發(fā)布時間：2018-10-19 17:53

【摘要】：1.研究背景及目的 1.1研究背景： 妊娠期高血壓疾病(]hypertensive disorder complicating pregnancy, HDCP)是妊娠期特有的疾病,以高血壓和／或蛋白尿為最早出現(xiàn)臨床癥狀,隨后出現(xiàn)腦、心、肝、腎等多臟器損害為結(jié)果的臨床過程,是增加孕產(chǎn)婦及胎兒發(fā)病率和死亡率的主要原因之一,其發(fā)生率在我國9.4%,國外報道2%-10%[1,2],已經(jīng)成為全球性的人類健康問題。 近年來,子癇前期病因及發(fā)病機(jī)制的研究一直是產(chǎn)科的熱點,其中研究比較熱門的是血管內(nèi)皮損傷學(xué)說、胎盤缺血缺氧學(xué)說、免疫學(xué)說、遺傳學(xué)說和滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)異常學(xué)說等。臨床病理研究已證實,子癇前期的病理改變發(fā)生在臨床癥狀出現(xiàn)前,表現(xiàn)為胎盤淺著床、體積小、絨毛數(shù)量減少、血管內(nèi)皮功能障礙、間質(zhì)纖維化和免疫平衡失調(diào)等。子癇前期發(fā)病越早,預(yù)后越差,孕周越小,母親的并發(fā)癥越多,胎死宮內(nèi)和圍生兒死亡率也越高。新生兒患病率和病死率也與孕周相關(guān),孕周越小,發(fā)病率越高。早發(fā)型重度子癇前期發(fā)生在24孕周前,其圍生兒幾乎不能存活。子癇前期的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜,到目前為止尚無準(zhǔn)確的手段預(yù)測某個體是否會發(fā)生子癇前期。盡管子癇前期的病因不十分明確,但是內(nèi)皮細(xì)胞損傷、炎癥反應(yīng)和凝血功能異常在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用越來越受到重視,而細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)、P-選擇素(P-selectin)、D二聚體(D-dimer)是與內(nèi)皮損傷、炎癥和凝血密切相關(guān)的因子,本研究將進(jìn)一步探討其與子癇前期的相關(guān)性。 ICAM-1參與中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞與血管內(nèi)皮的黏附,對白細(xì)胞向炎癥區(qū)移行及淋巴細(xì)胞歸巢和再循環(huán)起重要作用。孫國強等[3]報道,子癇前期患者胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞ICAM-1表達(dá)增強,ICAM-1陽性滋養(yǎng)細(xì)胞侵入蛻膜血管伴血管周圍淋巴細(xì)胞浸潤,這說明子癇前期患者胎盤有炎癥反應(yīng)伴血管內(nèi)皮細(xì)胞受損。通過注射抗ICAM-1抗體可以阻斷體內(nèi)ICAM-1介導(dǎo)的T細(xì)胞與上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞黏附的過程[4],這為子癇前期的治療提供了新的途徑。 P-selectin對血栓的形成起著始動作用,是目前已知反映血小板活化、釋放的特異標(biāo)記物,而血小板的活化是子癇前期發(fā)病的重要因素[5]。高表達(dá)的P-選擇素可通過細(xì)胞初始黏附介導(dǎo)血小板、內(nèi)皮細(xì)胞黏附以及這些細(xì)胞與白細(xì)胞的相互作用,啟動炎癥反應(yīng)、血栓形成以及血管內(nèi)皮的損傷。Ramacciotti等[6]研究表明,抑制P-selectin能夠減少血栓形成,并加快溶栓和毛細(xì)血管的再通。Akolekar等[7]研究表明早在子癇前期發(fā)病前的數(shù)個月就有母體血漿P-selectin的升高,故P-selectin可作為血栓形成早期的一個分子標(biāo)記物,了解血小板活化程度,預(yù)測子癇前期的發(fā)生。 D-dimer是交聯(lián)纖維蛋白的特異性降解產(chǎn)物,是體內(nèi)高凝狀態(tài)和纖溶亢進(jìn)的特異性分子標(biāo)志物,對靜脈血栓的形成具有較高的陰性預(yù)測價值。正常妊娠機(jī)體D-dimer高于未妊娠者,血液處于高凝狀態(tài),這對于減少分娩過程中出血具有重要作用[8]。子癇前期患者胎盤缺血、缺氧、炎癥反應(yīng),滋養(yǎng)細(xì)胞異常侵蝕,導(dǎo)致毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,全身及胎盤毛細(xì)血管通透性增高,微血栓形成,血液處于高凝及纖溶亢進(jìn)狀態(tài),升高的D-dimer可反映內(nèi)皮細(xì)胞的受損情況[9],同時可作為判斷子癇前期病情嚴(yán)重程度的重要依據(jù)之一。 