【摘要】：研究背景： 卵巢癌居?jì)D女生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第2位,其中上皮性卵巢癌（epithelialovarian carcinoma，EOC）的死亡率居?jì)D科惡性腫瘤之首。因此嚴(yán)重威脅了婦女健康和生命。在近20余年內(nèi)，卵巢癌臨床處理出現(xiàn)了三大進(jìn)展，即手術(shù)病理分期、腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和紫杉醇+鉑類作為卵巢上皮癌的一線治療方案。但卵巢癌早期無(wú)典型癥狀及體征，缺乏早期篩查卵巢惡性腫瘤的值得信賴的檢測(cè)方法，因此診斷時(shí)80%-90%為晚期、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的患者，治療極其困難。常規(guī)的手術(shù)、化療難以治愈，此外反復(fù)手術(shù)、化療嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。因此有必要研究其發(fā)生發(fā)展規(guī)律及機(jī)制,為尋求有效的治療方法,改善患者預(yù)后奠定基礎(chǔ)。 促性腺激素是由垂體前葉分泌的糖蛋白激素，分為FSH、LH兩種，兩者具有相似的化學(xué)和結(jié)構(gòu)特征。調(diào)節(jié)脊椎動(dòng)物性腺發(fā)育，在卵巢、睪丸中以內(nèi)分泌的方式調(diào)節(jié)甾體激素的生成及配子的發(fā)生。其受體FSHR和LHR是G蛋白偶聯(lián)受體含有7個(gè)跨膜區(qū)域具有酪氨酸激酶的作用，通過(guò)G蛋白啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮生物效應(yīng)。 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）定義為上皮細(xì)胞通過(guò)特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程。與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥性以及復(fù)發(fā)率等一系列生物學(xué)行為密切相關(guān)。其主要的特征有細(xì)胞黏附分子(如E-鈣黏蛋白)表達(dá)的減少、細(xì)胞角蛋白細(xì)胞骨架轉(zhuǎn)化為波形蛋白（Vimentin）為主的細(xì)胞骨架及形態(tài)上具有間充質(zhì)細(xì)胞的特征等。 目的： 觀察FSH聯(lián)合LH對(duì)卵巢癌細(xì)胞株侵襲能力的影響并探討相關(guān)分子機(jī)制 方法：(1) Western-blot和免疫組化方法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、HO8910的FSHR、 LHR表達(dá)。 (2)采用CellTiter96Aqueous細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度FSH、LH對(duì)SKOV3、HO8910細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。 (3)采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)500mIU/ml的FSH聯(lián)合LH對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、HO8910的遷移能力的影響。 (4)采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)500mIU/ml的FSH聯(lián)合LH對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、HO8910的侵襲能力的影響。 (5) Western-blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞株在FSH聯(lián)合LH處理6h、12h、24h上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)分子的表達(dá)。 結(jié)果： ⑴卵巢癌細(xì)胞株SKOV3、HO8910均表達(dá)FSHR、LHR。 ⑵CellTiter96Aqueous細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示不同濃度FSH、LH單獨(dú)/聯(lián)合均不促進(jìn)SKOV3和HO8910細(xì)胞的增殖。 ⑶Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，500mIU/ml的FSH和LH聯(lián)合處理SKOV3、HO8910穿膜細(xì)胞數(shù)目顯著增加，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 ⑷細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，500mIU/ml的FSH、LH聯(lián)合處理上調(diào)SKOV3和HO8910細(xì)胞的遷移能力。 ⑸實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，，500mIU/ml的FSH、LH聯(lián)合處理SKOV3、HO8910細(xì)胞，E-鈣粘蛋白的mRNA表達(dá)下調(diào)，Vimentin的mRNA表達(dá)上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 ⑹Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示500mIU/ml的FSH、LH聯(lián)合處理顯著下調(diào)SKOV3、HO8910細(xì)胞E-cadherin蛋白的表達(dá)，上調(diào)Vimentin、snail、slug蛋白的表達(dá)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 1）卵巢癌細(xì)胞表達(dá)FSHR和LHR； 2）FSH和LH聯(lián)合處理并不促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖； 3）FSH和LH聯(lián)合處理可以增強(qiáng)其遷移和侵襲能力，機(jī)制可能與FSH和LH促進(jìn)EMT發(fā)生有關(guān)。
[Abstract]:Background of Study :

