本文關鍵詞：大鼠放射性肝損傷分子應答及機制研究

  更多相關文章： 放射性肝損傷 Kupffer細胞 TGF-β1/Smads信號通路 NF-κBp65

【摘要】：研究目的:通過觀察放射性肝損傷(RILD)大鼠模型中的相關細胞因子的表達水平變化,①找到減少放射性肝損傷作用和早期診斷損傷發(fā)生的生物標記分子以及引起相關信號通路改變的關鍵靶點;②分析并引發(fā)RILD的潛在機制和治療RILD的潛在靶點。研究方法:利用單次照射總劑量20Gy建立SD大鼠放射性損傷模型。完成放療后,觀察大鼠存活情況和精神、活動、皮毛,體重以及飲食等狀態(tài),在各時間點處死大鼠前檢測大鼠體重變化。在放療完成后3d,1,2,4,8,12周后分別取肝組織和血液樣本。分析大鼠血清中透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)、層粘連蛋白(Laminin,LN)、Ⅲ型前膠原(Procollagen-Ⅲ,PC-Ⅲ),以及IV型膠原(IV-C)的改變,用于分析放射性肝損傷后,肝纖維化的改變。HE染色和Masson染色法進行大鼠放射性肝損傷組織學分析,TUNEL試劑盒分析放射性肝損傷凋亡情況。免疫組化分析放射性肝損傷細胞因子和生長因子表達情況。Real-time PCR檢測大鼠放射性肝損傷細胞因子變化。Western blot檢測大鼠放射性肝損傷細胞因子蛋白變化。分離,純化并培養(yǎng)原代大鼠Kupffer細胞;免疫組化法鑒定Kupffer細胞表面標記F4/80表達。隨機分為對照組,放射組和氯化釓組。MTT法分別檢測各組細胞增殖情況。Caspase3凋亡試劑盒檢測各組細胞凋亡情況。ELISA法和Real-timePCR檢測各組細胞因子和生長因子的分泌變化。結果:1)接受照射總劑量20Gy的照射后,放射性肝損傷實驗組大鼠的體重降低,與對照組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與對照組比較,放射性肝損傷實驗組大鼠體重從放射結束后第2周就逐漸降低,一直持續(xù)至第12周研究結束,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);2)放射性肝損傷組大鼠血清AST、ALT、ALP酶活性在受照射后第2周開始升高,照射后直至研究結束的第12周達到高峰(P0.05)�？偰懠t素和直接膽紅素水平無統(tǒng)計學意義;3)透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PC-Ⅲ),以及IV型膠原(IV-C)在照射后,變化不顯著;4)HE染色和Masson染色可見放射性肝損傷病理改變隨放射后時間增加而明顯;5)放射肝損傷后大鼠肝細胞凋亡增加;6)免疫組化顯示TGF-β1,NF-κBp65,Smad4,Smad3,Smad7,TNF-α,CTGF在放射性肝損傷后都呈陽性表達,且隨著放射完成時間的延長,而表達增加更加明顯;7)Realtime PCR和Western blot結果顯示TGF-β1,NF-κBp65,Smad4,Smad3,Smad7,TNF-α,CTGF在放射性肝損傷后在不同時間點表達增加,且增加程度各異差異,具有統(tǒng)計學意義(P0.05);8)原代培養(yǎng)的Kupffer細胞具有典型的巨噬細胞特征,純度高,經(jīng)鑒定F4/80表達陽性;9)接受放射后可促進Kupffer細胞的增殖(P0.05);而應用Kupffer細胞抑制劑氯化釓作用后,Kupffer細胞增殖被抑制(P0.05)。接受照射可抑制Kupffer細胞Capase3的活性加(P0.05);而應用Kupffer細胞抑制劑氯化釓作用后,Kupffer細胞Capase3的活性增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);10)在放射活化的Kupffer細胞中TGF-β1,NF-κBp65,Smad4,Smad3,Smad7,TNF-α,CTGF表達明顯增加,與對照組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。加入氯化釓作用后,可抑制細胞因子和生長因子的表達,與照射組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:TGF-β1/Smads信號通路和NF-κB/p65信號通路參與調(diào)控放射性肝損傷。放射可引起Kupffer細胞增殖,活化。放射后激活Kupffer細胞可引起TGF-β1/Smads信號通路和NF-κB/p65信號通路活化。氯化釓的應用可有效抑制放射引起的Kupffer細胞活化,進而抑制TGF-β1/Smads信號通路和NF-κB/p65信號通路活化,從而為臨床研究和治療放射性肝損傷提供理論基礎和參考依據(jù)。
【關鍵詞】：放射性肝損傷 Kupffer細胞 TGF-β1/Smads信號通路 NF-κBp65
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.55;R735.7
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-20
• 第一部分 大鼠放射性肝損傷模型的建立20-36
• 1 材料與方法20-27
• 1.1 實驗材料20-24
• 1.2 實驗方法24-27
• 1.3 統(tǒng)計學分析27
• 2 結果27-31
• 3 討論31-35
• 4 小結35-36
• 第二部分 大鼠放射性肝損傷的分子應答36-61
• 1 材料與方法36-45
• 1.1 實驗材料36-40
• 1.2 實驗方法40-45
• 1.3 統(tǒng)計學分析45
• 2 結果45-53
• 3 討論53-60
• 4 小結60-61
• 第三部分 影響大鼠放射性肝損傷的分子應答機制的研究61-80
• 1 材料與方法61-65
• 1.1 實驗材料61-63
• 1.2 實驗方法63-65
• 1.3 統(tǒng)計學分析65
• 2 結果65-71
• 3 討論71-79
• 4 小結79-80
• 結論80
• 創(chuàng)新性和展望80-81
• 致謝81-82
• 參考文獻82-98
• 綜述98-114
• 參考文獻107-114
• 攻讀博士學位期間獲得的學術成果114-115
• 個人簡歷115-116
• 導師評閱表116

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本文編號：932938