【摘要】：目的：通過免疫組織化學(xué)方法研究缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）與血管內(nèi)皮生長因子-A(VEGF-A)在宮頸腺癌組織中的表達(dá)及其兩者之間的關(guān)系；通過二氯化鈷（CoCl2）建立人宮頸腺癌Hela細(xì)胞體外缺氧模型，觀察缺氧誘導(dǎo)作用下人宮頸腺癌Hela細(xì)胞的增殖情況及HIF-1α和VEGF-A在基因和蛋白水平上的表達(dá)；探討缺氧作用下HIF-1α與VEGF-A在宮頸腺癌生長、浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用，以及兩者間的關(guān)系。方法：1、收集篩選得到滿足實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的宮頸腺癌臘塊組織50例，通過免疫組織化學(xué)方法研究HIF-1α與VEGF-A在宮頸腺癌組織中的表達(dá)，并進(jìn)一步分析兩者的臨床意義和兩者間的相互關(guān)系；2、通過CoCl2試劑建立細(xì)胞體外缺氧模型；3、體外培養(yǎng)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞，用（50、100、150、200μmol/L）不同濃度的CoCl2作用于Hela細(xì)胞不同時(shí)間（0、3、6、12、24小時(shí)）后， CCK8法檢測(cè)各組中缺氧對(duì)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞增殖的影響，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)150μmol/LCoCl2作用0、3、6、12、24小時(shí)后人宮頸腺癌Hela細(xì)胞中HIF-1α和VEGF-A在mRNA表達(dá)水平上的變化，采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)150μmol/LCoCl2作用0、3、6、12、24小時(shí)后人宮頸腺癌Hela細(xì)胞中HIF-1α和VEGF-A在蛋白表達(dá)水平上的改變。結(jié)果：1、檢測(cè)50例宮頸腺癌組織和20例正常宮頸組織后，我們發(fā)現(xiàn)HIF-1α在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)率為58.00%，在正常宮頸石蠟組織塊中的陽性表達(dá)率為10.00%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)；VEGF-A在宮頸腺癌組織中的陽性表達(dá)率為64.00%，在正常宮頸組織的宮頸腺中的陽性表達(dá)率為5.00%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。HIF-1α及VEGF-A在宮頸腺癌組織中的蛋白表達(dá)同患者的年齡及病理分級(jí)無關(guān)（P0.05），而與患者的瘤體大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否以及臨床腫瘤分期有關(guān)（P0.05)，且HIF-1α與VEGF-A兩者呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.629(P0.01)；2、CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明，CoCl2造成的缺氧能有效地抑制人宮頸腺癌Hela細(xì)胞的增殖活性，不同濃度CoCl2干預(yù)組和不同干預(yù)時(shí)間組與常氧對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。隨著CoCl2濃度的增加細(xì)胞增殖抑制率逐漸增加，在CoCl2濃度為150μmol/L時(shí)達(dá)到最大，而后開始下降，同樣，同一CoCl2濃度作用下，各時(shí)間組對(duì)細(xì)胞增殖活性抑制作用也有一個(gè)最高峰，12小時(shí)時(shí)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞增殖活性與其他時(shí)間點(diǎn)相比最低，抑制率最高，而后抑制率逐漸降低；3、熒光定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與常氧對(duì)照組相比，在CoCl2濃度為150μmol/L作用下的各時(shí)間組中的HIF-1α和VEGF-A都有增加，并且HIF-1α的增加在缺氧12小時(shí)時(shí)達(dá)到最大值，而VEGF-A卻是一直呈上升趨勢(shì)。HIF-1α和VEGF-A在mRNA表達(dá)水平上的直線相關(guān)關(guān)系在統(tǒng)計(jì)上不成立，相關(guān)系數(shù)為0.647，P=0.353（P0.05）；4、免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果表明，與常氧對(duì)照組相比較，在150μmol/L CoCl2誘導(dǎo)下，，各時(shí)間組的人宮頸腺癌Hela細(xì)胞在缺氧環(huán)境中HIF-1α和VEGF-A表達(dá)量均升高，且HIF-1α蛋白表達(dá)量在缺氧12小時(shí)達(dá)到最大，隨之有所減少，而VEGF的蛋白表達(dá)量一直呈上升趨勢(shì)。HIF-1α和VEGF-A在蛋白表達(dá)水平上存在正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.892，P=0.042(P0.05)。結(jié)論：1、HIF-1α及VEGF-A蛋白表達(dá)水平的高低可能對(duì)患者腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移有一定預(yù)示作用；2、HIF-1α可能是VEGF-A的調(diào)控因子之一， HIF-1α可能是通過誘導(dǎo)VEGF-A的蛋白表達(dá)水平來增加宮頸腺癌侵襲與轉(zhuǎn)移的機(jī)會(huì)；3、缺氧能夠抑制人宮頸腺癌Hela細(xì)胞的增殖，其抑制作用在CoCl2濃度為150μmol/L抑制作用時(shí)達(dá)到最大；4、HIF-1α可能通過誘導(dǎo)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞中VEGF-A的蛋白表達(dá)，減少缺氧對(duì)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞增殖的抑制作用；5、HIF-1α抑制劑和抗血管生成劑在宮頸腺癌的治療方面可能具有潛在的基礎(chǔ)與臨床研究價(jià)值，可以對(duì)宮頸腺癌新型抗癌藥物及輔助化療藥物的種類做一補(bǔ)充。
【圖文】：

圖 1A HIF-1α 在正常宮頸腺體中的陰性表達(dá)(Envision ×200)Figure 1 A Expression of HIF-1α protein innormal tissues(Envision ×200)圖 1 B HIF-1α 在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)(Envision ×200)Figure 1 B Expression of HIF-1α protein incervical adenocarcinoma (Envision ×200)圖 2A VEGF-A 在正常宮頸腺體中的陰性表達(dá)(Envision ×200)圖 2 B VEGF-A 在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)(Envision ×200)

圖 1A HIF-1α 在正常宮頸腺體中的陰性表達(dá)(Envision ×200)Figure 1 A Expression of HIF-1α protein innormal tissues(Envision ×200)圖 1 B HIF-1α 在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)(Envision ×200)Figure 1 B Expression of HIF-1α protein incervical adenocarcinoma (Envision ×200)圖 2A VEGF-A 在正常宮頸腺體中的陰性表達(dá)(Envision ×200)圖 2 B VEGF-A 在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)(Envision ×200)
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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1 唐彬秩;趙鳳艷;韋婷;母得志;毛萌;傅強(qiáng);張林;屈藝;;dn HIF-1對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

2 郭科軍;薛暉;張頤;;HIF-1α和VEGF在宮頸癌癌變過程中的表達(dá)及意義[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年02期

本文編號(hào)：2537967