中性粒細(xì)胞對血管內(nèi)皮損傷首先需在黏附分子介導(dǎo)下與血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合,而ICAM-1是這種介導(dǎo)作用的最重要黏附分子,可以加速內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,進(jìn)而促進(jìn)血小板與內(nèi)皮細(xì)胞黏附,受到炎癥因子刺激的血小板a顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞棒狀(Weibel-Palade)小體中的P-selectin活化并釋放入血,與活化的白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面P-選擇素糖蛋白配體-1(P-selectin glycoprotein ligand-1, PSGL-1)結(jié)合,使中性粒細(xì)胞和血小板激活,釋放炎癥介質(zhì),增強炎癥反應(yīng),促進(jìn)血小板的黏附和聚集[10],ICAM-1和P-selectin水平大幅上調(diào),彼此促進(jìn),相互作用,對進(jìn)一步擴(kuò)大血栓的形成具有關(guān)鍵作用[11],并通過激活外源性凝血途徑,產(chǎn)生纖維蛋白,引發(fā)血栓前高凝狀態(tài),進(jìn)而機(jī)體纖溶亢進(jìn),引起D-dimer升高。 綜上所述,ICAM-1、P-selectin和D-dimer的異常表達(dá)可能與子癇前期的發(fā)病密切相關(guān),各個因子間可能相互關(guān)聯(lián),但其具體作用機(jī)制尚不明確。本文將進(jìn)一步探討各個因子間及其與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性,深入研究子癇前期的發(fā)病機(jī)理。 1.2研究目的： ①探討ICAM-1、P-selectin和D-dimer在子癇前期患者母體血漿的表達(dá)及其相關(guān)性； ②探討ICAM-1、P-selectin和D-dimer在子癇前期患者臍帶血漿的表達(dá)及其相關(guān)性； ③探討ICAM-1和P-selectin在子癇前期患者胎盤組織的表達(dá)及其相關(guān)性。 2.方法 2.1病例來源： 選擇2013年2月至9月在深圳市婦幼保健院住院分娩的子癇前期產(chǎn)婦47例為研究組,另選同期正常晚期孕婦45例(無內(nèi)外科合并癥妊娠者)為對照組。子癇前期的診斷以謝幸、茍文麗主編的第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》為標(biāo)準(zhǔn)。研究對象的孕周采用末次月經(jīng)和超聲評估的方法確立,研究對象均為單胎妊娠,研究組除子癇前期外無慢性高血壓、糖尿病、心臟病、肝腎疾病、甲狀腺疾病等內(nèi)外科合并癥。 2.2實驗方法： ①標(biāo)本處理：產(chǎn)婦于入院后采靜脈血3ml,用3.2%檸檬酸鈉抗凝,在-4℃和3000r/min的條件下離心10min,取上層血漿-80℃凍存待檢；產(chǎn)婦分娩斷臍后,立即在近胎盤一側(cè)的臍帶處采集臍動脈血3ml,用3.2%檸檬酸鈉抗凝,在-4℃和3000r/min的條件下離心10min,取上層血漿-80℃凍存待檢；胎盤娩出后立即在近臍根部母體面(避開出血及鈣化區(qū))取1.Ocmx1.0cmx0.2cm大小的組織,用無菌生理鹽水沖洗,去除組織表面血液及粘液成分,置于10%中性福爾馬林溶液固定24h后,常規(guī)石蠟包埋保存。 ②酶聯(lián)免疫吸附實驗：血漿標(biāo)本于室溫解凍后,立即在4℃以3000轉(zhuǎn)離心2分鐘,取一定量上清液,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定各組孕婦及其臍帶血漿ICAM-1、P-selectin和D-dimer濃度,讀取OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線并得出曲線方程,計算出各個OD值的對應(yīng)濃度值。 ③免疫組織化學(xué)技術(shù)：將石蠟組織塊取4um厚連續(xù)切片,按試劑說明書采用SABC法檢測ICAM-1、P-selectin在胎盤組織中的表達(dá)。采用半定量法評估胎盤組織蛋白的表達(dá)：陽性細(xì)胞的細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒物質(zhì)；陰性細(xì)胞的細(xì)胞核為藍(lán)色,細(xì)胞漿無染色或與背景相近。在顯微鏡下觀察切片上組織細(xì)胞的蛋白表達(dá)情況,并在200倍視野下每張切片隨機(jī)選取5個視野拍照,用Image pro plus6.0(IPP6.0)圖像軟件分析并測定照片中陽性細(xì)胞積分光密度值(IOD)。 2.3統(tǒng)計方法： 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗和方差齊性分析后,若方差齊則采用兩獨立樣本的t檢驗,若方差不齊則采用兩獨立樣本的非參數(shù)檢驗。對子癇前期組數(shù)據(jù)進(jìn)行雙變量相關(guān)分析,若數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布,采用Pearson相關(guān)分析；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布,采用Spearman相關(guān)分析。數(shù)據(jù)均以a=0.05為檢驗水準(zhǔn),P0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.