發(fā)布時(shí)間：2019-05-09 04:02

【摘要】：產(chǎn)前篩查是目前臨床中常用的一種預(yù)防先天缺陷兒出生的手段，通常是對孕婦血液中存在的特異性指標(biāo)進(jìn)行檢測，從而篩選出具有高危風(fēng)險(xiǎn)的人群。產(chǎn)前診斷則是在遺傳咨詢、風(fēng)險(xiǎn)評估的基礎(chǔ)上，利用遺傳學(xué)診斷和影像學(xué)檢查等方法，對出生缺陷的高風(fēng)險(xiǎn)人群做出明確診斷，盡早進(jìn)行宮內(nèi)干預(yù)和治療，從而盡可能地降低新生兒的發(fā)病率和死亡率，以提高人口素質(zhì)。因此，對產(chǎn)前篩查與診斷進(jìn)行深入的研究以及對其檢測技術(shù)的不斷探索與改進(jìn)具有重要的意義。近年來，隨著分子生物學(xué)、遺傳免疫學(xué)、生物分析化學(xué)、代謝組學(xué)、影像學(xué)、生物信息學(xué)等學(xué)科的不斷發(fā)展，極大地促進(jìn)了產(chǎn)前篩查與診斷的深入研究及其技術(shù)手段的改進(jìn)。本課題研究內(nèi)容可分為兩部分：第一部分是基于SWNTs/CS免疫傳感器對血清中妊娠相關(guān)血漿蛋白-A競爭性檢測的新方法研究；第二部分是基于UPLC/Q-TOF-MS代謝組學(xué)平臺對妊娠期糖尿病的綜合性分析。具體內(nèi)容如下： 1.基于SWNTs/CS免疫傳感器競爭性檢測妊娠相關(guān)血漿蛋白-A的研究 妊娠相關(guān)血漿蛋白-A(PAPP-A)是一種大分子的血清糖蛋白，與唐氏綜合癥的聯(lián)系最為緊密傳統(tǒng)的檢測方法有：酶聯(lián)免疫法(ELISA)、時(shí)間分辨熒光免疫法、化學(xué)發(fā)光法等，但是這些方法需要專業(yè)的操作人員、對儀器要求高且昂貴、比較耗時(shí)費(fèi)力等。而與這些方法相比較，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的電化學(xué)傳感器用于血清PAPP-A的檢測，具有操作方便、成本較低的特點(diǎn)，為產(chǎn)前診斷技術(shù)提供了一種潛在的新方法。 本研究建立一種基于SWNTs/CS免疫傳感器競爭性檢測PAPP-A的新方法。PAPP-A共價(jià)結(jié)合到修飾有SWNTs/CS復(fù)合物的玻碳電極(GCE)上；在含有PAPP-A的孕婦血清中加入生物素標(biāo)記的PAPP-A抗體；并將電極在混合液中進(jìn)行孵育，使標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中的PAPP-A進(jìn)行免疫競爭反應(yīng)；再修飾鏈霉親和素標(biāo)記的堿性磷酸酶(ST-AP)，催化水解底物α-萘酚磷酸鹽(α-NP)，所產(chǎn)生電化學(xué)信號與樣品中的PAPP-A濃度呈反比。研究中對實(shí)驗(yàn)過程和條件進(jìn)行表征和優(yōu)化，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下檢測血清中PAPP-A的線性范圍為0.05~10μg mL-1,最低檢測限為39ng mL-1。并對線性范圍中不同的兩個(gè)PAPP-A濃度(1μg mL-1和10μg mL-1)進(jìn)行重復(fù)性和穩(wěn)定性考察：日內(nèi)變異系數(shù)分別是2.85%和6.40%；日間變異系數(shù)分別為3.39%和8.60%。因此，本實(shí)驗(yàn)所構(gòu)建的電化學(xué)方法具有較好的準(zhǔn)確性和靈敏度，且方便、低成本，為產(chǎn)前診斷技術(shù)提供了一種新的檢測途徑，具有較為重要的臨床意義。 2.基于UPLC/Q-TOF-MS對妊娠期糖尿病的代謝組學(xué)綜合性分析研究 目前，關(guān)于妊娠期糖尿病(GDM)的認(rèn)識，更多的是認(rèn)為妊娠前沒有任何程度的糖耐量異�；蛱谴x異常，妊娠期首次出現(xiàn)的糖尿病。近年來，大量的研究針對GDM的病因與發(fā)病機(jī)制進(jìn)行開展，，并且在多個(gè)方面都取得了很大的進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)利用高靈敏、高準(zhǔn)確性、高分離度，快速、自動化的UPLC/Q-TOF-MS代謝組學(xué)的研究平臺，對GDM孕婦血清中的動態(tài)代謝情況進(jìn)行檢測，并結(jié)合生物信息學(xué)的多變量統(tǒng)計(jì)分析方法，對疾病組與對照組及其產(chǎn)前、產(chǎn)后的差異代謝物進(jìn)行模式識別，實(shí)現(xiàn)對GDM疾病進(jìn)行綜合性的代謝組學(xué)研究，包括原始數(shù)據(jù)的預(yù)處理、主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)以及t-檢驗(yàn)（p㩳0.05）等；再將鑒別出的差異物進(jìn)行數(shù)據(jù)庫比對、核實(shí)，確定該化合物；然后再分析差異化合物的代謝途徑，以及與GDM疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。最終篩選出35種差異物，分別表現(xiàn)為上升或下降的不同變化趨勢(p 0.05)，這些差異物分別來自甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝；甘油磷脂代謝；類固醇激素代謝；丙酮酸代謝；脂肪酸代謝等。這些代謝主要涉及糖代謝途徑、脂類代謝途徑、氨基酸代謝途徑、核苷酸代謝途徑等。鑒別出的差異物不僅能作為潛在的疾病標(biāo)志物對GDM進(jìn)行篩查，還能作為疾病實(shí)時(shí)監(jiān)測的一種手段，利于疾病的早期診斷與干預(yù)管理，是未來臨床發(fā)展的新領(lǐng)域。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R714.5

