本文關(guān)鍵詞： 紫杉醇 納米藥物 放療 聯(lián)合作用 宮頸癌　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:研究紫杉醇納米藥物聯(lián)合放療對宮頸癌的抑制作用,并探索其相關(guān)機制。方法:首先,使用固體沉淀法完成不同理論載藥率的紫杉醇納米藥物(PTX-NPs)的制備,并通過高效液相色譜儀(HPLC)對其實際載藥率(DL)、包封率(EE)及體外釋放速率進行測量,使用動態(tài)光散射儀(DLS)對粒徑及納米藥物穩(wěn)定性進行評估,在使用透射電鏡儀(TEM)觀察紫杉醇納米藥物的形貌,在體外通過宮頸癌Hela細(xì)胞,使用四氮唑化合物(MTT法)測量了紫杉醇納米藥物和Taxol?小的細(xì)胞毒性。在對負(fù)Hela宮頸癌的裸鼠進行體內(nèi)實驗中,將瘤體積生長到約200mm3左右的裸鼠隨機分為6組:NS組(對照組)、PTX組、PTX-NPs組、RT組、PTX+RT組和PTX-NPs+RT組(n=12),并分別予以NS、PTX 2.5mg/kg或放療15Gy/5F處理。治療結(jié)束后24小時,在NS組、PTX+RT組和PTX-NPs+RT組中分別隨機選取3只裸鼠,對其進行18F-脫氧葡萄糖正電子發(fā)射計算機斷層現(xiàn)象(18F-FDG PET/CT)掃描顯像,評估其宮頸癌腫瘤早期代謝情況,然后隨機處死每組一半的裸鼠,并立即剝?nèi)√幩缆闶蟮牧鼋M織,以行宮頸癌腫瘤細(xì)胞增殖(Ki-67)、腫瘤微血管密度(MVD)(CD31)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)相關(guān)指標(biāo)的免疫組化,并觀察所有剩余裸鼠腫瘤的體積生長變化及各組裸鼠生存情況。結(jié)果:實驗中所制備的不同理論載藥率的紫杉醇納米藥物中,8%的PTX-NPs與6%或10%的理論載藥率的PTX-NPs相比較,有更好的實際載藥率(7.96±0.06%)及包封率(99.78±0.34%),在TEM成像觀察時發(fā)現(xiàn),紫杉醇納米藥物在水溶液的中均成球形狀態(tài),且分散均勻,這也證實了其在DLS中所測得的粒徑大小(45.71±0.32nm)及粒徑多分散指數(shù)(PDI)(0.19±0.02)。除此之外,紫杉醇納米藥物在實驗溫度為4℃或25℃的環(huán)境條件中,且沒有使用任何溶液穩(wěn)定劑的情況下,能在PBS或含10%胎牛血清的PBS中穩(wěn)定保持其粒徑大小及多分散指數(shù)至48小時。在紫杉醇納米藥物的體外釋放實驗中,與游離紫杉醇相比,PTX-NPs表現(xiàn)為緩慢釋放模式,且沒有觀察到明顯的突釋現(xiàn)象,在第14天時,紫杉醇納米藥物累積釋放紫杉醇63.84%。在體外細(xì)胞毒性實驗中,當(dāng)PTX-NPs在紫杉醇濃度大于4μg/m L時,其對Hela細(xì)胞的毒性比Taxol?小(P0.05),而當(dāng)紫杉醇濃度小于4μg/m L時,紫杉醇納米藥物和Taxol?兩者的細(xì)胞毒性差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在體內(nèi)試驗中,在第22天時,PTX-NPs+RT組瘤體積(623.5mm3)與PTX+RT組(1121.4mm3,P0.01)、RT組(1176.9mm3,P0.01)、PTX-NPs組(2074.1mm3,P0.01)、PTX組(2197.2mm3,P0.01)以及NS組(2347.2mm3,P0.01)相比較,能明顯抑制宮頸癌腫瘤的體積生長,且PTX-NPs+RT組裸鼠的中位生存期為87天,明顯長于PTX+RT組的61天,P0.01)、RT組(64天,P0.01)、PTX-NPs組(31天,P0.01)、PTX組(34天,P0.01)以及NS組(25天,P0.01),PET/CT顯像觀察到PTX-NPs+RT組裸鼠腫瘤的T/M值(1.182±0.043)與PTX+RT組(2.032±0.214)、NS組(2.635±0.074)相比,腫瘤組織的代謝更低(P0.05)。在行宮頸癌瘤組織免疫組化探索相關(guān)機制的試驗中觀察到,PTX-NPs+RT組的Ki-67陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)(21.7±7.5%)明顯低于PTX+RT組(40.6±4.4%,P0.05)、RT組(57.2±5.0%,P0.05)、NPs組(73.2±5.8%,P0.05)、PTX組(79.6±6.2%,P0.05)以及NS組(87.2±4.0%,P0.05),且具有統(tǒng)計學(xué)意義;腫瘤組織中CD31陽性的微血管密度(MVD)(2.1±0.3%)明顯少于PTX+RT組(3.8±0.4%,P0.05)、RT組(4.2±0.8%,P0.05)、NPs組(8.7±0.7%,P0.05)、PTX組(9.0±0.4%,P0.05)以及NS組(9.8±0.7%,P0.05),且具有統(tǒng)計學(xué)意義;并且,PTX-NPs+RT組VEGF陽性率(30.7±4.0%)也明顯低于PTX+RT組(85.6±3.5%,P0.01),RT組(89.7±3.5%,P0.01),NPs組(75.7±3.2%,P0.01),PTX組(77.4±5.1%,P0.01)以及NS組(80.0±5.0%,P0.01),且具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1、實驗中我們所制備的理論載藥率為8%的紫杉醇納米藥物具有良好的包封率、載藥率及穩(wěn)定性,在水溶液中成單一分散的球形狀態(tài),其在體外呈緩慢釋放模式,體外細(xì)胞毒性更小。2、實驗中所使用的PTX-NPs劑量小,其聯(lián)合放療能有效抑制宮頸癌腫瘤大小的生長并延長裸鼠的中位生存期,PET/CT掃描顯像結(jié)果表明PTX-NPs聯(lián)合放療能有效降低腫瘤組織的早期代謝情況。3、低劑量的PTX-NPs聯(lián)合放療能有效抑制宮頸癌生長的機制與抑制宮頸癌腫瘤細(xì)胞的增殖及血管生成相關(guān)。
[Abstract]:Objective : To study the inhibitory effect of paclitaxel nano - drug combined with radiotherapy on cervical cancer , and to explore its mechanism . Methods : In vivo experiments were carried out by using solid - state precipitation method to measure the drug - carrying rate ( DL ) , entrapment efficiency ( EE ) and release rate of paclitaxel . In vivo experiments were carried out to observe the changes of tumor cell proliferation ( Ki - 67 ) , microvessel density ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) and the rate of survival in nude mice . 鍦ㄧ14澶╂椂,绱潐閱囩撼綾寵嵂鐗╃瘡縐噴鏀劇傳鏉夐唶63.84%.鍦ㄤ綋澶栫粏鑳?yōu)姣掓�у疄楠屼腑,褰揚TX-NPs鍦ㄧ傳鏉夐唶嫻撳害澶т簬4渭g/m L鏃，

本文編號：1462899