本文關(guān)鍵詞：超聲聯(lián)合微泡介導(dǎo)CXCR-4轉(zhuǎn)染BMSCs靶向歸巢并修復(fù)糖尿病腎病的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 糖尿病腎病 超聲 微泡 靶向歸巢 CXCR-4基因 體外轉(zhuǎn)染

【摘要】：研究背景:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病病程中最常見的微血管并發(fā)癥,是西方國(guó)家導(dǎo)致終末期腎病的主要原因,近年來隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人民生活水平提高,DN在我國(guó)的發(fā)病率呈快速上升趨勢(shì),但目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。目前治療DN的方法如藥物調(diào)控血糖和血壓、透析治療、腎臟移植等雖然能夠一定程度上改善腎功能,但卻難以改善患者長(zhǎng)期預(yù)后。目前為止尚無治愈糖尿病腎病的有效方法。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow derived stroma cells,BMSCs)由于其易分離提取、具有高度的擴(kuò)增潛能、不涉及倫理道德問題等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛關(guān)注。MSCs能夠通過修復(fù)損傷腎細(xì)胞、旁分泌效應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫狀態(tài)等有效地控制DN的進(jìn)展,被認(rèn)為是減輕腎損傷、促進(jìn)腎功能恢復(fù)的有效方法。然而,經(jīng)靜脈注射的BMSCs存在腎臟靶向歸巢效率很低、移植后細(xì)胞存活效率欠佳等問題,嚴(yán)重制約了BMSCs對(duì)靶器官組織的修復(fù)作用。因此,如何提高干細(xì)胞腎向性移植有效性是其治療腎臟疾病的關(guān)鍵。目前對(duì)于BMSCs靶向歸巢的具體機(jī)制仍不明確,但普遍認(rèn)為BMSCs靶向歸巢過程與炎癥細(xì)胞遷移至炎癥損傷部位或淋巴細(xì)胞歸巢至淋巴結(jié)過程相似,靶組織表達(dá)的多種粘附因子、趨化因子與其受體間的相互作用均參與BMSCs的靶向歸巢。其中,基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)與其特異性受體CXCR-4結(jié)合形成的SDF-1/CXCR-4軸不僅是促進(jìn)BMSCs靶向歸巢最重要的生物軸,而且具有抑制BMSCs凋亡、增加細(xì)胞存活率等作用,可多方面提高BMSCs的歸巢效率。然而,體外擴(kuò)增的BMSCs表面CXCR-4受體隨傳代次數(shù)增加而減少,嚴(yán)重限制了其遷移能力。使用病毒載體轉(zhuǎn)染基因的方法可提高干細(xì)胞表面受體表達(dá),但此類研究方法因?yàn)槠淇赡軒淼陌踩韵拗贫鴥H停留在體外實(shí)驗(yàn)階段。此外,使用脈沖式聚焦超聲(pulsed focused ultrasound,p FUS)等方法輻照腎組織可以成功提高靜脈注射BMSCs靶向歸巢效率,但因?yàn)槠鋵?duì)人體創(chuàng)傷明顯、靶向控制率低、缺少臨床授權(quán)等原因未能得到進(jìn)一步應(yīng)用。故發(fā)展一種更為安全、有效的增加BMSCs細(xì)胞膜表面CXCR-4受體水平和促進(jìn)其靶向歸巢的方法對(duì)于提高BMSCs治療DN效果至關(guān)重要。超聲靶向擊破微泡(Ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技術(shù)作為近年來得到廣泛認(rèn)可的新技術(shù)已被應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域,例如促進(jìn)基因轉(zhuǎn)染效率、增加藥物或基因靶向傳遞水平、增加血管通透性等。與常用的病毒載體轉(zhuǎn)染技術(shù)相比,UTMD可以安全有效的促進(jìn)非病毒載體的轉(zhuǎn)染效率。另外,課題組前期實(shí)驗(yàn)使用UTMD技術(shù)可以顯著提高BMSCs在大鼠心肌缺血區(qū)域和大鼠輸尿管梗阻模型腎臟區(qū)域的靶向歸巢效率。腎臟作為一種高血供、高濾過性器官,對(duì)于生物學(xué)效應(yīng)較為敏感,UTMD技術(shù)對(duì)于DN疾病的干細(xì)胞治療是否同樣有效呢?