【摘要】：多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）是一種生育期女性中常見(jiàn)的內(nèi)分泌異常的代謝綜合征，在全世界范圍內(nèi)發(fā)病率約5%-10%且逐漸上升。PCOS非常重要的一個(gè)內(nèi)分泌特征即是高雄激素血癥，能夠?qū)е屡怕颜系K、不孕、肥胖、糖尿病等一系列臨床癥狀，嚴(yán)重影響婦女身心健康。細(xì)胞色素P450芳香化酶（cytochrome P450aromatase, P450arom）是卵巢顆粒細(xì)胞中催化雄激素生成雌激素的最重要的限速酶之一，與高雄激素血癥的發(fā)生密切相關(guān)，，其功能或調(diào)控機(jī)制若發(fā)生異常，則會(huì)導(dǎo)致雄激素水平變化。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferater-activated receptor, PPARγ)是一種核內(nèi)受體，許多研究表明，PPARγ被激活后能夠?qū)450arom的表達(dá)及活性產(chǎn)生抑制作用，提示PPARγ對(duì)P450arom具有調(diào)控作用，但具體機(jī)制尚不清楚。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β/Smads信號(hào)途徑（Transforming growth factor-β/Smadsignaling pathway）在人體中參與多種生物學(xué)過(guò)程，在卵母細(xì)胞的成熟、雌激素的分泌以及顆粒細(xì)胞的增殖等過(guò)程中均發(fā)揮著重要的作用。Smad2蛋白是TGF-β/Smads途徑下游最為重要的核內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，被激活發(fā)生磷酸化后發(fā)揮作用，因此學(xué)者們常用Smad2蛋白的磷酸化水平來(lái)代表TGF-β/Smads的激活程度。有研究表明：TGF-β/Smads信號(hào)途徑能夠調(diào)節(jié)P450arom的基因CYP19的表達(dá)從而促進(jìn)P450arom的表達(dá)。在人體其他組織中，PPARγ能夠通過(guò)抑制Smad2蛋白磷酸化來(lái)阻斷TGF-β/Smads信號(hào)途徑從而調(diào)控目的基因的表達(dá)。我們行前期研究發(fā)現(xiàn)：與正常對(duì)照組相比，PCOS患者的卵巢顆粒細(xì)胞中PPARγ表達(dá)明顯增高，p-Smad2蛋白、P450arom表達(dá)明顯降低，且PPARγ表達(dá)與p-Smad2蛋白表達(dá)負(fù)相關(guān)，P450arom表達(dá)與p-Smad2蛋白表達(dá)正相關(guān)。那么在卵巢中，PPARγ是否通過(guò)影響TGFβ/Smads信號(hào)途徑從而影響P450arom的表達(dá)，導(dǎo)致PCOS患者雄激素水平升高？本課題將就這一問(wèn)題行進(jìn)一步的深入研究。 目的 1.測(cè)定雄激素正常的PCOS組（NA-PCOS）、伴高雄激素血癥的PCOS組（HA-PCOS）以及正常對(duì)照組患者經(jīng)過(guò)不同濃度PPARγ激動(dòng)劑（羅格列酮）干預(yù)處理的體外培養(yǎng)卵巢顆粒細(xì)胞中PPARγ、P450arom mRNA表達(dá)，Smad2、p-Smad2蛋白表達(dá)水平。 2.探討卵巢顆粒細(xì)胞中PPARγ對(duì)P450arom表達(dá)的調(diào)控作用及TGFβ/Smads信號(hào)途徑是否參與其中。 材料與方法 選擇2013.11~2014.02在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心行體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）助孕治療的患者共30例。將其分為三組：第一組為雄激素正常的PCOS組（NA-PCOS組）患者共10例，第二組為PCOS伴高雄激素血癥（HA-PCOS組）患者共10例，第三組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組即同期因輸卵管因素導(dǎo)致不孕的患者10例。所有患者于月經(jīng)第2-4天以及HCG注射日空腹抽取外周靜脈血，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)性激素水平；所有患者均使用我中心常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)方案促排卵。于取卵當(dāng)天收集患者所有卵泡液，立即提取顆粒細(xì)胞并行體外培養(yǎng)，將每例患者的顆粒細(xì)胞分為三組，分別給予濃度為0、1、10nmol/L的羅格列酮進(jìn)行干預(yù)并繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)48h后的顆粒細(xì)胞再分為兩部分，第一部分提取顆粒細(xì)胞總RNA，使用RT-PCR測(cè)定PPARγ、P450arom mRNA表達(dá)；第二部分使用Western blot測(cè)定Smad2、p-Smad2蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果 1.三組比較，患者的不孕年限、年齡、血清基礎(chǔ)雌二醇（E2）及卵泡刺激素（FSH）、HCG注射日每卵泡血清E2水平、Gn使用的時(shí)間及Gn用量均無(wú)差異（P＞0.05）；NA-PCOS組與HA-PCOS組的血清黃體生成素（LH）、睪酮（T）水平均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；HA-PCOS組的LH、T水平高于NA-PCOS組（P＜0.05）。 2.加入濃度為0nmol/L的羅格列酮時(shí)，NA-PCOS組與HA-PCOS組患者卵巢顆粒細(xì)胞PPARγ mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），P450arommRNA表達(dá)水平與p-Smad2蛋白水平則均顯著降低（P＜0.05）。HA-PCOS組與NA-PCOS組相比，PPARγ mRNA表達(dá)水平高而P450arom mRNA表達(dá)水平、p-Smad2蛋白水平低。三組間Smad2蛋白水平未見(jiàn)明顯差異。 3.加入濃度為1、10nmol/L的羅格列酮時(shí)，三組的PPARγ mRNA表達(dá)水平均隨羅格列酮濃度增高而表達(dá)增多，而P450arom mRNA表達(dá)水平與p-Smad2蛋白水平均隨PPARγ mRNA表達(dá)增多而降低。且三組中HA-PCOS組相較于其他兩組PPARγ mRNA表達(dá)水平均高（P＜0.05），P450arom mRNA表達(dá)水平與p-Smad蛋白水平均低（P＜0.05）。三組間Smad2蛋白水平無(wú)明顯差異。 結(jié)論 1．PPARγ可能通過(guò)阻礙Smad2蛋白磷酸化從而抑制了P450arom表達(dá)。 2．在卵巢顆粒細(xì)胞中TGF-β/Smads信號(hào)途徑可能參與了PPARγ對(duì)P450arom的調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R711.75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2377336