【摘要】：目的:研究HLA-G對育齡女性外周血中淋巴細(xì)胞(PBLC)增殖及Treg細(xì)胞亞群的影響,探討其在妊娠免疫耐受中的作用機(jī)制。方法:高表達(dá)HLA-G的絨癌細(xì)胞系JEG-3細(xì)胞與健康育齡女性外周血淋巴細(xì)胞(PBLC)分組共培養(yǎng),利用HLA-G中和抗體(87G)和重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白(rh TNFR∶Fc)進(jìn)行干預(yù),實驗分為7組:1JEG-3+PBLC培養(yǎng)組;2JEG-3+PBLC+87G培養(yǎng)組;3JEG-3+PBLC非接觸培養(yǎng)組;4JEG-3+PBLC+87G非接觸培養(yǎng)組;5對照組(單純PBLC組);6JEG-3+PBLC+rh TNFR:Fc培養(yǎng)組;7JEG-3+PBLC+87G+rh TNFR:Fc培養(yǎng)組。1~5每組CCK-8法檢測各組PBLC增殖抑制情況,RT-PCR方法檢測TNF-αmRNA的表達(dá),1~7每組流式細(xì)胞術(shù)檢測Treg細(xì)胞的比例。結(jié)果:CCK-8法顯示,JEG-3+PBLC培養(yǎng)組、JEG-3+PBLC+87G培養(yǎng)組、JEG-3+PBLC非接觸培養(yǎng)組、JEG-3+PBLC+87G非接觸培養(yǎng)組PBLC增殖抑制率分別為(48.00±5.56)%、(14.67±4.04)%、(37.67±2.31)%、(8.33±3.21)%,各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,P值均0.05;RT-PCR結(jié)果顯示JEG-3+PBLC培養(yǎng)組、JEG-3+PBLC非接觸培養(yǎng)組TNF-αmRNA的表達(dá)量明顯低于對照組,加入87G干預(yù)后,TNF-αmRNA的表達(dá)量較相應(yīng)無87G組明顯上升,P值均0.05。流式細(xì)胞檢測顯示,與對照組相比,JEG-3+PBLC培養(yǎng)組Treg細(xì)胞比例明顯上升(P0.05),而JEG-3+PBLC非接觸培養(yǎng)組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),JEG-3+PBLC+87G培養(yǎng)組Treg細(xì)胞比例較JEG-3+PBLC培養(yǎng)組明顯下降(P0.05);JEG-3+PBLC+rh TNFR:Fc培養(yǎng)組與JEG-3+PBLC培養(yǎng)組相比,Treg細(xì)胞比例明顯上升(P0.05);以JEG-3+PBLC+rh TNFR:Fc培養(yǎng)組為對照,JEG-3+PBLC+rh TNF:FC+87G培養(yǎng)組Treg細(xì)胞比例明顯下降,但明顯高于JEG-3+PBLC+87G培養(yǎng)組,各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,P值均0.05。結(jié)論:HLA-G可以抑制育齡女性外周血淋巴細(xì)胞的增殖及抑制TNF-α的表達(dá),上調(diào)Treg細(xì)胞的比例。
[Abstract]:Aim: to study the effect of HLA-G on (PBLC) proliferation and Treg cell subsets in peripheral blood of women of childbearing age, and to explore the mechanism of Treg cell subsets in pregnancy immune tolerance. Methods: chorionic carcinoma cell line JEG-3 cells with high expression of HLA-G were co-cultured with (PBLC) of healthy female peripheral blood lymphocytes of childbearing age. HLA-G neutralizing antibody (87G) and recombinant human type 2 tumor necrosis factor receptor-antibody fusion protein (rh TNFR:Fc) were intervened. the cells were divided into 7 groups: 1JEG-3 PBLC culture group, 2JEG-3 PBLC 87G culture group, 3JEG-3 PBLC non-contact culture group, and 2JEG-3 PBLC 87G culture group, 2JEG-3 PBLC 87G culture group, 3JEG-3 PBLC non-contact culture group, 2JEG-3 PBLC 87G culture group, 3JEG-3 PBLC non-contact culture group. 4JEG-3 PBLC 87G non-contact culture group; 5 control group (simple PBLC group); 6JEG-3 PBLC rh TNFR:Fc culture group; 7JEG-3 PBLC 87G rh TNFR:Fc culture group. 1 CCK-8 assay was used to detect the proliferation inhibition of PBLC in each group, RT-PCR method was used to detect the expression of TNF- 偽 mRNA, and flow cytometry was used to detect the proportion of Treg cells in each group. Results: CCK-8 assay showed that the inhibition rates of PBLC proliferation in JEG-3 PBLC culture group, JEG-3 PBLC 87G culture group, JEG-3 PBLC non-contact culture group and JEG-3 PBLC 87G non-contact culture group were (48.00 鹵5.56)%, (14.67 鹵4.04)%, (37.67 鹵2.31)% and (8.33 鹵3.21)%, respectively. The results of RT-PCR showed that the expression of TNF- 偽 mRNA in JEG-3 PBLC culture group and JEG-3 PBLC non-contact culture group was significantly lower than that in control group. The expression of TNF- 偽 mRNA in JEG-3 PBLC non-contact culture group was significantly higher than that in non-87G group (P = 0.05). Flow cytometry showed that the proportion of Treg cells in JEG-3 PBLC culture group was significantly higher than that in control group (P 0.05), but there was no significant difference in JEG-3 PBLC non-contact culture group (P 0.05). The proportion of Treg cells in JEG-3 PBLC 87G culture group was significantly lower than that in JEG-3 PBLC culture group (P 0.05), and the proportion of Treg cells in JEG-3 PBLC rh TNFR:Fc culture group was significantly higher than that in JEG-3 PBLC culture group (P 0.05). Compared with JEG-3 PBLC rh TNFR:Fc culture group, the proportion of Treg cells in JEG-3 PBLC rh TNF:FC 87G culture group decreased significantly, but it was significantly higher than that in JEG-3 PBLC 87G culture group. Conclusion: HLA-G can inhibit the proliferation of peripheral blood lymphocytes and the expression of TNF- 偽 in women of childbearing age, and up-regulate the proportion of Treg cells.
【作者單位】： 徐州醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院;
【分類號】：R714

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2500728