【摘要】：研究背景： 反復(fù)著床失敗(recurrent implantation failure, RIF)已成為阻礙妊娠率進(jìn)一步提高的瓶頸問(wèn)題,目前提高子宮內(nèi)膜容受性的解決方法主要有宮腔搔刮、封閉抗體治療、G-CSF及HCG宮腔灌注、針灸治療儀等方法,但這些方法仍然存在療效不確定等問(wèn)題。PBMCs (peripheral blood mononuclear cells)是指外周血單個(gè)核細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等,研究發(fā)現(xiàn)皮下注射丈夫或第三者外周血淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療能提高IVF-ET反復(fù)著床失敗患者的妊娠率和活產(chǎn)率,但此方法具有需要多次注射、注射部位疼痛、血源性病毒感染及誘發(fā)母胎變態(tài)反應(yīng)等副作用。因此,我們提出在著床前宮腔灌注自體PBMCs聯(lián)合HCG用于反復(fù)著床障礙的患者其具有操作簡(jiǎn)單、一次完成、安全簡(jiǎn)便、無(wú)變態(tài)反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。 研究目的： 從臨床和實(shí)驗(yàn)方面探討宮腔灌注外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)對(duì)胚胎著床的影響及其機(jī)制,為臨床上反復(fù)著床失敗患者使用這一新的方法提供理論和實(shí)踐依據(jù)。 研究方法： 第一部分(動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分)：選擇6-8周齡昆明小鼠,讓雌雄小鼠同籠交配,將妊娠小鼠隨機(jī)分成正常組、著床障礙組和著床障礙+PBMCs處理組三組。記錄交配后第7.5天(Pd7.5)各組小鼠妊娠率和著床胚泡數(shù),并采用免疫組化和Real Time-PCR技術(shù)觀察各組小鼠著床窗期白血病抑制因子(LIF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的原位表達(dá)和其mRNA的表達(dá)。 第二部分(細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分)：用Real Time-PCR方法檢測(cè)在含或不含HCG的培養(yǎng)基中PBMC細(xì)胞的IL-1p和LIF mRNA的表達(dá)。將JAR細(xì)胞的培養(yǎng)基分為四組：對(duì)照組、僅HCG組、僅PBMCs組及PBMCs+HCG組。采用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組對(duì)JAR細(xì)胞的增殖和侵襲力的影響。并用采用Western blotting方法檢測(cè)JAR細(xì)胞中MMP2和MMP9的蛋白和其mRNA的表達(dá)。 第三部分(臨床實(shí)驗(yàn)部分)：將2013年9月到2014年3月在我院進(jìn)行體外受精／單精子卵泡漿內(nèi)注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)的反復(fù)著床失敗患者,隨機(jī)分成兩組：對(duì)照組和宮腔灌注PBMCs處理組,比較兩組的一般情況,受精情況和臨床妊娠結(jié)局。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 第一部分結(jié)果：與正常組相比,著床障礙模型組小鼠妊娠率和著床率顯著降低(P0.01),著床障礙--PBMCs處理組與模型組相比妊娠率和著床率升高(P0.05)。著床障礙模型組著床窗期的LIF和VEGF的蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)較正常組有明顯的降低(P0.05),著床障礙+PBMCs處理組的表達(dá)與著床障礙模型組相比顯著增加(P0.05),接近正常組水平。 第二部分細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果：HCG能促進(jìn)PBMCs中IL-1p和LIF mRNA的表達(dá)。PBMCs+HCG組的侵襲細(xì)胞數(shù)均明顯高于對(duì)照組,PBMCs+HCG組的MMP2和MMP9的蛋白和其mRNA的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,并且隨著上清液的增加,其表達(dá)呈遞增局勢(shì)。 第三部分臨床試驗(yàn)結(jié)果：對(duì)照組和宮腔灌注PBMCs處理組兩組之間的年齡、不孕年限、助孕方式、獲卵數(shù)、2PN數(shù)、之前IVF次數(shù)、內(nèi)膜厚度等均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,宮腔灌注PBMCs處理組的著床率和臨床妊娠率明顯高于對(duì)照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論： 1.著床前宮腔灌注未孕小鼠的外周血單個(gè)核細(xì)胞能增加著床障礙模型小鼠的著床率和臨床妊娠率,其機(jī)理主要為增加著床窗期子宮內(nèi)膜LIF和VEGF的表達(dá)來(lái)改善小鼠的子宮內(nèi)膜容受性,從而提高妊娠率。 2.HCG作為胚胎信號(hào)能能作用于PBMCs,使其分泌多種細(xì)胞因子,如IL-1β和LIF,這些細(xì)胞因子可增加滋養(yǎng)細(xì)胞的MMP-2和MMP-9的表達(dá),以此來(lái)增強(qiáng)胚胎的侵襲能力。 3.本中心初步的臨床實(shí)踐證明,對(duì)于反復(fù)著床失敗患者在胚胎移植前給予宮腔灌注HCG處理過(guò)的PBMCs免疫治療能顯著提高患者的胚胎著床率和妊娠率。
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【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R711.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2483574