【摘要】：背景:放射性~(131)I治療是臨床上用于甲亢及分化型甲狀腺癌治療的常規(guī)方法,但游離~(131)I在非甲狀腺細胞內(nèi)幾乎沒有攝取,目前利用納米載體的靶向性和緩釋性的特點,解決了既往研究中對非甲狀腺腫瘤細胞進行放射性碘治療靶向差和細胞內(nèi)存留時間短的問題。既往研究也發(fā)現(xiàn)使用直接標記法構建的核素納米載體,由于單位質量納米載體可攜帶的~(131)I量有限,故在動物實驗中治療效果欠佳。擬使用~(131)I標記隨機酪氨酸多肽鏈并包裹于納米脂質體的方法制備新型多功能核素納米脂質體,以提高單位納米脂質體攜帶~(131)I量,并在宮頸癌He La細胞及裸鼠模型中進行實驗研究。目的:比較納米脂質體包裹~(131)I標記酪氨酸多肽鏈與~(131)I直接標記納米脂質體兩種的方法的不同,及各自在宮頸癌體內(nèi)、外實驗中的差異。為放射性核素納米脂質體的制備提供開闊新視野,并期望可以為宮頸癌的治療提供一種新方法。方法:第一部分為核素納米脂質體的構建及采用紙層析法分析單位納米脂質體的最大標記量、標記率及放化純。第二部分為核素納米脂質體細胞水平研究:1)通過共聚焦顯微鏡顯像結果分析納米脂質體在He La細胞系的靶向性結合和攝取能力;2)初步評估核素納米脂質體在腫瘤細胞內(nèi)的存留時間及He La細胞對于~(131)I的攝取量;3)利用MTS法分析核素納米脂質體的半抑制劑量(IC_(50)值);并在此基礎上利用流式細胞儀觀察核素納米脂質體對He La細胞的凋亡效果。第三部分為核素納米脂質體動物水平實驗,1)采用3-4周齡雌性裸鼠構建宮頸癌種植瘤模型;2)利用γ計數(shù)儀測定核素納米脂質體在裸鼠體內(nèi)組織分布情況;3)運用SPECT/CT斷層顯像進行核素納米脂質體RGD-~(131)I-TPC-L、~(131)I-RGD-L及Na~(131)I在裸鼠種植瘤內(nèi)的定位并初步觀察其在體內(nèi)的存留時間;4)將裸鼠分為RGD-~(131)I-TPC-L組、~(131)I-RGD-L組、Na~(131)I組及生理鹽水組,研究各治療組對裸鼠種植瘤的治療效果等。結果:成功制備兩種核素納米脂質體分別為RGD-~(131)I-TPC-L(納米脂質體包裹~(131)I標記的酪氨酸多肽鏈)和~(131)I-RGD-L(~(131)I直接標記納米脂質體),兩種核素納米脂質體單位納米脂質體的最大標記量、標記率分別為(6.3±0.8m Ci VS2.7±0.6m Ci),(85.3±7.4%VS 72.5±9.8%)(P0.05)。在細胞水平實驗中,共聚焦顯微鏡實驗表明He La細胞可以明顯攝取納米脂質體,通過γ計數(shù)儀顯像結果顯示加入核素納米脂質體后6h時攝碘量達到高峰,RGD-~(131)I-TPC-L組的最高攝碘量高于~(131)I-RGD-L組,但在同等放射性劑量的前提下,兩組核素納米脂質體攝碘量未見明顯統(tǒng)計學差異。采用ESACalc分析得出兩種核素納米脂質體RGD-~(131)I-TPC-L和~(131)I-RGD-L的IC_(50)值分別為43.6μCi VS 50.3μCi。在同等劑量(50μCi ~(131)I)的前提下,Na~(131)I組、RGD-~(131)I-TPC-L組和~(131)I-RGD-L組對Hela細胞的晚期凋亡率分別為5.1±0.39%、10.3±0.67%和11.9±0.40%(P0.05)。在動物水平實驗中,成功構建宮頸癌裸鼠模型,宮頸癌裸鼠種植瘤內(nèi)注射藥物24h、48h、72h后,腫瘤組織對游離Na~(131)I組、RGD-~(131)I-TPC-L組和~(131)I-RGD-L組的攝取分別為(0.41±0.12%ID/g,0.31±0.08%ID/g,0.29±0.10%ID/g)VS(25.71±5.13%ID/g,17.47±3.43%ID/g,8.75±2.64%ID/g)VS(19.73±4.66%ID/g,9.92±2.11%ID/g,3.60±1.03%ID/g),(P0.05);SPECT/CT斷層顯像顯示核素納米脂質體在腫瘤內(nèi)可見明顯清晰顯像且存留時間較長,Na~(131)I在裸鼠腫瘤內(nèi)顯影淺淡且清除較快。病理切片HE染色顯示各組裸鼠心、肝、脾、腎等主要器官未見明顯組織破壞,RGD-~(131)I-TPC-L及~(131)I-RGD-L組腫瘤組織鏡下可見大片腫瘤細胞變性壞死。在治療療效方面,通過比較腫瘤體積相對增殖率可明確兩組核素納米脂質體均對宮頸癌裸鼠模型具有陽性治療效果,而Na ~(131)I組無明顯治療效果。RGD-~(131)I-TPC-L組核素納米脂質體比~(131)I-RGD-L組具有更高的抑瘤率,更低的腫瘤體積相對增殖率,表明RGD-~(131)I-TPC-~(131)I核素納米脂質體對于宮頸癌具有較好的治療效果。結論:與~(131)I-RGD-L相比,RGD-~(131)I-TPC-L核素納米脂質體具有更高的最大標記量及標記率,因此納米脂質體包裹~(131)I標記酪氨酸多肽鏈比~(131)I直接標記在納米脂質體表面的方法具有更好的標記效果,可以成為以后構建核素納米脂質體的方法。RGD-~(131)I-TPC-L核素納米脂質體在宮頸癌細胞及裸鼠模型中具有較好的抑制腫瘤生長的作用,可以為宮頸癌治療提供新思路。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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本文編號：2377482