發(fā)布時間：2017-11-28 23:20

  本文關(guān)鍵詞：異紫堇堿在宮頸癌SiHa細胞中通過逆上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化途徑實現(xiàn)抗癌作用

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【摘要】：背景與目的:宮頸癌是全世界導致婦女死亡的最主要惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率呈明顯上升趨勢,發(fā)病年齡亦趨于年經(jīng)化。宮頸癌的治療目前仍以手術(shù)治療為主,輔以化學藥物治療和放射治療。但手術(shù)切除創(chuàng)傷較大,功能受損嚴重;放化療常常伴有嚴重的并發(fā)癥,且醫(yī)療費用昂貴,療效不甚滿意。近年來研究發(fā)現(xiàn),HPV16亞型感染是激發(fā)宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化的最主要因素,但目前尚無抑制HPV基因表達和功能活性的有效方法,若能解決這一難題,將是宮頸癌防治工作的一大突破。異紫堇堿(Isocorydine,ICD)是在禿瘡花中發(fā)現(xiàn)的一種異喹啉類生物堿單體,可從植物中直接提取也可化學合成制得。已有研究發(fā)現(xiàn)異紫堇堿可以在體外抑制攜帶不同HPV亞型的人宮頸癌Hela和Si Ha細胞株中E6、E7基因的表達,本文旨在研究異紫堇堿抑制HPV16E6表達的具體作用和機制,此研究的深入可能使異紫堇堿成為一種治療HPV感染和宮頸癌的新的有效中藥單體,或為以其為基礎(chǔ)設(shè)計一類新藥提供理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)攜帶HPV16E6的Si Ha細胞,利用MTT實驗初步檢測異紫堇堿對Si Ha細胞活性產(chǎn)生的影響,并通過流式細胞學方法檢測處理后的Si Ha細胞凋亡和細胞周期的改變。采用全基因組基因芯片表達譜技術(shù)測定異紫堇堿處理后的Si Ha細胞株在轉(zhuǎn)錄基因水平上表達的改變,利用RT-PCR手段驗證芯片結(jié)果后,通過Western-blot驗證其在蛋白質(zhì)水平發(fā)生的改變。結(jié)果:異紫堇堿對宮頸癌Si Ha細胞增生具有明顯的抑制作用,MTT實驗結(jié)果顯示處理72h時最高抑制率可達68.69%。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果可發(fā)現(xiàn)異紫堇堿對Si Ha細胞在各個時間點及濃度的總凋亡率均在6%以下,細胞周期結(jié)果顯示發(fā)生了G1/S期阻滯。由全基因組芯片結(jié)果中篩選出有意義的目的基因Caspase14,CLCA2,NDRG1以及CDH1均表達上調(diào),并且經(jīng)RT-PCR驗證結(jié)果可靠,Western blot結(jié)果顯示其對應的蛋白質(zhì)水平上表達同步升高。此外,在Western blot實驗中我們同時驗證了Vimentin、HPV16E6以及PARP表達下調(diào),E-Cadherin、P21以及P53表達上調(diào)。結(jié)論:異紫堇堿通過P53-P21途徑引發(fā)Si Ha細胞周期阻滯,抑制細胞增殖,同時調(diào)控CLCA2,NDRG1,Caspase14等多個分子逆轉(zhuǎn)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化作用,抑制細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,促進宮頸癌Si Ha細胞向上皮細胞方向轉(zhuǎn)化從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展,發(fā)揮其抗癌作用。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33

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本文編號：1235367