本文關(guān)鍵詞： 妊娠期糖尿病(GDM) 絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin) 白介素-6(IL-6) 胰島素抵抗 BeWo細(xì)胞　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠期首次出現(xiàn)或發(fā)生的糖代謝異常。以往報道發(fā)病率2~5%,GDM可以造成子癇前期、巨大兒、肩難產(chǎn)、新生兒高膽紅素血癥、RIDS等母兒并發(fā)癥,嚴(yán)重影響母嬰健康。目前認(rèn)為GDM的發(fā)病機(jī)制包括:脂肪細(xì)胞功能的改變、胎盤和激素的變化、炎癥和氧化應(yīng)激。這些均與胰島素抵抗有關(guān)。而脂肪細(xì)胞因子與胰島素抵抗關(guān)系密切。絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)是一種新的具有胰島素增敏作用的脂肪細(xì)胞因子,屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族。近來報道其與T2DM的發(fā)生有關(guān)。但關(guān)于vaspin與GDM的關(guān)系,研究尚少。本研究分別測定妊娠中、晚期GDM患者血清及臍血vaspin水平,探討其與糖、脂代謝及胰島素抵抗間關(guān)系,同時測定胎盤組織vaspin m RNA及蛋白含量,比較GDM與正常妊娠胎盤組織vaspin轉(zhuǎn)錄及蛋白水平的差異以及與新生兒體質(zhì)量間的關(guān)系,以探討vaspin在GDM發(fā)生中的作用和與胎兒生長發(fā)育的關(guān)系。本研究還通過Be Wo細(xì)胞的體外培養(yǎng),觀察IL-6、高糖等不同因子對Be Wo細(xì)胞vaspin表達(dá)的影響,探討其調(diào)控機(jī)制。第一部分GDM患者妊娠中期血清Vaspin水平目的:測定vaspin在妊娠中期血清中的表達(dá),探討vaspin在妊娠期糖尿病(GDM)發(fā)病中的作用及其與胰島素抵抗的相關(guān)性。方法:選擇2013年1月至2013年6月于河北省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的孕24~28周的單胎孕婦,根據(jù)75g葡萄糖耐量試驗(OGTT)結(jié)果,分為GDM組30例和正常妊娠組(NGT)28例;同期在體檢中心健康查體的糖耐量正常的健康育齡非妊娠婦女(NC)27例為正常對照組。采用葡萄糖氧化酶法檢測各組婦女空腹血糖(FPG)、服糖后1h及2h血糖水平;采用放射免疫法檢測各組婦女空腹胰島素(FIN)水平并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR);檢測各組婦女的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平;ELISA法測定血清vaspin、IL-6水平。結(jié)果1 GDM組婦女TC、TG、HDL及LDL水平分別為(5.52±0.87)、(2.79±0.77)、(1.75±0.44)及(3.34±0.77)mmol/L,NGT組婦女分別為(5.85±0.78)、(2.52±0.71)、(1.94±0.39)及(3.4±0.62)mmol/L,兩組婦女血脂水平明顯高于正常對照組,分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2 GDM組空腹血糖、糖耐量1h血糖及糖耐量2h血糖[(5.48±0.69、10.87±1.84、8.55±1.76)mmol/L]均明顯高于NGT組[(4.54±0.28、7.42±1.33、6.2±0.92)mmol/L]和NC組[(5.16±0.42、7.58±0.83、6.75±0.68)mmol/L],分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 GDM組婦女INS水平(14.03±5.57μU/m L)、HOMA-IR(3.45±1.46)明顯高于NGT組(11.49±4.18μU/m L;2.32±0.86)及NC組(8.88±3.75μU/m L;2.03±0.87),分別比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 GDM組及NGT組婦女血清vaspin水平[分別為(5.10±2.36)、(5.43±1.88)ng/m L]顯著高于NC組(2.03±2.34ng/m L),分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);GDM組婦女血清vaspin水平雖略低于NGT組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5 GDM組及NGT組婦女血清IL-6水平[分別為(296.96±122.38)、(286.80±97.66)ng/m L]均顯著高于NC組(234.38±90.86ng/m L),分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);GDM組婦女血清IL-6水平雖略高于NGT組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6 GDM組和NGT組婦女vaspin水平與FPG、HOMA-IR等指標(biāo)均無相關(guān)性(r分別=-0.16,-0.01,0.33,P0.05)。