發(fā)布時(shí)間：2017-08-15 01:06

  本文關(guān)鍵詞：BCCIP在塞來(lái)昔布提高腸癌細(xì)胞放射敏感性中的作用機(jī)制及臨床研究

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【摘要】：第一部分塞來(lái)昔布對(duì)COX-2不同表達(dá)水平腫瘤細(xì)胞的放射增敏作用目的:觀察和分析COX-2選擇性抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)COX-2不同表達(dá)水平腫瘤細(xì)胞的增殖抑制和放射增敏作用,以及對(duì)不同腫瘤細(xì)胞作用不同時(shí)間后BCCIP基因表達(dá)的情況。方法:選擇人肺腺癌細(xì)胞A549、宮頸癌細(xì)胞He La及結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。采用CCK-8法測(cè)定不同濃度塞來(lái)昔布與腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)不同時(shí)間后,對(duì)細(xì)胞活性的影響;克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察塞來(lái)昔布對(duì)三種腫瘤細(xì)胞放射敏感性的影響;Western blot法觀察COX-2基因的蛋白表達(dá);所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以means+SD表示,兩組間比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。細(xì)胞存活曲線用擬和軟件Graph Pad軟件生成,以線形二次方程及多靶單擊模型擬合,反映細(xì)胞敏感性的參數(shù)D0、Dq、N和K值由軟件直接得出。結(jié)果:肺腺癌細(xì)胞A549和宮頸癌細(xì)胞He La都有COX-2的高表達(dá),而結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的COX-2表達(dá)是陰性的;不同濃度和不同作用時(shí)間的塞來(lái)昔布對(duì)三種腫瘤細(xì)胞株均具有明顯的增殖抑制作用,增殖抑制率(IR)隨藥物濃度增加及作用時(shí)間延長(zhǎng)而呈增高趨勢(shì),具有劑量和時(shí)間依賴性;在0~40μmol/L范圍內(nèi),塞來(lái)昔布對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,后續(xù)實(shí)驗(yàn)都采用對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響的塞來(lái)昔布濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn);30μmol/L塞來(lái)昔布對(duì)三種細(xì)胞均有放射增敏效應(yīng),SERD0值分別為:A549細(xì)胞1.254,Hela細(xì)胞1.213,HCT116細(xì)胞1.224;三種腫瘤細(xì)胞株中均有BCCIP的正常表達(dá),但表達(dá)水平略有差異,COX-2表達(dá)陰性的HCT116細(xì)胞在塞來(lái)昔布作用一定時(shí)間后,可見(jiàn)BCCIP表達(dá)上調(diào)。結(jié)論:腫瘤細(xì)胞中COX-2表達(dá)水平并不影響塞來(lái)昔布對(duì)腫瘤細(xì)胞的放射增敏效應(yīng),30μmol/L塞來(lái)昔布處理COX-2表達(dá)陰性的HCT116細(xì)胞后6小時(shí),細(xì)胞的BCCIP表達(dá)明顯升高。第二部分sh RNA法構(gòu)建穩(wěn)定敲低BCCIP基因的結(jié)腸癌細(xì)胞目的:構(gòu)建穩(wěn)定敲低BCCIP基因的結(jié)腸癌細(xì)胞并觀察塞來(lái)昔布對(duì)BCCIP不同表達(dá)水平的結(jié)腸癌細(xì)胞放射敏感性的影響。方法:采用BCCIP-sh RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞建立BCCIP敲低細(xì)胞模型C12,通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了HCT116細(xì)胞中瞬轉(zhuǎn)質(zhì)粒后BCCIP轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平,通過(guò)Western blot技術(shù)比較正常和穩(wěn)定敲低BCCIP基因的HCT116細(xì)胞中BCCIP蛋白表達(dá)的情況,通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察塞來(lái)昔布對(duì)同源但BCCIP表達(dá)水平不同的HCT116細(xì)胞株的放射增敏效應(yīng)。結(jié)果:轉(zhuǎn)染了p PUR/U6-311+p Silencer2.1Hyg-633和p PUR/U6-311+p Silencer2.1Hyg-730載體組合的HCT116細(xì)胞中BCCIP的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄本水平有明顯降低,降低程度超過(guò)95%(P0.05)。