基于以上設(shè)想,本研究使用鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)建立1型糖尿病腎病大鼠模型,擬使用UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體介導(dǎo)CXCR-4基因修飾體外擴(kuò)增的BMSCs,同時(shí)使用UTMD技術(shù)對(duì)DN大鼠腎臟區(qū)域進(jìn)行靶向輻照,嘗試?yán)梦⑴菰鰪?qiáng)的生物學(xué)效應(yīng)改變腎臟微環(huán)境,增加靶區(qū)粘附因子、歸巢因子(特別是SDF-1)的特異性表達(dá),為靜脈注射BMSCs靶向歸巢創(chuàng)造條件。通過UTMD技術(shù)介導(dǎo)CXCR-4修飾BMSCs向DN大鼠腎臟區(qū)域靶向歸巢與聚集,進(jìn)而提高干細(xì)胞有效靶向歸巢效率及減緩DN疾病進(jìn)程的作用。本研究將基因治療、干細(xì)胞治療與超聲介導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)相結(jié)合,對(duì)提高BMSCs移植效率以及治療DN的有效性、安全性進(jìn)行研究,并對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行探索,以期為干細(xì)胞治療DN提供新的策略和思路。研究目的:1.探討UTMD技術(shù)聯(lián)合脂質(zhì)體實(shí)現(xiàn)CXCR-4轉(zhuǎn)染修飾體外擴(kuò)增BMSCs的有效性、可行性及可能機(jī)制,并對(duì)轉(zhuǎn)染后BMSCs體外遷移能力進(jìn)行評(píng)估,試圖發(fā)現(xiàn)一種有效、安全實(shí)現(xiàn)CXCR-4基因高效轉(zhuǎn)染的非病毒方法,為提高體外培養(yǎng)BMSCs遷移能力提供新的可能;2.探討在一定參數(shù)條件下診斷超聲介導(dǎo)的UTMD促進(jìn)BMSCs歸巢正常大鼠及DN大鼠腎臟的可行性和安全性,以及對(duì)腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的影響,并對(duì)可能機(jī)制進(jìn)行探索;3.探討診斷超聲介導(dǎo)的UTMD技術(shù)促進(jìn)CXCR-4修飾的BMSCs靶向移植歸巢DN大鼠腎臟組織并修復(fù)DN的可行性、有效性及可能機(jī)制,為探索BMSCs治療DN新方法提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法:1.微泡介導(dǎo)治療超聲協(xié)同脂質(zhì)體促CXCR-4基因修飾大鼠BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究采用密度梯度離心和貼壁相結(jié)合的方法對(duì)大鼠BMSCs進(jìn)行分離培養(yǎng),選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的第三代BMSCs用于實(shí)驗(yàn),使用流式細(xì)胞技術(shù)(Flow cytometry,FCM)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)周期和干細(xì)胞表面標(biāo)志物,對(duì)BMSCs進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)分化并鑒定。BLAST軟件對(duì)大鼠CXCR-4基因比對(duì)后得到基因序列并構(gòu)建p Ds Red-CXCR-4質(zhì)粒,使用UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體對(duì)BMSCs進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染,并用激光共聚焦顯微鏡(Laser scanning confocal microscope,LSCM)、逆轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)、蛋白質(zhì)印跡法(Western-blot,WB)、免疫熒光、FCM等技術(shù)檢測(cè)CXCR-4受體表達(dá)情況,Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)估轉(zhuǎn)染后BMSCs體外遷移能力的變化,掃描電鏡觀察UTMD協(xié)同脂質(zhì)體作用對(duì)于BMSCs造成的損傷并對(duì)基因轉(zhuǎn)染效率增加的原因進(jìn)行初步分析。2.