【摘要】：研究背景： 子宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)高發(fā)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)該病的發(fā)病趨勢(shì)呈年輕化現(xiàn)象，嚴(yán)重威脅女性身體健康，并影響生活質(zhì)量。宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是多種因素和多種基因共同參與的復(fù)雜過(guò)程，目前已經(jīng)明確宮頸癌的始動(dòng)因素主要為HPV持續(xù)感染，病毒基因組整合宿主細(xì)胞DNA后合成的E6/E7蛋白介導(dǎo)P53和Rb泛素化降解，激活端粒酶活性，導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞脫離正常的分化程序、進(jìn)入異常細(xì)胞周期、發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。HPV轉(zhuǎn)化細(xì)胞首先發(fā)生宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervicalintraepithelial neoplasia，CIN），經(jīng)過(guò)CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ，最終發(fā)展為宮頸癌。HPV轉(zhuǎn)化細(xì)胞除了可引起P53和Rb蛋白水平下調(diào)外，還會(huì)導(dǎo)致多種基因表達(dá)異常，抑癌基因RAR-β2就是其中的關(guān)鍵基因之一。 RAR-β2是促進(jìn)上皮細(xì)胞分化的重要調(diào)控因子，也是介導(dǎo)維甲酸發(fā)揮調(diào)控上皮細(xì)胞生長(zhǎng)分化凋亡方面的關(guān)鍵受體，通過(guò)誘導(dǎo)分化，具有一系列的抑癌作用，多種腫瘤中均呈現(xiàn)降低或缺失現(xiàn)象，被認(rèn)為是一個(gè)抑癌基因，在腫瘤的演進(jìn)中扮演關(guān)鍵的角色。RAR-β2的表達(dá)可以誘導(dǎo)宮頸癌HeLa、SiHa細(xì)胞分化，降低其惡性生物學(xué)行為，通過(guò)轉(zhuǎn)染RAR-β2的肺癌細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，RAR-β2誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞分化而增加凋亡，其缺失與腫瘤組織的分化程度有關(guān)。上皮細(xì)胞是通過(guò)正常的分化走向正常的生理衰老死亡，而不斷的進(jìn)行新陳代謝。Involucrin作為上皮細(xì)胞終末分化早期的一個(gè)標(biāo)記，也是腫瘤組織分化程度的一個(gè)標(biāo)記。只有在上皮細(xì)胞分化成熟時(shí)才表達(dá)，腫瘤組織中細(xì)胞異型性增加、分化異常，呈去分化狀態(tài)，Involucrin的表達(dá)也就隨之減少，組織分化程度逐漸降低。 表觀遺傳是由生物學(xué)家Conrad Waddington在1939年首次提出，目前，表觀遺傳被定義為DNA序列不發(fā)生變化，而基因表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳的改變，主要包括DNA甲基化、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑、非編碼RNA等等，其中組蛋白乙�；揎検怯葹橹匾且环N重要基因表達(dá)調(diào)控的模式。通常認(rèn)為組蛋白氨基末端賴氨酸殘基高度乙酰化使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)松散，DNA與組蛋白八聚體解離，核小體結(jié)構(gòu)松弛，從而使各種轉(zhuǎn)錄因子和協(xié)同因子能與DNA結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合，有利于基因轉(zhuǎn)錄激活，而組蛋白低乙�；谷旧|(zhì)結(jié)構(gòu)卷縮導(dǎo)致基因沉默或抑制，組蛋白的高乙�；偷鸵阴；瘎�(dòng)態(tài)平衡的調(diào)控靶基因的穩(wěn)定表達(dá)，維持細(xì)胞正常的生理功能和表型。當(dāng)組蛋白乙�；癄顟B(tài)失衡，即乙酰化水平降低時(shí)，將引起相應(yīng)的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)異常，影響細(xì)胞周期、分化、增殖、凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，是腫瘤病理生理過(guò)程中重要的分子事件之一。宮頸癌發(fā)生過(guò)程中，表觀遺傳改變不僅可影響HPV致癌基因的異常表達(dá)，而且還可導(dǎo)致宿主細(xì)胞多個(gè)癌基因的激活和抑癌基因的失活。 本研究利用臨床組織標(biāo)本檢測(cè)組蛋白乙酰化修飾水平與抑癌基因RAR-β2在不同病變級(jí)別宮頸組織中的表達(dá)情況，分析兩者的相關(guān)性及與宮頸病變程度、臨床病理特征的關(guān)系，探討兩者在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 目的： 探討組蛋白乙�；揎椝綄�(duì)RAR-β2表達(dá)的調(diào)控作用，并分析其與宮頸病變程度之間的相關(guān)性。 方法： 1.分別選取正常宮頸20例、CINⅡ-Ⅲ29例、子宮頸鱗狀細(xì)胞癌（cervical squamouscell carcinoma,SCC）80例存檔于病理科的石蠟包埋組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測(cè)AcH3、RAR-β2、Involucrin的表達(dá)水平，半定量積分法判定染色陽(yáng)性結(jié)果。 