【摘要】：目的:卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。臨床研究表明卵巢癌患者術(shù)后接受化療治療是必不可少的,而以鉑類(lèi)為基礎(chǔ)的化療方案被視為標(biāo)準(zhǔn)方案,在臨床中廣泛使用。盡管化療藥物不斷更新,但患者5年生存率仍未得到有效提高,其主要原因是腫瘤細(xì)胞耐藥。本研究旨在探討稀土氯化鑭增強(qiáng)卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞的順鉑敏感性,并對(duì)其相關(guān)機(jī)制做初步研究,為順鉑耐藥性卵巢癌患者的治療提供新思路和理論依據(jù)。方法:1、MTT法檢測(cè)不同濃度順鉑(0.01、0.1、1、10、100μg/mL)對(duì)COC1和COC1/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率,并計(jì)算DDP的半數(shù)抑制濃度(IC50)及耐藥指數(shù)(RI)。2、MTT法檢測(cè)不同濃度氯化鑭(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0μmol/L)培養(yǎng)COC1和COC1/DDP細(xì)胞48h后的增殖抑制率;用上述濃度的氯化鑭分別與相應(yīng)的IC50濃度DDP聯(lián)合培養(yǎng)COC1和COC1/DDP細(xì)胞48h,MTT法檢測(cè)氯化鑭對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率。3、分別用0、0.5、1.5、4.0μmol/L氯化鑭培養(yǎng)COC1和COC1/DDP細(xì)胞48h,用透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。4、COC1和COC1/DDP細(xì)胞分別設(shè)為對(duì)照組、順鉑組、氯化鑭組、氯化鑭+順鉑組,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組COC1和COC1/DDP細(xì)胞的凋亡率。5、COC1/DDP細(xì)胞設(shè)為對(duì)照組、順鉑組、氯化鑭組、氯化鑭+順鉑組,培養(yǎng)48h后用Western Blot法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1、順鉑對(duì)COC1和COC1/DDP細(xì)胞均有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,并隨著順鉑濃度的增加而增強(qiáng),有明顯的劑量依賴性。COC1細(xì)胞株的IC50為2.06μg/ml,COC1/DDP細(xì)胞株的IC50為23.08μg/ml,耐藥指數(shù)為11.19倍。2、MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率:COC1細(xì)胞組,氯化鑭對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率隨濃度的增加而增強(qiáng),當(dāng)氯化鑭濃度為1.5μmol/L及其以下時(shí),藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率低,與對(duì)照組相比P0.05,氯化鑭濃度為1.5μmol/L以上時(shí),藥物對(duì)細(xì)細(xì)胞的抑制率較高,并隨氯化鑭濃度增高而提高,與對(duì)照組比較P0.05;COC1+DDP細(xì)胞組,氯化鑭濃度低于1.5μmol/L時(shí),藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率仍低,與對(duì)照組比較P0.05,但其抑制率隨氯化鑭濃度的升高而增強(qiáng),當(dāng)氯化鑭濃度為1.5μmol/L及其以上時(shí),藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率明顯升高,與對(duì)照組比較P0.05。COC1/DDP細(xì)胞中觀察結(jié)果與COC1細(xì)胞類(lèi)似。故認(rèn)為1.5μmol/L氯化鑭單藥對(duì)卵巢癌細(xì)胞無(wú)明顯毒副作用,而與順鉑聯(lián)合使用可以明顯增強(qiáng)細(xì)胞毒性作用,選此濃度為增敏效果最佳濃度,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。3、透射電子顯微鏡下觀察顯示:0和0.5μmol/L氯化鑭組,COC1和COC1/DDP細(xì)胞形態(tài)正常,核膜完整,細(xì)胞器和細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰,胞內(nèi)無(wú)空泡,兩組間差異不明顯。1.5μmol/L氯化鑭組兩株細(xì)胞均出現(xiàn)微量皺縮,細(xì)胞狀態(tài)較前2組狀態(tài)稍差。4μmol/L氯化鑭組細(xì)胞凋亡嚴(yán)重,出現(xiàn)凋亡小體。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率:對(duì)照組、順鉑組、氯化鑭組、氯化鑭+順鉑組處理后COC1細(xì)胞的凋亡率分別為5.52±0.92%、25.40±4.38%、7.22±2.55%、27.54±4.03%;對(duì)照組、順鉑組、氯化鑭組、氯化鑭+順鉑組處理后COC1/DDP細(xì)胞的凋亡率分別為4.60±1.11%、18.24±2.81%、5.59±1.73%、29.12±5.38%。變化趨勢(shì)與MTT法檢測(cè)結(jié)果一致。5、Western Blot法檢測(cè)結(jié)果示:ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白在對(duì)照組、氯化鑭組、順鉑組、氯化鑭+順鉑組中的表達(dá)均逐漸下調(diào),呈下降趨勢(shì)。與對(duì)照組相比,氯化鑭組ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl 4種蛋白表達(dá)均下調(diào),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);順鉑組和氯化鑭+順鉑組中,ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組,差異有顯著性(P0.01);氯化鑭+順鉑組與順鉑組比較,4種蛋白表達(dá)均明顯下調(diào),差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.5μmol/L的氯化鑭對(duì)卵巢癌COC1和COC1/DDP細(xì)胞均無(wú)明顯抑制作用,但與順鉑共培養(yǎng)可增強(qiáng)順鉑對(duì)卵巢癌COC1和COC1/DDP細(xì)胞的抑制增殖作用及促進(jìn)凋亡作用。氯化鑭可能通過(guò)調(diào)節(jié)ERCC1、Ki67、CDK6及c-Cbl的表達(dá),從而提高卵巢癌耐順鉑細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性,但其具體調(diào)節(jié)機(jī)制還需更多研究。
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【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2471246