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 車榮華;黃亞絹;;妊娠期糖尿病空腹血糖篩查的意義及其對妊娠結(jié)局的影響[J];國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2012年04期

2 彭媛;劉冉;李曉波;尹立紅;;應(yīng)用LC/TOF-MS分析食管鱗狀細(xì)胞癌血漿小分子代謝物的實(shí)驗(yàn)研究[J];癌變.畸變.突變;2013年06期

3 李清林;王玲;尹華;;基于代謝組學(xué)技術(shù)的中醫(yī)藥現(xiàn)代研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年11期

4 陳潔;陳海彬;周紅光;韓淳淳;;代謝組學(xué)在中醫(yī)虛證動物模型研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥雜志;2013年11期

5 楊永霞;丁佳佳;唐冰雯;王琳琳;毋福海;宋粉云;;醋制甘遂減毒的血漿代謝組學(xué)研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年10期

6 陳剛;徐文峰;王海峰;裴月湖;;基于代謝組學(xué)的厚樸與枳實(shí)配伍減毒機(jī)制分析[J];國際藥學(xué)研究雜志;2013年06期

7 吳明健;王玫;彭明麗;張大明;楊瑞琴;;運(yùn)用液相色譜聯(lián)合離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜法進(jìn)行海洛因成癮人員代謝組學(xué)研究[J];分析化學(xué);2014年04期

8 劉曉;仲人前;;唐氏綜合征產(chǎn)前篩查方法研究進(jìn)展[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年01期

9 吳明健;王玫;楊瑞琴;張大明;;基于液相色譜聯(lián)合離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)的海洛因?yàn)E用成癮大鼠血清代謝組學(xué)研究[J];分析試驗(yàn)室;2014年02期

10 劉姍姍;陶金忠;趙興緒;武小虎;趙國順;;代謝組學(xué)分析技術(shù)及其在生殖領(lǐng)域中的應(yīng)用[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年03期

相關(guān)會議論文 前2條

1 付晗;劉小立;于微;朱李佳;鄭丹;王俊;;中年2型糖尿病患者尿液生物標(biāo)志初篩[A];達(dá)能營養(yǎng)中心青年科學(xué)工作者論壇優(yōu)秀論文集2013年第6期[C];2013年

2 曹瑞麗;郭靜利;孫博;張琪;楊征;顏賢忠;;不同地域人群血清代謝譜分析[A];第十八屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 廖明陽;納米銅和微米銅的毒性比較研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

2 黃重陽;喹賽多毒理性質(zhì)的代謝組學(xué)研究[D];中國科學(xué)院研究生院（武漢物理與數(shù)學(xué)研究所）;2013年

3 楊維;基于LC-MS/MS技術(shù)的肺癌血漿代謝組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

4 徐婧;基于RRLC-MS/MS技術(shù)的食管癌代謝組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 賈璞;基于“良”關(guān)系的丹參—紅花藥對效應(yīng)物質(zhì)研究[D];西北大學(xué);2013年

6 田鶴;組合式離子化RRLC-MS/MS方法與~1H NMR技術(shù)的肺癌血漿代謝組學(xué)分析方法研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 王麗群;春大豆種子田間劣變抗性的評價(jià)及抗性機(jī)理的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 林太杰;基于~1NMR代謝組學(xué)方法研究阿托伐他汀對肺動脈高壓大鼠的代謝模式影響及分子機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 張碩;子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕相關(guān)研究及重組人促黃體生成素對輔助生育結(jié)局的影響[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

10 崔洪艷;妊娠11-13~(+6)周胎兒染色體非整倍體異常產(chǎn)前篩查與診斷策略[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 杜鵑;妊娠期糖尿病的臨床研究[D];山東大學(xué);2007年

2 李世哲;烏頭類中藥禁忌配伍的抗氧化活性研究[D];長春師范大學(xué);2013年

3 李盼盼;以二肽復(fù)合材料自組裝為基礎(chǔ)的電化學(xué)生物傳感器研究[D];北京化工大學(xué);2013年

4 崔飛;基于功能化石墨烯構(gòu)建電化學(xué)傳感器及免疫傳感器[D];山東大學(xué);2013年

5 李變鋒;高脂高糖誘導(dǎo)妊娠期胰島素抵抗大鼠模型的建立與評價(jià)及飲食干預(yù)對其的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

6 朱旭婷;基于代謝組學(xué)評價(jià)中藥對CCl_4致肝損傷的藥效[D];蘇州大學(xué);2013年

7 郭泓江;探索早孕期NT篩查的臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 董棟;MDM2基因組成型啟動子40-bp插入/缺失多態(tài)性與肝細(xì)胞肝癌易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

9 劉廣帥;雪豹腸道菌群多樣性研究[D];曲阜師范大學(xué);2013年

10 程銀鋒;基于金屬納米粒子和金屬氧化物納米粒子構(gòu)建的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的研究[D];西南大學(xué);2013年

本文編號：2472459