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)促BMSCs歸巢健康大鼠腎臟并評(píng)估其安全性使用攜帶紅色熒光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的慢病毒對(duì)BMSCs進(jìn)行轉(zhuǎn)染,以RFP作為干細(xì)胞在體內(nèi)的示蹤劑。將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為四組:對(duì)照組(Con組)、單純微泡組(MB組)、單純超聲輻照組(US組)和超聲聯(lián)合微泡輻照組(UTMD組)。對(duì)各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎臟分別處理后經(jīng)尾靜脈注射RFP-BMSCs,并在處理后12h、24h、48h和72h取出大鼠腎臟制作冰凍切片,使用LSCM觀察腎臟內(nèi)紅色熒光分布并定量分析,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real time q PCR)檢測(cè)腎組織中RFP m RNA的表達(dá)以定量評(píng)估干細(xì)胞在腎臟靶向歸巢情況。檢測(cè)大鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)評(píng)價(jià)腎功能的變化;HE、PAS染色法觀察UTMD處理后腎組織病理水平變化進(jìn)而評(píng)估此方法的安全性。WB和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測(cè)處理后腎臟組織各種歸巢促進(jìn)因子和炎癥因子的變化情況,透射電鏡觀察腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的相關(guān)改變,對(duì)促進(jìn)BMSCs靶向歸巢的機(jī)制做初步探索。3.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)促BMSCs靶向歸巢DN大鼠腎臟的實(shí)驗(yàn)研究SD大鼠腹腔注射STZ建立1型DN模型,檢測(cè)大鼠隨機(jī)血糖濃度和24小時(shí)尿微量白蛋白含量評(píng)價(jià)模型是否成功建立。為了盡可能減少實(shí)驗(yàn)中可能存在的誤差,本研究使用診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)對(duì)DN大鼠右側(cè)腎臟進(jìn)行靶向輻照,左側(cè)腎臟設(shè)為內(nèi)部對(duì)照。經(jīng)尾靜脈注射RFP-BMSCs后24h、48h和72h將DN大鼠兩側(cè)腎臟取出制作冰凍切片,使用LSCM觀察腎臟內(nèi)紅色熒光分布,Real-time q PCR檢測(cè)腎組織中RFP m RNA的含量評(píng)估BMSCs靶向歸巢情況。檢測(cè)腎功能、HE和PAS染色等方法評(píng)估UTMD技術(shù)對(duì)DN大鼠腎臟可能造成的損害。使用免疫組化、WB和ELISA法檢測(cè)腎臟組織各種歸巢促進(jìn)因子和炎癥因子的變化情況,透射電鏡觀察腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的相關(guān)改變,對(duì)BMSCs靶向歸巢DN大鼠腎組織效率增加的機(jī)制做初步探索。4.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)促經(jīng)靜脈移植CXCR-4修飾BMSCs歸巢并改善大鼠DN的實(shí)驗(yàn)研究將構(gòu)建成功的DN大鼠模型隨機(jī)分為對(duì)照組(Con)、超聲輻照靶向擊破微泡組(UTMD)、單純BMSCs注射組(BMSCs)、CXCR-4轉(zhuǎn)染BMSCs組(CXCR-4+BMSCs)、UTMD處理后注射BMSCs注射組(UTMD+BMSCs)、UTMD處理后注射CXCR-4轉(zhuǎn)染BMSCs注射組(UTMD+CXCR-4+BMSCs),經(jīng)尾靜脈注射RFP-BMSCs后24h、48h和72h將DN大鼠兩側(cè)腎臟取出制作冰凍切片,使用LSCM觀察腎臟內(nèi)紅色熒光分布,Real-time q PCR檢測(cè)腎組織中RFP m RNA的含量以評(píng)估BMSCs靶向腎組織歸巢情況。各實(shí)驗(yàn)組DN大鼠進(jìn)行相應(yīng)處理3d、7d、14d后分別檢測(cè)治療效果,對(duì)各實(shí)驗(yàn)組DN大鼠血糖濃度、24h尿蛋白及尿UAER值變化進(jìn)行檢測(cè);PAS染色對(duì)各實(shí)驗(yàn)組DN大鼠腎臟損傷進(jìn)行觀察;使用Real time-q PCR、WB方法分別檢測(cè)腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factorβ,TGF-β1)在不同時(shí)相點(diǎn)的腎臟表達(dá)水平。