亦呈多向性,無明顯規(guī)律;在15%應(yīng)變作用下隨著受力時(shí)間的延長,細(xì)胞表現(xiàn)出對力場的順應(yīng)性變化,較原代細(xì)胞更長,呈長梭形。5原代培養(yǎng)的盆底韌帶成纖維細(xì)胞在15%應(yīng)變刺激下integrinβ1蛋白表達(dá)量和內(nèi)參的比值在oh,6h,12h,24h分別為(1.40士0.02,1.35士0.02,1.64士0.05,3.11士0.04),0h與6h相比p0.05差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;0h與12h、24h相比隨著時(shí)間的延長表達(dá)量較0h顯著上調(diào),其中以24h上調(diào)最多,p0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。成纖維細(xì)胞在15%應(yīng)變刺激下nesprin-2蛋白表達(dá)量和內(nèi)參的比值在oh,6h,12h,24h表達(dá)量分別為(0.40士0.06,0.64士0.02,0.60士0.04,2.45士0.06),0h與6h、12h、24h相比P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;6h與12h相比P0.05差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;以0h作對照隨著時(shí)間的延長表達(dá)量顯著上調(diào),其中以24h上調(diào)最多,P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1機(jī)械力可以影響著骨架蛋白中integrinβ1和nesprin-2的表達(dá)含量,改變細(xì)胞的形態(tài)并對骶韌帶成纖維細(xì)胞骨架適應(yīng)的作用效果,控制細(xì)胞命運(yùn),調(diào)節(jié)信號傳導(dǎo),基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。2非POP患者較POP患者具有更穩(wěn)定的細(xì)胞骨架系統(tǒng),POP患者integrinβ1和nesprin-2表達(dá)下降,在POP發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。3細(xì)胞骨架在生物力學(xué)對盆底功能障礙性疾病作用機(jī)制中扮演著重要角色
【圖文】：

HE染色骶韌帶組織（X40）

21圖 2 非 POP 骶韌帶組織中 integrin β1 表達(dá)的免疫組化（X10）ig.2 Immunohistochemical reaction of integrin β1 in the non-pelvic orgprolapsed（X10）
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R711.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 單淑芝;石彬;趙昕;李曉娟;;機(jī)械力對盆腔臟器脫垂陰道壁成纖維細(xì)胞的影響[J];實(shí)用婦產(chǎn)科雜志;2011年09期

2 李曉娟;石彬;單淑芝;;盆底功能障礙性疾病患者陰道壁成纖維細(xì)胞受力后生物學(xué)功能的變化[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2011年07期

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本文編號：2567962