【摘要】：研究背景:出生缺陷是指嬰兒出生前發(fā)生的身體結(jié)構(gòu)、功能或代謝異常,包括先天肢體或器官畸形、遺傳代謝缺陷、先天功能殘疾、免疫性疾病、智力低下等。其造成因素多種多樣,有遺傳因素、環(huán)境因素,或二者共同作用致病。隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展,孕產(chǎn)婦、兒童死亡率逐步降低,出生缺陷也日益成為突出的公共衛(wèi)生問題甚至是社會問題。我國是人口大國,也是出生缺陷的高發(fā)國家之一,出生缺陷已成為影響我國優(yōu)生優(yōu)育和出生人口健康素質(zhì)的重大問題,也嚴重影響社會主義和諧社會的建設(shè)。它不僅是導致早期自然流產(chǎn)、圍產(chǎn)兒死亡、嬰幼兒死亡以及先天殘疾的重要原因,也嚴重危害兒童的生存和生命質(zhì)量,影響家庭幸福,造成巨大的社會和家庭經(jīng)濟負擔。出生缺陷監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示,我國出生缺陷總發(fā)生率約為5.6%(中國出生缺陷防治報告,2012)。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計,全球低收入國家的出生缺陷發(fā)生率為6.42%,中等收入國家為5.57%,高收入國家為4.72%,我國出生缺陷發(fā)生率與世界中等收入國家的平均水平接近,但由于人口基數(shù)大,每年新增出生缺陷病例總數(shù)龐大。而產(chǎn)前診斷是杜絕和減少出生缺陷唯一有效的方法。結(jié)節(jié)性硬化癥(Tuberous Sclerosis Complex,TSC)是一種較為常見的出生缺陷,其發(fā)病率約為1/6000-10000。中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤是導致死亡的主要原因,腎臟疾病為第二位原因。其臨床癥狀多變,從皮膚色素脫失斑,癲癇,智力低下,自閉癥,到腎臟、大腦、心臟、肺等器官的錯構(gòu)瘤損害,嚴重程度無法預測。盡管有明確的臨床診斷標準,但在實際應用中仍具有一定困難。對于年輕患者,尚缺乏典型的臨床癥狀,或者具有嚴重的臨床癥狀但缺乏特異性,如癲癇、智力低下、自閉癥,此時應選擇基因檢測來確診。胎兒期雖可通過超聲心動圖檢出心臟橫紋肌瘤,磁共振成像(MRI)檢出室管膜下結(jié)節(jié),但該臨床癥狀出現(xiàn)時間不確定,且影像學作為輔助檢查手段存在非特異性,往往不能得到確診結(jié)果。因此,產(chǎn)前診斷應以基因檢測做為首選方法。TSC1、TSC2基因比較大,致病突變數(shù)量多且無突變熱點存在,基因檢測非常復雜。經(jīng)過40年的發(fā)展,測序技術(shù)經(jīng)歷了從第一代到第三代的演變,通量和百萬堿基測序費用也越來越接近臨床的要求。圍繞速度、通量、價格這三個因素,一般將測序技術(shù)分為3代,而將第二、第三代測序技術(shù)統(tǒng)稱為新一代高通量測序技術(shù)。第一代核酸測序技術(shù)(Sanger測序法)檢測和分析過程非常耗費人力、費時、效率低。對電泳分離技術(shù)的依賴,使得該測序系統(tǒng)無法再進一步擴大通量和微量化。高通量測序高度平行化,即成千上萬個測序反應可以在一個平臺同時進行,且反應體系非常小,在很短的時間內(nèi)獲得大量的堿基信息,費用也大大降低。目的:對TSC先證者進行基因突變檢測,并在基因診斷結(jié)果明確的基礎(chǔ)上應用于產(chǎn)前診斷。方法:對臨床確診、可疑TSC的患者或產(chǎn)前超聲異�？梢蒚SC的胎兒共13個家系,采用高通量測序平臺對TSC相關(guān)基因(TSC1、TSC2)外顯子及其上下游10bp的非編碼區(qū)進行檢測,確定基因突變位點。在突變位點上下游設(shè)計擴增引物,采用Sanger測序法對先證者及其家系成員進行測序驗證,分析突變來源,并復習文獻,最后對患病家系行相應基因突變位點的產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷結(jié)果為陰性的家系,胎兒娩出后行臍血相應基因突變位點Sanger測序,以驗證產(chǎn)前診斷的準確性。結(jié)果:13個家系均檢出基因突變,其中1例TSC1基因突變,12例TSC2基因突變,已知致病突變10例,新發(fā)可疑致病突變3例。12個家系行產(chǎn)前診斷,其中陽性2例,陰性10例,陽性病例夫婦最終決定終止妊娠,陰性病例胎兒娩出后臍血相應基因突變位點測序與產(chǎn)前一致。結(jié)論:TSC2基因 c.2415-2416insGT、c.3981-3982 insA、c.4013-4014 delCA為新發(fā)可疑致病突變,均為TSC2的框移突變,不僅豐富了 TSC基因突變譜,而且給突變蛋白細胞模型和動物模型的進一步驗證提供了資料。且成功對12個TSC家系行產(chǎn)前基因診斷,基因位點包括TSC1基因c.2074CT,TSC2基因c.1832GC、c.5227CT、c.2713CT、c.2415-2416insGT、c.3352CT、c.4013-4014 delCA、c.5024CT、c.1432CT、c.3981-3982 insA、c.880GA、c.4541-4544 delCAAA 11個,減少了出生缺陷的發(fā)生。
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【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R714.5

【參考文獻】

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1 潘玉純;吳維青;謝建生;羅彩群;郝穎;;結(jié)節(jié)性硬化癥的兩個TSC2基因新發(fā)框移突變[J];中國當代兒科雜志;2017年03期

2 王俊;吳秀秀;徐凱峰;;開展多學科協(xié)作以切實提高結(jié)節(jié)性硬化癥診療水平[J];臨床誤診誤治;2016年10期

3 劉曉偉;谷孝艷;郝曉艷;商建峰;韓玲;何怡華;;超聲聯(lián)合遺傳學檢查在胎兒心臟橫紋肌瘤中的臨床應用[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2016年06期

4 曾躍平;毛笑非;孫秋寧;方凱;;超脈沖二氧化碳激光治療結(jié)節(jié)性硬化癥患者面部血管纖維瘤3例[J];臨床皮膚科雜志;2013年12期

5 楊曉玲;劉君君;;影像學檢查對室管膜下巨細胞星形細胞瘤的診斷價值[J];長江大學學報(自然科學版);2013年18期

6 吳貴賢;崔茂榮;張小德;徐躍文;陳釗;張學剛;李翔;;結(jié)節(jié)性硬化癥基因研究發(fā)展狀態(tài)綜述[J];中國醫(yī)藥指南;2010年26期

7 張桂珍,丁文虹,鄭春華,耿斌;超聲對胎兒心臟橫紋肌瘤的診斷價值[J];中國超聲醫(yī)學雜志;2005年05期

8 周光金,趙玉武;結(jié)節(jié)性硬化癥的遺傳和病理發(fā)生機制[J];國外醫(yī)學.遺傳學分冊;2005年02期

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1 嚴愷;聯(lián)合運用測序及MLPA技術(shù)對結(jié)節(jié)性硬化癥患者進行遺傳學診斷[D];中南大學;2012年

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本文編號：2435903