結(jié)果:1.微泡介導(dǎo)治療超聲協(xié)同脂質(zhì)體促CXCR-4基因修飾大鼠BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究成功分離培養(yǎng)大鼠BMSCs,FCM結(jié)果顯示細(xì)胞表面高表達(dá)CD29,CD44和CD90,幾乎不表達(dá)CD34,CD45和CD11b,BMSCs成脂、成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)成功。使用UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體對(duì)第三代BMSCs進(jìn)行p Ds Red-CXCR-4基因轉(zhuǎn)染,48h后使用LSCM和FCM定性和定量檢測(cè)結(jié)果顯示UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體可以顯著增加干細(xì)胞中RFP的表達(dá),RT-PCR結(jié)果顯示CXCR-4基因轉(zhuǎn)染效率在UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體處理組BMSCs顯著高于其余實(shí)驗(yàn)組。WB、FCM和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)BMSCs細(xì)胞膜表面CXCR-4受體蛋白表達(dá)水平與以上結(jié)果一致。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體處理后BMSCs遷移能力顯著高于其余實(shí)驗(yàn)組。轉(zhuǎn)染后BMSCs形態(tài)仍為梭形,生長(zhǎng)良好,成脂、成骨分化功能正常。掃描電鏡可見處理后BMSCs細(xì)胞膜表面出現(xiàn)可復(fù)性大小不一的小孔和裂隙。2.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)促BMSCs歸巢健康大鼠腎臟并評(píng)估其安全性攜RFP慢病毒對(duì)培養(yǎng)3代BMSCs進(jìn)行轉(zhuǎn)染后可見絕大部分BMSCs呈現(xiàn)明亮的紅色熒光,RFP轉(zhuǎn)染陽性率約97%,可作為BMSCs示蹤標(biāo)記。各實(shí)驗(yàn)組健康大鼠經(jīng)相應(yīng)處理后12h、24h、48h和72h,LSCM觀察結(jié)果顯示UTMD組大鼠腎臟RFP-BMSCs細(xì)胞數(shù)目顯著高于其余各實(shí)驗(yàn)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Real-time q PCR檢測(cè)結(jié)果與其結(jié)論一致。病理檢查結(jié)果顯示UTMD處理后腎小球未見明顯損傷,腎間質(zhì)可見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),未出現(xiàn)出血、壞死、組織結(jié)構(gòu)紊亂等現(xiàn)象。腎功能檢查Scr和BUN結(jié)果顯示經(jīng)相應(yīng)處理后腎功能無明顯改變。WB和ELISA結(jié)果顯示UTMD處理后腎臟組織表達(dá)歸巢促進(jìn)因子(E-selectin、VCAM-1、SDF-1、VEGF)及炎癥趨化因子(IL-1α,IL-2,IL-3,IFN-γ,TNF-α,MCP-1和MIP-α)與其余各實(shí)驗(yàn)組相比顯著增加,并在處理后72h恢復(fù)至正常水平。透射電鏡觀察到UTMD作用后腎臟間質(zhì)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞變的不連續(xù)、不光滑,內(nèi)皮細(xì)胞完整性破壞。3.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)促BMSCs靶向歸巢DN大鼠腎臟的實(shí)驗(yàn)研究大鼠腹腔注射STZ一周后可出現(xiàn)精神不振、多飲、多食、多尿、活動(dòng)減少等體征,隨機(jī)血糖濃度大于16.7mmol/L,4周后檢測(cè)到尿微量白蛋白,提示早期DN模型成功建立。LSCM觀察發(fā)現(xiàn)靜脈注射的RFP-BMSCs主要?dú)w巢于DN大鼠處理側(cè)(右側(cè))腎間質(zhì)毛細(xì)血管周圍,而在對(duì)照側(cè)(左側(cè))腎臟組織僅能觀察到很少紅色熒光表達(dá)。