本文選題：外泌體　切入點(diǎn)：胎盤(pán)　出處：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2015年06期

【摘要】：目的妊娠期間,胎盤(pán)可釋放外泌體到母體循環(huán),在正常妊娠或胎盤(pán)相關(guān)妊娠并發(fā)癥中發(fā)揮重要作用。文中旨在建立簡(jiǎn)便、高效、低耗的母血清胎盤(pán)來(lái)源外泌體的分離純化方法,為妊娠疾病研究奠定基礎(chǔ)。方法蔗糖梯度離心聯(lián)合2次8%PEG6000沉淀,分離純化正常孕婦血清中胎盤(pán)來(lái)源外泌體,Western blot檢測(cè)胎盤(pán)來(lái)源外泌體標(biāo)記蛋白分子(CD63、CD81、PLAP),銀染法分析各密度層中所有蛋白質(zhì)條帶,透射電鏡鑒定胎盤(pán)來(lái)源外泌體形態(tài),動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定外泌體粒徑及分布。結(jié)果通過(guò)蔗糖密度梯度離心后得到的各分層液經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見(jiàn)各蛋白分子條帶清晰可見(jiàn),Western blot結(jié)果顯示CD63、CD81和PLAP同時(shí)表達(dá)于21%~34%蔗糖密度層,證明血清胎盤(pán)外泌體主要存在于1.09~1.16g/m L蔗糖密度層。透射電鏡鑒定獲得的胎盤(pán)來(lái)源外泌體形態(tài)符合一般外泌體特征,且特異表達(dá)PLAP。動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定獲得的胎盤(pán)外泌體直徑分布于28~91 nm,且大小均一。結(jié)論成功建立了一種簡(jiǎn)便、快捷、高效分離血清中胎盤(pán)來(lái)源外泌體的改良方法,為研究胎盤(pán)外泌體在正常妊娠及胎盤(pán)相關(guān)并發(fā)癥中的作用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective during pregnancy, placenta can release exocrine to maternal circulation and play an important role in normal pregnancy or placental associated pregnancy complications. Methods sucrose gradient centrifugation combined with 8%PEG6000 precipitation was used for the study of pregnancy diseases. Western blot was used to detect the placental exocrine marker protein molecule (CD63nCD81) in normal maternal serum. All protein bands in each density layer were analyzed by silver staining, and the morphology of exocrine from placenta was identified by transmission electron microscopy (TEM). The particle size and distribution of exocrine were measured by dynamic light scattering. Results the layers obtained by sucrose density gradient centrifugation were electrophoretic with protein SDS-PAGE gel. After silver staining, the protein molecular bands were clearly observed. Western blot showed that CD63, CD81 and PLAP were simultaneously expressed in the density layer of 34% sucrose. The results showed that the exocrine of the placenta mainly existed in the sucrose density layer of 1.09~1.16g/m L. the morphology of the exocrine from the placenta identified by transmission electron microscope was consistent with the general exocrine characteristics. The diameter of placental exocrine was 2891 nm, and the size was uniform. Conclusion A simple, fast and efficient method for isolation of exocrine from placenta was established. To study the role of placental exocrine in normal pregnancy and placental related complications.
【作者單位】： 東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院;南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院婦產(chǎn)科;南京醫(yī)科大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81370724) 江蘇省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(BL2012015)
【分類號(hào)】：R714.2

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1678895