【摘要】：目的觀察雷帕霉素誘導(dǎo)卵巢癌SKOV3細(xì)胞自噬后miR-18a、miR-19a、miR-21及miR-144表達(dá)的變化,并以miR-144為研究對(duì)象,驗(yàn)證其對(duì)自噬相關(guān)基因絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(mTOR)的靶向調(diào)控作用。方法分別用50 ng/m L雷帕霉素(雷帕霉素組)及10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA組)作用于SKOV3細(xì)胞2、12 h,收集細(xì)胞,并設(shè)立不進(jìn)行任何處理的細(xì)胞作為對(duì)照組,提取總RNA;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)4種miRNAs的表達(dá)水平。培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞,設(shè)立正常細(xì)胞組、miR-144 mimic組和miR-144 inhibitor組,分別將合成的miR-144mimic及miR-144 inhibitor轉(zhuǎn)染到SKOV3細(xì)胞內(nèi),正常細(xì)胞組不處理。應(yīng)用qRT-PCR方法檢測(cè)各組的miR-144及mTOR mRNA表達(dá)量,應(yīng)用Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中mTOR蛋白表達(dá)量。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-144與mTOR的相互作用關(guān)系。結(jié)果對(duì)照組細(xì)胞miR-18a、miR-19a、miR-21及miR-144的表達(dá)量分別為1.003±0.021、1.001±0.039、1.014±0.016、1.028±0.037;雷帕霉素組4種miRNAs的表達(dá)量分別為6.310±0.025、1.200±0.058、52.310±0.005、63.490±0.024,其miR-18a、miR-21及miR-144高于對(duì)照組(P均0.05);3-MA組SKOV-3細(xì)胞的4種miRNAs的表達(dá)量分別為0.540±0.019、0.890±0.062、0.820±0.012和0.660±0.003,其miR-18a及miR-144低于對(duì)照組(P均0.05)。與正常細(xì)胞組比較,miR-144 mimic組miR-144 mRNA表達(dá)量高(P0.05),mTOR mRNA和蛋白的表達(dá)量降低(P均0.05);miR-144 inhibitor組miR-144表達(dá)量下降(P0.05),mTOR mRNA和蛋白的表達(dá)量升高(P均0.05)。miR-144 mimic分別與mTOR-WT及mTOR-Mut共轉(zhuǎn)染,前者的熒光表達(dá)量低于后者(P均0.05)。結(jié)論 SKOV3細(xì)胞發(fā)生自噬后,miR-18a、miR-21及miR-144表達(dá)升高,miR-144可靶向抑制mTOR的表達(dá)。

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6 劉秀芳;徐浩;;mTOR與Ki67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

7 陳天敏;方小玲;;mTOR在子宮肌瘤中表達(dá)的研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2013年30期

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9 郭霞;金華;瑪依拉·卡米力江;劉開江;阿仙姑·哈斯木;哈麗丹·熱依木;武貴臻;Abulizi·ABUDULA;;血漿中apoAⅠ和mTOR蛋白在維吾爾族婦女宮頸病變進(jìn)程中的動(dòng)態(tài)變化及意義[J];癌變.畸變.突變;2014年03期

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