【摘要】：背景:現(xiàn)階段治療上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)仍是腫瘤臨床工作中所面臨的的一大挑戰(zhàn)。首次根治性治療即腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)及術(shù)后進(jìn)行以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療對于絕大部分卵巢腫瘤患者是有效的,緩解率可以達(dá)到80%,但殘留下的腫瘤細(xì)胞會成為隱患。復(fù)發(fā)患者因腫瘤侵潤周圍正常臟器或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,二次手術(shù)切除概率低,患者會選擇周期化療控制疾病進(jìn)展。而反復(fù)、多藥聯(lián)合常導(dǎo)致多耐藥發(fā)生。復(fù)發(fā)、耐藥兩大主要因素使得卵巢癌始終位于婦科腫瘤病死率首位。怎樣預(yù)測,如何逆轉(zhuǎn)耐藥的發(fā)生,如何擬定有效的治療策略,成為卵巢癌治療研究領(lǐng)域的重點(diǎn)及難點(diǎn)。卵巢癌腹水常預(yù)示不良預(yù)后,至今無有效控制手段。臨床多以反復(fù)穿刺引流和腹腔灌注化療為主要治療方式。惡性腹水形成了卵巢癌特殊的腫瘤微環(huán)境,與腫瘤的異質(zhì)性和腫瘤生物行為學(xué)關(guān)系密切。很多學(xué)者對腹水成分進(jìn)行分離鑒定,分析發(fā)現(xiàn)惡性腹水中的細(xì)胞因子與卵巢癌疾病預(yù)后關(guān)系密切,可作為腫瘤的特異性標(biāo)志物;惡性腹水中的可溶性成分參與多種信號通路活化,促進(jìn)細(xì)胞的增殖、侵襲、免疫逃逸、轉(zhuǎn)移及抗藥;腹水中的細(xì)胞成分會表達(dá)腫瘤干細(xì)胞表型,惡性度高,與腫瘤的分化及異質(zhì)性關(guān)系密切。盡管關(guān)于腹水探究近年來備受關(guān)注,但是以腹水作為整體,探討其對于卵巢癌的影響的研究并不多。目的:本實(shí)驗(yàn)中我們從臨床患者中獲取卵巢癌腹水非細(xì)胞成分,以其為培養(yǎng)條件對卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),了解腹水對腫瘤細(xì)胞系的增殖、凋亡、耐藥等作用的影響,并探究可能涉及的機(jī)制,為腹水對卵巢癌進(jìn)展作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1.以超聲引導(dǎo)腹腔穿刺引流的方式獲得38例卵巢癌腹水,通過高速離心機(jī)過濾分離出腹水非細(xì)胞成分,用以培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細(xì)胞系,并分為實(shí)驗(yàn)組(腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)組)和對照組(胎牛血清培養(yǎng)組)。2.采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測卵巢癌腹水非細(xì)胞成分對SKOV3細(xì)胞系的生長增殖情況影響,并繪制相關(guān)細(xì)胞生長曲線,比較兩組差異。4.對實(shí)驗(yàn)組和對照組的細(xì)胞行不同濃度藥物(順鉑及Akt特異性抑制劑LY294002)的處理,采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測各組SKOV3細(xì)胞對順鉑、LY294002及兩藥聯(lián)合的敏感程度的變化情況。5.應(yīng)用化療藥物(順鉑、LY294002及順鉑聯(lián)合LY294002)處理不同培養(yǎng)條件的SKOV3細(xì)胞系24小時(shí),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組細(xì)胞凋亡變化情況。6.采用Western Blot法檢測耐藥相關(guān)蛋白、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白、凋亡通路相關(guān)蛋白在胎牛血清處理組和腹水非細(xì)胞成分處理組的表達(dá)水平情況,并比較兩個(gè)差異變化。7.采用Western Blot檢測PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白在腹水非細(xì)胞成分處理組及血清處理組的表達(dá)水平改變情況,了解該通路在本實(shí)驗(yàn)的作用。結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示;腹水非細(xì)胞成分可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖,腹水微環(huán)境與腫瘤增殖關(guān)系密切,由細(xì)胞增殖曲線可以看出,相對血清培養(yǎng)組,腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)的SKOV3細(xì)胞系生長增殖較快,增殖平臺期也相應(yīng)提前,細(xì)胞倍增時(shí)間明顯縮短(P0.05)。2.對實(shí)驗(yàn)組(腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)組)和對照組(血清培養(yǎng)組)的細(xì)胞行不同濃度順鉑處理后,采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測各組SKOV3細(xì)胞對順鉑敏感性變化情況。