而血清vaspin水平與膽固醇(r:0.42,P:0.02;r:0.71,P0.01)及甘油三酯(r:0.51,P0.01;r:0.38,P:0.046)均呈正相關(guān),GDM組vaspin水平與IL-6呈負(fù)相關(guān)(r:-0.47,P:0.01)。NC組血清vaspin水平與INS及HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)(r:-0.42P:0.03;r:-0.41,P:0.03)。7 NGT組血清IL-6水平與空腹血糖相關(guān)(r:0.52,P:0.01)。GDM組IL-6與空腹血糖(r:0.54,P0.01)、孕前(r:0.44,P:0.02)及當(dāng)前BMI(r:0.45,P:0.01)相關(guān)。結(jié)論1妊娠期vaspin水平較健康非妊娠婦女明顯升高,而這種升高與孕婦的血糖狀態(tài)無關(guān),vaspin主要來自胎盤分泌。2 Vaspin可能參與糖、脂代謝,與GDM的發(fā)生相關(guān)。3 Vaspin可能是GDM時脂代謝指標(biāo),并受IL-6影響。第二部分GDM患者妊娠晚期血清及臍血vaspin水平目的:測定vaspin、IL-6在GDM及正常妊娠婦女妊娠晚期血清及臍血中的表達(dá)水平,探討兩者在GDM發(fā)生中的作用。方法:選取河北省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科于2012年10月至2013年10月行擇期剖宮產(chǎn)終止妊娠的單胎孕婦。根據(jù)妊娠中期75g葡萄糖耐量試驗(OGTT)結(jié)果,分為GDM組30例和正常妊娠組(NGT)27例。采用葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖(FPG),采用放射免疫法檢測各組婦女空腹胰島素(FIN)水平并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR);檢測各組婦女的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法測定血清vaspin、IL-6水平。結(jié)果1 GDM組TC、TG、HDL及LDL水平分別為(4.67±0.89)、(3.26±1.03)、(1.32±0.23)及(2.73±0.75)mmol/L,NGT組婦女分別為(4.93±0.79)、(2.80±0.93)、(1.40±0.26)及(2.89±0.69)mmol/L,兩組比較無明顯區(qū)別(P0.05)。2 GDM組空腹血糖和糖化血紅蛋白分別為(4.61±0.58)mmol/L、(5.88±0.38),NGT組空腹血糖為(4.23±0.51)mmol/L,糖化血紅蛋白水平為(5.48±0.38),兩組相比GDM組明顯高于NGT組(P0.05,P0.01)。3 GDM組和NGT組胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)無明顯區(qū)別(12.68±4.74 vs 11.63±4.91,P=0.41;2.38±1.48 vs 2.24±1.08,P=0.17)。4 GDM組和NGT組產(chǎn)前及產(chǎn)后三天血清vaspin水平分別為[(0.49±0.24)、(0.83±0.27)]ng/m L,和[(0.36±0.13),(0.74±0.31)]ng/ml,兩組相比妊娠晚期GDM組血清vaspin水平明顯低于NGT組(P0.01);產(chǎn)后三天vaspin水平均下降,但以GDM組vaspin水平下降明顯(P0.01);GDM組和NGT組臍血vaspin水平分別為(0.34±0.12)(0.44±0.25)]ng/m L;兩組相比無明顯區(qū)別(P0.05)。5 GDM組和NGT組產(chǎn)前及產(chǎn)后三天血清IL-6水平分別為[(358.70±169.39)、(271.21±148.91)]pg/ml和[(271.21±148.91)、(255.16±142.09)]pg/ml。兩組相比GDM組血清IL-6水平明顯升高(P=0.04);兩組產(chǎn)前與產(chǎn)后血清IL-6水平均無明顯變化。而GDM組和NGT組臍血IL-6水平分別為[(383.92±213.25)、(336.95±140.70)]pg/ml,兩組相比差異無顯著性(P0.05)。6相關(guān)性分析表明:NGT組,血清vaspin水平與TG、LDL呈正相關(guān)(r:0.45,P:0.02;r:0.42,P:0.03),血清IL-6水平與VLDL呈負(fù)相關(guān)(r:-0.42,P:0.03),與FPG正相關(guān)。而在GDM組,血清IL-6水平與孕前及孕晚期體重指數(shù)呈正相關(guān)(r:0.50,P:0.01;r:0.40,P:0.03)。與血清vaspin水平水平呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論1妊娠晚期GDM患者血清vaspin水平下降,分娩三天后進(jìn)一步降低。提示vaspin是GDM的保護(hù)因子,并主要由胎盤分泌。2 NGT組,血清vaspin水平與甘油三酯、極低密度脂蛋白呈正相關(guān),提示vaspin可能參與了脂代謝的調(diào)控。3 妊娠晚期GDM患者血清IL-6水平升高,支持氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)參與GDM的發(fā)生這一理論。