收集穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后經(jīng)嘌呤霉素篩選的單克隆C12細(xì)胞及對(duì)照組細(xì)胞總蛋白,采用Western blot法從蛋白表達(dá)水平檢測(cè)BCCIP的表達(dá)情況,與未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染p PUR/U6-311+p Silencer2.1Hyg-730的HCT116細(xì)胞中BCCIP的表達(dá)在蛋白質(zhì)水平有明顯降低。30μmol/L塞來(lái)昔布對(duì)HCT116細(xì)胞有明顯的放射增敏效應(yīng),增敏比為SERD0=1.224,但在BCCIP低表達(dá)的C12細(xì)胞中未觀察到塞來(lái)昔布的放射增敏效應(yīng),增敏比SERD0=1.038。結(jié)論:BCCIP穩(wěn)定敲低的HCT116細(xì)胞(以下都稱(chēng)為C12細(xì)胞)可以被成功構(gòu)建并長(zhǎng)期培養(yǎng),與BCCIP正常表達(dá)的HCT116細(xì)胞相比,30μmol/L的塞來(lái)昔布對(duì)該細(xì)胞的放射敏感性沒(méi)有影響。第三部分BCCIP基因在塞來(lái)昔布放射增敏中的作用機(jī)制目的:觀察BCCIP基因在塞來(lái)昔布提高HCT116細(xì)胞放射敏感性中的作用,并探討和研究可能的機(jī)制。方法:采用Western blot法觀察經(jīng)30μmol/L塞來(lái)昔布處理后用6Gy劑量照射不同BCCIP表達(dá)水平的兩種細(xì)胞,照射后1h、3h和18h,兩種細(xì)胞γ-H2AX、ATM和Chk2等放射損傷相關(guān)蛋白的表達(dá)情況;免疫熒光法檢測(cè)兩種細(xì)胞接受上述處理后細(xì)胞中的γ-H2AX foci形成情況;流式細(xì)胞法檢測(cè)兩種細(xì)胞未處理組、加30μmol/L塞來(lái)昔布組、不同劑量單純照射組和不同劑量照射+30μmol/L塞來(lái)昔布組的細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡的情況;Western blot法對(duì)比兩種細(xì)胞未處理組、30μmol/L塞來(lái)昔布組、6Gy單純照射組和6Gy照射+30μmol/L塞來(lái)昔布組細(xì)胞內(nèi)周期相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:HCT116細(xì)胞在30μmol/L塞來(lái)昔布+6Gy照射處理后1h、3h和18h,細(xì)胞中γ-H2AX、ATM、Chk2蛋白表達(dá)較單純放射組和對(duì)照組明顯升高,但在C12細(xì)胞中我們沒(méi)有觀察到這一變化;免疫熒光法也觀察到一致的結(jié)果;照射前6h聯(lián)合30μmol/L塞來(lái)昔布,可明顯增強(qiáng)HCT116細(xì)胞由電離輻射誘導(dǎo)的G2-M期阻滯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);但在C12細(xì)胞中沒(méi)有觀察到這種差異(P0.05);無(wú)論是HCT116細(xì)胞還是C12細(xì)胞,放射均能導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡(P0.01),HCT116細(xì)胞在放射前加入30μmol/L塞來(lái)昔布處理后,凋亡率升高(P0.05),而C12細(xì)胞在放射前加入塞來(lái)昔布處理后,凋亡率升高不明顯(P0.05);30μmol/L塞來(lái)昔布聯(lián)合放射作用HCT116細(xì)胞,BCCIP和p53、p21蛋白表達(dá)增加,而Cyclin B1蛋白表達(dá)下降,而在C12細(xì)胞中,上述蛋白表達(dá)均沒(méi)有變化。結(jié)論:BCCIP可能是一種與放射敏感性有關(guān)的靶點(diǎn)基因,塞來(lái)昔布通過(guò)對(duì)BCCIP的調(diào)控,增加細(xì)胞的放射損傷,影響其下游的p53的功能,從而影響p21、Cyclin B1等基因的表達(dá),經(jīng)由細(xì)胞阻滯和凋亡的增加發(fā)揮放射增敏的效應(yīng)。第四部分BCCIP表達(dá)水平對(duì)預(yù)測(cè)塞來(lái)昔布聯(lián)合術(shù)前放化療提高直腸癌療效的意義目的:通過(guò)檢測(cè)治療前每個(gè)病人活檢直腸癌組織中的BCCIP、COX-2和p53的表達(dá)情況,與塞來(lái)昔布口服聯(lián)合術(shù)前放化療后手術(shù)切除標(biāo)本病理反應(yīng)的關(guān)系,研究各基因表達(dá)與療效之間的相關(guān)性,探討B(tài)CCIP的表達(dá)水平在預(yù)測(cè)塞來(lái)昔布提高直腸癌術(shù)前放療敏感性的臨床意義。