結(jié)果顯示:腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)后順鉑對SKOV3細(xì)胞系的抑制情況明顯的低于血清培養(yǎng)組,實(shí)驗(yàn)組順鉑的IC50值為16.23±2.45ug/ml,而對照組順鉑的IC50值則為7.91士0.19ug/ml,二者差異明顯(P0.001),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞對順鉑藥物敏感程度下降了約1.05倍,并且在相同濃度的順鉑作用下,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率均低于對照組(p0.05)。3.檢測不同濃度LY294002對實(shí)驗(yàn)組及對照組細(xì)胞抑制率情況,可見經(jīng)不同濃度刺激后,各組SKOV3細(xì)胞系抑制率隨濃度的升高而升高,實(shí)驗(yàn)組在相同濃度LY294002刺激下其SKOV3細(xì)胞系抑制率均低于對照組(P0.05)。4.聯(lián)合LY294002及順鉑刺激實(shí)驗(yàn)組及對照組SKOV3細(xì)胞系,LY294002可逆轉(zhuǎn)腹水非細(xì)胞成分所導(dǎo)致的順鉑耐藥情況,接受LY294002的SKOV3細(xì)胞系其抑制率明顯高于未接受LY294002處理的細(xì)胞(P0.05)。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),在未接受藥物處理前,實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞凋亡情況無明顯差異(P0.05),順鉑作用24小時(shí)后,腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)的SKOV3細(xì)胞系凋亡情況顯著的低于對照組(P0.05),順鉑聯(lián)合LY294002作用后24小時(shí)后,由腹水非細(xì)胞成分導(dǎo)致的抗凋亡情況可逆轉(zhuǎn),接受LY294002預(yù)處理的SKOV3細(xì)胞系凋亡顯著高于未接受LY294002組(p0.05)。6.Western Blot結(jié)果顯示:卵巢癌腹水非細(xì)胞成分可增加耐藥相關(guān)蛋白P-gp和MRP1表達(dá),可增加細(xì)胞周期蛋白Aurora-A和53BP1表達(dá)(P0.05),可增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)(p0.05),但促凋亡蛋白Bax表達(dá)無顯著增加(p0.05),凋亡通路蛋白無活化切割,PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白表達(dá)增高(p0.05)。7.接受LY294002處理后,腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)組SKOV3細(xì)胞的Bcl-2蛋白表達(dá)下降,但對耐藥相關(guān)蛋白P-gp和MRP1、周期相關(guān)蛋白Aurora-A和53BP1表達(dá)無明顯影響。結(jié)論:1.經(jīng)卵巢癌的腹水非細(xì)胞成分培養(yǎng)后,SKOV3細(xì)胞株的生長增殖能力提高,增殖平臺期提前,細(xì)胞倍增時(shí)間明顯縮短。2.卵巢癌的腹水非細(xì)胞成分可降低SKOV3細(xì)胞株對順鉑的抑制率,由順鉑的細(xì)胞引起的細(xì)胞凋亡被抑制,該凋亡及抑制情況可被PI3K抑制劑LY294002逆轉(zhuǎn),說明其卵巢癌腹水非細(xì)胞成分的促耐藥及抗凋亡過程可能與PI3K/Akt通路相關(guān)。3.卵巢癌的腹水非細(xì)胞成分可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞耐藥蛋白P-gp和MRP1表達(dá),可促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白Aurora-A和53BP1的表達(dá),可促進(jìn)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),但與促凋亡蛋白Bax無關(guān),PI3K/Akt通路參與腹水非細(xì)胞成分對Bcl-2的調(diào)控。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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1 黃昊;楊星九;高苒;;胃癌多藥耐藥機(jī)制及研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2016年06期

2 譚影;馮晴;孫信;薛敏;姜寧;鄧新糧;;甲基硒酸對人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年12期

3 Yu Zhang;Li-Ke Yu;Ning Xia;;Evaluation of serum and pleural levels of endostatin and vascular epithelial growth factor in lung cancer patients with pleural effusion[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2012年03期

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本文編號：2418338