UTMD處理24h、48h和72h后右側(cè)腎臟歸巢的BMSCs數(shù)目顯著高于左側(cè)腎臟歸巢數(shù)目,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Real-time q PCR檢測(cè)結(jié)果與其結(jié)論一致。HE染色檢查結(jié)果顯示DN大鼠腎臟經(jīng)UTMD處理24h、48h后可見輕微出血和炎癥反應(yīng),72h后基本恢復(fù)正常;PAS染色檢查結(jié)果顯示UTMD處理后腎臟未出現(xiàn)出血、壞死、組織結(jié)構(gòu)紊亂等現(xiàn)象;腎功能檢查結(jié)果顯示BUN和Scr值無明顯改變。WB和ELISA結(jié)果顯示UTMD靶向輻照DN大鼠腎臟24h和48h后腎臟組織表達(dá)歸巢促進(jìn)因子(E-selectin、VCAM-1、SDF-1、VEGF)及炎癥趨化因子(IL-1α,IL-2,IL-3,IFN-γ,TNF-α,MCP-1 and MIP-α)比對(duì)照側(cè)腎臟顯著增加,并在處理后72h恢復(fù)至正常水平。透射電鏡觀察到UTMD作用后DN大鼠腎臟間質(zhì)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞變的不連續(xù)、不光滑,內(nèi)皮細(xì)胞完整性破壞。4.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)促靜脈移植BMSCs歸巢并修復(fù)DN的實(shí)驗(yàn)研究LSCM觀察顯示靜脈注射的RFP-BMSCs主要分布于DN大鼠腎間質(zhì)毛細(xì)血管周圍,各實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行相應(yīng)處理24h、48h和72h后發(fā)現(xiàn)UTMD+CXCR-4+BMSCs組大鼠腎臟RFP-BMSCs數(shù)目顯著高于其余各實(shí)驗(yàn)組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DN大鼠經(jīng)BMSCs治療后血糖濃度顯著下降,與腎臟歸巢干細(xì)胞數(shù)目無顯著相關(guān)。BMSCs組、CXCR-4+BMSCs組、UTMD+BMSCs組及UTMD+CXCR-4+BMSCs組DN大鼠經(jīng)移植BMSCs治療7d后24h尿蛋白及尿UAER值與Con組相比均逐漸下降,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中UTMD+CXCR-4+BMSCs組24h尿蛋白及尿UAER值顯著低于其余各實(shí)驗(yàn)組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但均未恢復(fù)至正常水平。腎臟PAS染色結(jié)果顯示未移植BMSCs的DN腎臟表現(xiàn)為腎小球硬化、基底膜增厚、系膜區(qū)基質(zhì)增生、糖原在腎組織堆積,未經(jīng)BMSCs治療DN腎臟損傷程度稍輕。Real-time q PCR、WB方法分別檢測(cè)TNF-α和TGF-β在不同時(shí)相點(diǎn)DN大鼠腎臟的表達(dá)水平,結(jié)果顯示在UTMD組和Con組DN大鼠腎臟有較強(qiáng)表達(dá),在BMSCs組、CXCR-4+BMSCs組、UTMD+BMSCs組和UTMD+CXCR-4+BMSCs組均逐漸減弱,表達(dá)較Con組減少且差異顯著(P0.05),其中UTMD+CXCR-4+BMSCs組DN大鼠腎臟TNF-α和TGF-β的表達(dá)在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)均低于同時(shí)期其余各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.成功使用對(duì)大鼠BMSCs進(jìn)行分離、培養(yǎng)、鑒定及純化,提示體外傳代培養(yǎng)的BMSCs呈低分化狀態(tài),具有較強(qiáng)的增殖和分化能力。2.UTMD技術(shù)協(xié)同脂質(zhì)體可以通過“聲孔效應(yīng)”安全有效增強(qiáng)p Ds Red-CXCR-4基因在第三代BMSCs轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平,顯著增強(qiáng)BMSCs的體外遷移能力。3.使用攜RFP慢病毒對(duì)培養(yǎng)的第3代BMSCs進(jìn)行轉(zhuǎn)染可使BMSCs長(zhǎng)時(shí)間呈現(xiàn)明亮且表達(dá)穩(wěn)定的紅色熒光,可以有效標(biāo)記干細(xì)胞進(jìn)而示蹤其在靶器官的分布。