4 GDM患者血清vaspin水平與IL-6水平負(fù)相關(guān),提示兩者間具某種聯(lián)系,IL-6可能對vaspin有抑制作用第三部分GDM患者胎盤組織中vaspin的表達(dá)目的:測定vaspin、IL-6 m RNA和蛋白在孕晚期GDM及正常妊娠婦女胎盤組織中的表達(dá)水平,探討兩者在GDM發(fā)病中的作用。方法:于剖宮產(chǎn)術(shù)中收集胎盤組織,GDM組、正常妊娠組(NGT)各20例。用熒光定量PCR(real-time FQ RT-PCR)檢測胎盤組織vaspin及IL-6m RNA的表達(dá)水平,免疫印跡法(Western blotting)檢測胎盤組織vaspin及IL-6蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果1 GDM組和NGT組vaspin m RNA及蛋白表達(dá)無明顯區(qū)別(0.60±0.32vs 0.68±0.32,P=0.46;0.30±0.08 vs 0.39±0.26,P=0.33)。2 GDM組胎盤組織IL-6 m RNA及蛋白表達(dá)明顯高于NGT組(1.35±0.67 vs 0.82±0.47,P=0.01;1.23±0.25 vs 0.54±0.20,P0.01)。3相關(guān)性分析表明:胎盤組織vaspin的表達(dá)與血清vaspin無明顯相關(guān)性(P0.05);GDM組,vaspin m RNA與糖化血紅蛋白呈負(fù)相關(guān)(r:-0.71,P:0.01),而與新生兒體質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)((r=-0.48,P=0.03;r=-0.88,P0.01),與胎盤組織IL-6 m RNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論1 GDM孕婦胎盤組織vaspin m RNA和蛋白表達(dá)與IL-6呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。提示IL-6可能參與了vaspin的調(diào)節(jié)。2胎盤組織分泌的vaspin可能通過自分泌/旁分泌在胎盤局部發(fā)揮作用,并可能參與了GDM時胎兒的生長發(fā)育調(diào)節(jié)。第四部分IL-6對滋養(yǎng)細(xì)胞vaspin表達(dá)的影響目的:Vaspin作為一種具有胰島素增敏作用的脂肪細(xì)胞因子,主要由內(nèi)臟脂肪組織分泌。妊娠時在胎盤表達(dá),其調(diào)節(jié)機(jī)制不明。本研究旨在探討不同因子作用下Be Wo細(xì)胞vaspin表達(dá)的變化,分析其調(diào)控機(jī)制。方法:分別以不同濃度的IL-6(1,5,10ng/ml)、葡萄糖(5.5,10,30mmol/L)和吡格列酮(10,100ummol/L)分別作用人絨癌滋養(yǎng)細(xì)胞株Be Wo細(xì)胞12、24、48和72h。留取細(xì)胞采用RT-PCR及westernblot檢測Be Wo細(xì)胞中vaspin轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的變化。結(jié)果1不同濃度的IL-6(1,5,10ng/ml)作用Be Wo細(xì)胞培養(yǎng)12、24、48、72h后,與空白對照相比,均可抑制Be Wo細(xì)胞vaspin m RNA和蛋白表達(dá)。以IL-6濃度10ng/ml,作用48h時最明顯。而對Be Wo細(xì)胞中的PPAR-γm RNA和蛋白表達(dá)無明顯影響。2以不同濃度的葡萄糖(5.5,10,30mmol/L),分別作用Be Wo細(xì)胞48小時后。均可抑制vaspin和PPAR-γ的m RNA和蛋白表達(dá),且隨葡萄糖濃度增加,抑制效果越強(qiáng)。3以不同濃度的吡格列酮(10,100umol/L),分別作用于Be Wo細(xì)胞12h、24h、48和72小時,結(jié)果:10umol/L的吡格列酮作用Be Wo細(xì)胞12h、24h均可明顯上調(diào)vaspin m RNA的表達(dá)(P0.05),而100umol/L的吡格列酮在48h反而略有抑制作用(P0.05)。10umol/L和100umol/L的吡格列酮作用Be Wo細(xì)胞12h、24h均可抑制PPAR-γm RNA的表達(dá)(P0.05),在48h后該抑制作用消失(P0.01,P0.05)。結(jié)論:IL-6、葡萄糖和吡格列酮均參與滋養(yǎng)細(xì)胞vaspin表達(dá)的調(diào)控,并呈濃度依賴性表現(xiàn)。IL-6、葡萄糖抑制vaspin表達(dá),而吡格列酮則上調(diào)vaspin的表達(dá)。IL-6對滋養(yǎng)細(xì)胞PPAR-γ表達(dá)無影響,IL-6可以下調(diào)vaspin表達(dá),提示vaspin受炎癥因子作用參與GDM的發(fā)生和發(fā)展。IL-6對vaspin的影響不是通過PPAR-γ途徑。滋養(yǎng)細(xì)胞vaspin分泌受多種因素調(diào)節(jié),可能與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān),但其調(diào)控的確切機(jī)制還需進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714.256

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本文編號：1538625