結(jié)果 3.1臨床一般資料分析：兩組間孕婦的年齡、孕周差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；子癇前期組的平均動脈壓大于正常妊娠組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.2ICAM-1、P-selectin和D-dimer在兩組的母體血漿中均有表達(dá),其在子癇前期組母體血漿的濃度均高于正常妊娠組的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.3ICAM-1、P-selectin和D-dimer在兩組臍血漿中均有表達(dá),其在子癇前期組臍血漿的濃度均高于正常妊娠組的表達(dá),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.4ICAM-1、P-selectin在各組胎盤組織中均有表達(dá),ICAM-1主要表達(dá)于胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞上,定位在胞膜和胞漿中；P-selectin主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞,定位在胞膜和胞漿中。ICAM-1、 P-selectin在子癇前期組胎盤組織的表達(dá)均高于正常妊娠組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3.5相關(guān)分析： ①子癇前期組的母體血漿：ICAM-1與P-selectin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.474),P-selectin與D-dimer的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.534), ICAM-1與D-dimer的表達(dá)呈正相關(guān)(-r=0.501)。 ②子癇前期組的臍血漿：ICAM-1與P-selectin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.518),P-selectin與D-dimer的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.366), ICAM-1與D-dimer的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.559)。 ③子癇前期組的胎盤組織：ICAM-1與P-selectin的表達(dá)呈正相關(guān)(r==0.510)。 4.結(jié)論 4.1ICAM-1、P-selectin和D-dimer在正常母血、臍血和母胎界面(胎盤)均有表達(dá),說明這些因子的生理性表達(dá)對正常妊娠的維持有一定積極作用。 4.2ICAM-1、P-selectin和D-dimer在子癇前期患者母血、臍帶血和母胎界面(胎盤)的表達(dá)同時升高,說明這三個因子可能參與了子癇前期的發(fā)病,并且可能是母體、胎盤和胎兒之間共同交互作用的結(jié)果,也進(jìn)一步說明子癇前期發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性。 4.3子癇前期組ICAM-1、P-selectin和D-dimer在母血、臍血和胎盤組織的表達(dá)均呈正相關(guān),說明這些因子間可能相互關(guān)聯(lián),在母體、胎盤和胎兒之間交互作用,在子癇前期發(fā)病機(jī)制及病情進(jìn)展上有一定的相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R714.244

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 羅玉麗;林翠云;;P-選擇素基因多態(tài)性及臨床研究進(jìn)展[J];福建醫(yī)藥雜志;2011年06期

2 楊玲竹;李亞敏;;子癇前期患者胎盤組織中晚期糖基化終產(chǎn)物受體和P-選擇素的表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年02期

3 孫國強,喬福元,魯秋云;細(xì)胞間粘附分子-1在妊高征子宮蛻膜及胎盤中的表達(dá)[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年05期

4 王志堅;余艷紅;;抗細(xì)胞間黏附分子-1單克隆抗體對大鼠子癇前期的治療作用[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2007年09期

5 ;Temporal changes in circulating P-selectin,plasminogen activator inhibitor-1,magnesium,and creatine kinase after percutaneous coronary intervention[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2010年08期

，

本文編號：2281898