【摘要】：目的:闡明妊娠期糖尿病(GDM)對(duì)子代心肌細(xì)胞糖脂代謝的影響,并探討其可能的調(diào)控機(jī)制。方法:雌性昆明小鼠于妊娠中期給予腹腔注射鏈脲佐菌素(30 mg/kg)建立GDM模型,另設(shè)對(duì)照(control)組。分娩后F1代飼養(yǎng)至8周,測(cè)定隨機(jī)血糖和空腹血脂等相關(guān)指標(biāo)。利用CO2窒息處死F1代實(shí)驗(yàn)小鼠,剖開胸腔后分離心臟組織,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。q PCR檢測(cè)p300及p300/CBP相關(guān)因子(PCAF)的mRNA表達(dá)水平,q PCR及Western blot檢測(cè)過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPAR-γ)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT-4)及中鏈�；o酶A脫氧酶(MCAD)的mRNA和蛋白表達(dá)水平,染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch IP)結(jié)合q PCR檢測(cè)p300與PPAR-γ啟動(dòng)子結(jié)合水平及PPAR-γ啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3的乙酰化水平。結(jié)果:F1代小鼠血糖和總膽固醇輕度升高(P0.05),甘油三酯、高密度及低密度脂蛋白無(wú)明顯改變;心肌組織中p300、PPAR-γ、GLUT-4及MCAD表達(dá)明顯降低(P0.05),PCAF的表達(dá)兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;p300與PPAR-γ啟動(dòng)子結(jié)合水平和PPAR-γ啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3的乙�；骄黠@下降(P0.05)。結(jié)論:GDM子代小鼠中p300通過介導(dǎo)組蛋白乙�；揎椂抡{(diào)PPAR-γ表達(dá),可能引起心肌細(xì)胞糖脂代謝紊亂。
【圖文】：

至200～1000bp之間。加入ChIP級(jí)抗p300及抗乙�；疕3抗體4℃搖床過夜沉淀DNA，65℃逆轉(zhuǎn)交聯(lián)8～10h，純化并回收DNA。用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定A260/A280比值，以確定ChIP后DNA的純度和濃度，于－20℃保存。選取PPAＲ-γ基因外顯子5＇端前1000bp序列，針對(duì)該序列設(shè)計(jì)特異性引物。引物用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)，由寶生物公司合成。PPAＲ-γ的上游引物序列為5＇-TCTTCCACTTCCACACGTACCAA-3＇，下游引物序列為5＇-CAGAGGGAGTTGGGAGACGTAG-3＇，產(chǎn)物大小為158bp。所得數(shù)據(jù)用Bio-ＲadCFX96熒光定量PCＲ儀自帶基于Pfaffl原理的相對(duì)定量數(shù)據(jù)分析軟件分析。4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間比較應(yīng)用獨(dú)立樣品t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1子代小鼠隨機(jī)血糖及空腹血脂水平GDM組子代小鼠生后8周隨機(jī)血糖及空腹總膽固醇均較對(duì)照組有升高(P＜0.05)，而甘油三酯、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白在2組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，見圖1。2心肌組織p300、PCAF、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCADmＲNA表達(dá)水平的檢測(cè)Figure1．Bloodglucose(A)andbloodlipid(B)levelsinGDMgroupandcontrolgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．圖1對(duì)照組與GDM組血糖及血脂水平的比較GDM組F1代小鼠心肌組織中p300、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCAD的mＲNA均較正常組降低(P＜0.05)，而PCAF的mＲNA表達(dá)在2組中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，見圖2。Figure2．ThemＲNAlevelsofp300(A)，PCAF(B)，PPAＲ-γ(C)，GLUT-4(D)andMCAD(E)incontrolgroupandGDMgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．圖2GDM組與對(duì)照組各基因mＲNA相對(duì)表達(dá)量的比較·2224·

至200～1000bp之間。加入ChIP級(jí)抗p300及抗乙酰化H3抗體4℃搖床過夜沉淀DNA，65℃逆轉(zhuǎn)交聯(lián)8～10h，純化并回收DNA。用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定A260/A280比值，以確定ChIP后DNA的純度和濃度，于－20℃保存。選取PPAＲ-γ基因外顯子5＇端前1000bp序列，針對(duì)該序列設(shè)計(jì)特異性引物。引物用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)，由寶生物公司合成。PPAＲ-γ的上游引物序列為5＇-TCTTCCACTTCCACACGTACCAA-3＇，，下游引物序列為5＇-CAGAGGGAGTTGGGAGACGTAG-3＇，產(chǎn)物大小為158bp。所得數(shù)據(jù)用Bio-ＲadCFX96熒光定量PCＲ儀自帶基于Pfaffl原理的相對(duì)定量數(shù)據(jù)分析軟件分析。4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間比較應(yīng)用獨(dú)立樣品t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1子代小鼠隨機(jī)血糖及空腹血脂水平GDM組子代小鼠生后8周隨機(jī)血糖及空腹總膽固醇均較對(duì)照組有升高(P＜0.05)，而甘油三酯、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白在2組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，見圖1。2心肌組織p300、PCAF、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCADmＲNA表達(dá)水平的檢測(cè)Figure1．Bloodglucose(A)andbloodlipid(B)levelsinGDMgroupandcontrolgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．圖1對(duì)照組與GDM組血糖及血脂水平的比較GDM組F1代小鼠心肌組織中p300、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCAD的mＲNA均較正常組降低(P＜0.05)，而PCAF的mＲNA表達(dá)在2組中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，見圖2。Figure2．ThemＲNAlevelsofp300(A)，PCAF(B)，PPAＲ-γ(C)，GLUT-4(D)andMCAD(E)incontrolgroupandGDMgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．圖2GDM組與對(duì)照組各基因mＲNA相對(duì)表達(dá)量的比較·2224·
【作者單位】： 成都市第一人民醫(yī)院兒科;
【分類號(hào)】：R714.256

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本文編號(hào)：2519614