4.使用診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)輻照健康大鼠腎臟可以安全、有效的增加BMSCs靶向歸巢的效率,初步探討其機(jī)制發(fā)現(xiàn)“空化效應(yīng)”對(duì)腎臟間質(zhì)毛細(xì)血管的可逆性損傷導(dǎo)致腎臟局部微環(huán)境改變可能是造成BMSCs歸巢效率增加的主要原因。5.腹腔注射STZ可以建立穩(wěn)定的大鼠1型糖尿病腎病模型,通過檢測(cè)隨機(jī)血糖濃度、24h尿微量白蛋白等指標(biāo)可以證實(shí)DN模型建立成功。6.診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)輻照DN大鼠右側(cè)腎臟可以安全、有效的增加BMSCs靶向歸巢右側(cè)腎臟的效率(左側(cè)腎臟作為內(nèi)部對(duì)照),初步探討其機(jī)制發(fā)現(xiàn)超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)所產(chǎn)生的“空化效應(yīng)”可對(duì)輻照側(cè)腎臟間質(zhì)毛細(xì)血管造成可逆性損傷,其產(chǎn)生的局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致腎臟局部微環(huán)境改變可能是造成BMSCs靶向歸巢效率增加的主要原因。7.使用診斷超聲介導(dǎo)的微泡破壞技術(shù)能夠增加CXCR-4修飾BMSCs靶向歸巢DN大鼠腎臟的效率,通過抑制促纖維化因子TGF-β1和炎癥因子TNF-α的表達(dá)從而促進(jìn)糖尿病腎病大鼠腎功能的改善。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 超聲 微泡 靶向歸巢 CXCR-4基因 體外轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9;R445.1
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-14
• 中文摘要14-20
• 第一章 前言20-24
• 第二章 超聲聯(lián)合微泡協(xié)同脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CXCR-4 促進(jìn)BMSCs體外遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究24-50
• 2.1 引言24-25
• 2.2 材料與方法25-38
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-47
• 2.4 討論47-49
• 2.5 小結(jié)49-50
• 第三章 診斷超聲聯(lián)合微泡促進(jìn)BMSCs歸巢健康大鼠腎臟的實(shí)驗(yàn)研究50-66
• 3.1 引言50
• 3.2 材料與方法50-57
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-63
• 3.4 討論63-65
• 3.5 小結(jié)65-66
• 第四章 診斷超聲聯(lián)合微泡促進(jìn)BMSCs歸巢早期糖尿病腎病大鼠腎臟的實(shí)驗(yàn)研究66-83
• 4.1 引言66
• 4.2 材料與方法66-72
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果72-79
• 4.4 討論79-82
• 4.5 小結(jié)82-83
• 第五章 超聲聯(lián)合微泡促進(jìn)CXCR-4 轉(zhuǎn)染BMSCs歸巢并修復(fù)糖尿病腎病的實(shí)驗(yàn)研究83-98
• 5.1 引言83-84
• 5.2 材料與方法84-87
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果87-94
• 5.4 討論94-97
• 5.5 小結(jié)97-98
• 全文結(jié)論98-99
• 創(chuàng)新點(diǎn)和新穎性99
• 不足之處和研究展望99-100
• 參考文獻(xiàn)100-110
• 文獻(xiàn)綜述 SDF-1/CXCR4軸靶向促進(jìn)干細(xì)胞體內(nèi)外遷移能力的研究進(jìn)展110-132
• 參考文獻(xiàn)121-132
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果132-133
• 致謝133