2.收集正常宮頸6例、CINⅡ-Ⅲ8例、SCC10例新鮮組織標(biāo)本，采用Western blotting檢測(cè)AcH3、RAR-β2、Involucrin的表達(dá)水平，膠片成像條帶灰度分析顯影結(jié)果。 3.分析數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件行χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，各指標(biāo)間相關(guān)性采用Pearson correlation分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.免疫組化檢測(cè)AcH3、RAR-β2、Involucrin在正常宮頸、CINⅡ-Ⅲ和SCC組織中的表達(dá)顯示，隨著宮頸病變程度加重，三者的表達(dá)逐漸降低，甚至缺失，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 2.組蛋白乙酰化水平與RAR-β2表達(dá)的呈正相關(guān)性（r=0.734，P＜0.05），隨著宮頸病變的進(jìn)展，兩者的表達(dá)同步降低。 3.組蛋白乙�；胶蚏AR-β2的表達(dá)均與宮頸病變程度呈負(fù)相關(guān)性（r=－0.547（AcH3），r=－0.585（RAR-β2），P＜0.05），，即宮頸病變程度越重，兩者的表達(dá)越低。 4.Western blotting檢測(cè)AcH3、RAR-β2、Involucrin在正常宮頸、CINⅡ-Ⅲ和SCC組織中的表達(dá)顯示，與免疫組化結(jié)果一致，即隨著宮頸病變程度加重，三者的表達(dá)依次降低，甚至缺失，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 5.免疫組化檢測(cè)AcH3、RAR-β2、Involucrin在SCC高、中、低分化組織中的表達(dá)顯示，三者在高分化組織中的表達(dá)高于中、低分化組織，低分化組織中三者的表達(dá)明顯缺失，即隨著分化程度的降低，三者的表達(dá)依次降低，甚至缺失。 6.組蛋白乙�；�、RAR-β2的表達(dá)在SCC臨床病理特征中分析顯示，兩者與臨床分期、有無(wú)盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，而與腫瘤組織的分化程度有關(guān)，兩者在高、中、低分化組織中的比較存在明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 7.組蛋白乙�；脚cRAR-β2的表達(dá)在SCC組織中呈正相關(guān)性（r=0.427，P＜0.05）。 8.Western blotting檢測(cè)AcH3、RAR-β2、Involucrin在SCC高、中、低分化組織中的表達(dá)顯示，與免疫組化結(jié)果一致，即隨著分化程度的降低，三者的表達(dá)依次降低，甚至缺失，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論： 1.宮頸上皮細(xì)胞RAR-β2的表達(dá)受組蛋白乙�；揎椝降恼{(diào)控。 2.組蛋白乙�；潭群蚏AR-β2的表達(dá)水平與宮頸病變進(jìn)展密切相關(guān)，可作為宮頸病變進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)和預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)及可能的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background of the study: Cervical cancer is one of the most prevalent malignant tumors in the female reproductive system. In recent years, the trend of the disease is young, which seriously threatens the health of women and affects life. The development of cervical cancer is a complex process involving multiple factors and multiple genes involved in the development of cervical cancer. It is now clear that the initial dynamic factors of cervical cancer are HPV persistent infection, and the E6/ E7 protein synthesized after the whole host cell DNA of the viral genome mediates the degradation of P53 and Rb ubiquitination, and activates telomerase. Activity, cause cervical epithelial cells to break out of normal differentiation procedure, enter abnormal cell cycle, occur malignant First, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) occurs in HPV-transformed cells. CIN 鈪

本文編號(hào)：2264508