In recent 20 years , the clinical treatment of ovarian cancer has three major advances , such as pathological stage of operation , tumor cell deactivation and paclitaxel plus platinum as the first - line treatment of ovarian cancer .

Gonadotropin is a glycoprotein hormone secreted by anterior pituitary . It is divided into two types : FSH , LH . It has similar chemical and structural features . It regulates the development of sex gland of vertebrate . It regulates the genesis and gametogenesis of steroid hormone in the ovary and testis . Its receptor FSHR and LHR are G protein coupled receptors . The receptor FSHR and LHR have the function of tyrosine kinase in 7 transmembrane domains .

Epithelial mesenchymal transition ( EMT ) is defined as the biological process of transforming epithelial cells into cells with interstitial phenotype through specific procedures . The main features are the reduction of cell adhesion molecules ( such as E - cadherin ) , the transformation of cytoskeletal framework into the cytoskeletal and morphological features of vimentin , and the characteristics of mesenchymal cells .

Purpose :

To observe the effect of FSH combined with LH on the invasion ability of ovarian cancer cell line and to explore the related molecular mechanism

Methods : ( 1 ) Western - blot and immunohistochemistry were used to detect the FSHR of ovarian cancer cell lines SK3 and HO8910 .

LHR expression .

( 2 ) The effects of FSH and LH on the growth of the cells of SKline and HO8910 were detected by CellTiter96effector cell proliferation assay .

( 3 ) The effect of FSH combined with 500mIU / ml FSH on the migration ability of ovarian cancer cell line SK3 and HO8910 was detected by cell scratch test .

( 4 ) The effects of FSH and LH on the invasion ability of ovarian cancer cell line SK3 and HO8910 were detected by Transwell invasion experiment .

( 5 ) Western - blot and real - time fluorescence quantitative PCR were used to detect the expression of related molecules of epithelial ovarian cancer cell line ( EMT ) at 6h , 12h , 24h after FSH combined LH treatment .

Results :

( 1 ) The ovarian cancer cell lines SK3 and HO8910 express FSHR and LHR .

( 2 ) Cell proliferation experiments showed that both FSH and LH alone did not promote the proliferation of SKOVCs and HO8910 cells .

( 3 ) Transwell invasion experiment showed that 500 mIU / ml of FSH and LH combined with the number of cells in SK3 and HO8910 were significantly increased compared with the control group ( P0.05 ) .

( 4 ) The cell scratch test showed that 500mIU / ml FSH and LH treatment up - regulated the migration ability of SKOVCs and HO8910 cells .

( 5 ) The results of real - time fluorescence quantitative PCR showed that the mRNA expression down - regulation and vimentin expression were down - regulated by 500 mIU / ml FSH and LH , and the mRNA expression of vimentin was up - regulated and the difference was statistically significant ( P0.05 ) .

( 6 ) Western - blot analysis showed that the combined treatment of FSH and LH in 500 mIU / ml significantly downregulated the expression of E - cadherin protein , and up - regulated the expression of E - cadherin in the cells of HO8910 , and the difference was statistically significant ( P0.05 ) .

Conclusion :

1 ) ovarian cancer cells express FSHR and LHR ;


2 ) the combination of FSH and LH does not promote the proliferation of ovarian cancer cells ;


3 ) The combined treatment of FSH and LH can enhance its migration and invasion ability , and the mechanism may be related to FSH and LH for EMT .
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.31

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2134083