方法:選擇年齡為18~70歲、PS評(píng)分0~2分、治療前經(jīng)病理活檢確診為腺癌或腺瘤癌變、治療前未接受過(guò)直腸手術(shù)或放化療的患者,放化療前活檢腫瘤組織進(jìn)行常規(guī)病理切片檢查并制作組織芯片;放化療前、手術(shù)前常規(guī)各進(jìn)行一次盆腔MRI檢查(因各種原因無(wú)法接受MRI檢查的病人行增強(qiáng)盆腔CT檢查),并由專(zhuān)業(yè)影像科醫(yī)師進(jìn)行讀片并對(duì)比治療前后腫瘤退縮情況;采用免疫組化法對(duì)組織芯片進(jìn)行染色讀片,檢測(cè)BCCIP、COX-2和p53的表達(dá)情況;所有患者均接受術(shù)前塞來(lái)昔布聯(lián)合放化療+手術(shù)治療;根據(jù)TRG法對(duì)切除的腫瘤標(biāo)本進(jìn)行放療敏感性的評(píng)估;根據(jù)治療前后盆腔MRI影像上對(duì)比腫瘤退縮情況,采用RECIST評(píng)分評(píng)價(jià)臨床療效;對(duì)不同療效評(píng)價(jià)之間的相關(guān)關(guān)系采用spearman相關(guān)分析;采用Fisher’s確切概率法評(píng)價(jià)臨床信息的差異和蛋白表達(dá)與療效之間的相關(guān)性,P0.05為顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:2012年1月至2014年12月期間蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院放療科收治31例符合入組標(biāo)準(zhǔn)的直腸癌患者接受術(shù)前塞來(lái)昔布聯(lián)合放化療,所有患者都完成了塞來(lái)昔布聯(lián)合放化療的預(yù)定治療,治療耐受性良好。其中,3例患者因治療后腫瘤退縮明顯,局部癥狀明顯改善而且因?yàn)槟挲g較大或有手術(shù)禁忌證而拒絕行手術(shù)治療(臨床影像學(xué)評(píng)價(jià)均為CR),后續(xù)繼續(xù)局部放療加量照射達(dá)根治量;31例病人中,有7例病人BCCIP表達(dá)陰性,2例病人COX-2表達(dá)陰性,4例病人p53表達(dá)陽(yáng)性;術(shù)后有5例病人獲得了病理學(xué)的完全緩解(p CR),p CR率為17.9%(5/28),但全組腫瘤退縮(TGR grade3+4)和影像學(xué)客觀有效率(CR+PR)分別達(dá)到了53%(15/28)和77%(24/31);經(jīng)單因素分析,BCCIP的表達(dá)與治療后腫瘤的TRG、RECIST客觀有效明顯相關(guān)(P=0.029和0.002),但與p CR的相關(guān)性不強(qiáng)(P=0.290),COX-2的表達(dá)與療效無(wú)關(guān)(P=0.331、1和0.406),p53的表達(dá)也與p CR和TRG無(wú)明顯相關(guān)(P=1、0.331),但p53野生型的患者在影像學(xué)上顯示腫瘤有更明顯的退縮(P=0.028)。結(jié)論:塞來(lái)昔布聯(lián)合放化療在局部晚期直腸癌中的應(yīng)用安全有效,BCCIP正常表達(dá)的病人采用塞來(lái)昔布聯(lián)合術(shù)前放化療后獲得更好的療效。BCCIP有可能成為預(yù)測(cè)局部晚期直腸癌術(shù)前放化療療效的指標(biāo),并有希望成為臨床使用塞來(lái)昔布聯(lián)合放療增敏的局部晚期直腸癌適應(yīng)人群的初步篩選指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：塞來(lái)昔布 放射敏感性 BCCIP BCCIP 放射敏感性 結(jié)腸癌 放射敏感性 BCCIP p53 p21 Cyclin B1 塞來(lái)昔布 放射治療 化學(xué)治療 直腸癌 BCCIP
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R730.55
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• abstract8-14
• 序言14-22
• 0.1 研究意義14-15
• 0.2 研究現(xiàn)狀15-17
• 0.3 假設(shè)提出的理論及研究研究方向17-18
• 參考文獻(xiàn)18-22
• 第一部分 塞來(lái)昔布對(duì)COX-2 不同表達(dá)水平腫瘤細(xì)胞的放射增敏作用22-42
• 1.1 引言22
• 1.2 材料和方法22-30
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-37
• 1.4 討論37-39
• 1.5 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 第二部分shRNA法構(gòu)建穩(wěn)定敲低BCCIP基因的 結(jié)腸癌細(xì)胞42-53
• 2.1 引言42
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料42-49
• 2.3 結(jié)果49-51
• 2.4 討論51-52
• 2.5 結(jié)論52
• 參考文獻(xiàn)52-53
• 第三部分BCCIP基因在塞來(lái)昔布提高HCT116細(xì)胞放射敏感性中的作用機(jī)制53-68
• 3.1 引言53
• 3.2 材料和方法53-57
• 3.3 結(jié)果57-63
• 3.4 討論63-65
• 3.5 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-68
• 第四部分BCCIP表達(dá)水平對(duì)預(yù)測(cè)西樂(lè)葆聯(lián)合術(shù)前放化療提高直腸癌療效的意義68-89
• 4.1 引言68-69
• 4.2 材料與方法69-76
• 4.3 結(jié)果76-84
• 4.4 討論84-86
• 4.5 結(jié)論86-87
• 參考文獻(xiàn)87-89
• 綜述89-116
• 參考文獻(xiàn)104-116
• 中英文對(duì)照縮略詞表116-117
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文117-119
• 致謝119-120

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1 胥昀;塞來(lái)昔布對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株作用及其機(jī)制的體外研究[D];浙江大學(xué);2007年

2 夏文宏;塞來(lái)昔布通過(guò)環(huán)氧合酶-2非依賴性途徑下調(diào)p-糖蛋白表達(dá)增加抗腫瘤藥物敏感性[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

3 陳剛;塞來(lái)昔布抗人肺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的機(jī)制及化療輔助作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

4 劉東伯;塞來(lái)昔布抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年

5 趙士彭;塞來(lái)昔布聯(lián)合奧沙利鉑抗人結(jié)腸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)作用及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

6 許濤;塞來(lái)昔布治療常染色體顯性多囊腎病的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 徐曉婷;BCCIP在塞來(lái)昔布提高腸癌細(xì)胞放射敏感性中的作用機(jī)制及臨床研究[D];蘇州大學(xué);2015年

8 郭遠(yuǎn)林;特異性環(huán)氧化酶-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

9 徐剛;環(huán)氧合酶2選擇性抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)胰腺癌化療和放療的增敏作用及其機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

10 TAGHIYEV ASAF M.D;不同阻斷方式對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的影響及塞來(lái)昔布保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 涂宏;塞來(lái)昔布對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲的影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];南華大學(xué);2011年

2 張園;塞來(lái)昔布對(duì)大鼠未分化嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞電壓門(mén)控性鈣通道電流的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

3 婁長(zhǎng)芹;非甾體類(lèi)抗炎藥塞來(lái)昔布抗肝癌的機(jī)制[D];吉林大學(xué);2008年

4 吳鴻亮;塞來(lái)昔布對(duì)小鼠骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2011年

5 葛曉華;塞來(lái)昔布對(duì)急性白血病原代細(xì)胞增殖及血管新生的影響[D];河南科技大學(xué);2012年

6 馮霞;塞來(lái)昔布對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡及其相關(guān)因子表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2008年

7 李自亨;塞來(lái)昔布對(duì)小鼠胱腫瘤的抑制作用[D];青島大學(xué);2010年

8 崔志艷;塞來(lái)昔布合成方法與雜質(zhì)研究[D];河北科技大學(xué);2013年

9 王旭;塞來(lái)昔布與茶多酚合用對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響和機(jī)制[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

10 公維義;塞來(lái)昔布和羅非昔布輔助術(shù)后鎮(zhèn)痛的臨床研究[D];延邊大學(xué);2004年

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本文編號(hào)：675550