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 施小鳳;朱彥;;間充質(zhì)干細(xì)胞移植后在體內(nèi)的歸巢[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年01期

2 洪冬玲;吳燕峰;許呂宏;方建培;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在致敏小鼠體內(nèi)的示蹤歸巢實(shí)驗(yàn)[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2011年06期

3 王洋;肖揚(yáng);;靜脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的歸巢路徑[J];中國(guó)組織工程研究;2012年01期

4 吳夢(mèng)瑤;陳彤;;可視性觀測(cè)造血干細(xì)胞歸巢的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2014年01期

5 姜福全,項(xiàng)鶯松;造血干細(xì)胞“歸巢”機(jī)制的探討[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊(cè));2000年05期

6 黎 陽;細(xì)胞黏附與造血干祖細(xì)胞的歸巢及動(dòng)員[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));2001年05期

7 曹星宇;肖踐明;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢進(jìn)展[J];臨床醫(yī)學(xué);2013年03期

8 韓克強(qiáng);李靖;梁平;鄭璐;黃小兵;;龜板促骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞肝臟歸巢的作用研究[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2013年03期

9 孫晉浩,劉執(zhí)玉,畢玉順;淋巴細(xì)胞選擇性歸巢的研究[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

10 楊啊晶,馮凱,陳虎;造血干細(xì)胞歸巢機(jī)制的研究進(jìn)展[J];白血病.淋巴瘤;2004年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 羅云;張勇;王導(dǎo)新;;造血干細(xì)胞歸巢機(jī)制研究進(jìn)展[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

2 張旭晗;汪健;王興兵;夏利軍;孫自敏;;CD26分子在不同來源造血干細(xì)胞中的表達(dá)和對(duì)干細(xì)胞歸巢的影響[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

3 張少衡;葛均波;錢菊英;趙嵐;黃浙勇;沈靂;姚瑞民;孫愛軍;鄒云增;;內(nèi)皮祖細(xì)胞移植促進(jìn)缺氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞介導(dǎo)的干細(xì)胞歸巢和增殖[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

4 陳龍;童嘉毅;馬根山;;超聲微泡預(yù)處理對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向缺血心肌歸巢的影響[A];中國(guó)微循環(huán)學(xué)會(huì)2014年全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議大會(huì)匯編[C];2014年

5 龔芳澤;陳琦;陳代雄;蘇蕊;方林;;人胎盤與臍動(dòng)、靜脈血造血干/祖細(xì)胞歸巢相關(guān)粘附分子表達(dá)的研究[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

6 曾文;朱楚洪;;BDNF通過促進(jìn)干細(xì)胞歸巢從而提高小直徑工程血管的通暢率[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

7 張少衡;葛均波;錢菊英;王齊兵;孫愛軍;史劍慧;賈建國(guó);王克強(qiáng);;經(jīng)冠狀動(dòng)脈內(nèi)移植自體骨髓干細(xì)胞能定向歸巢到梗死心臟并改善心臟局部功能[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)第八次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2004年

8 史明霞;李靜;廖聯(lián)明;陳斌;李炳宗;陳磊;趙春華;;胎兒骨髓源Flk1~+ CD31~- CD34~-干細(xì)胞歸巢機(jī)制的初步研究[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

9 王珊;李圓;王江波;張秀亞;孔祥如;;mdr1基因介導(dǎo)的骨髓保護(hù)在荷瘤小鼠化療中的歸巢和分布[A];中國(guó)西南地區(qū)第九屆小兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 白毅;淋巴細(xì)胞精準(zhǔn)歸巢機(jī)制被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2014年

2 特約通訊員 吳松;印江“磁場(chǎng)效應(yīng)”吸引“飛雁”歸巢[N];銅仁日?qǐng)?bào);2014年

3 本報(bào)記者 李根 本報(bào)通訊員 王召華 王玉磊;游子歸巢 回饋桑梓[N];德州日?qǐng)?bào);2014年

4 記者 許軍 楊曉安 特約記者 許萬里;“候鳥”歸巢[N];贛南日?qǐng)?bào);2014年

5 蔣家勝;人造血干細(xì)胞體內(nèi)歸巢研究獲突破[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

6 代瓊芬　陳錫偉;“歸巢創(chuàng)業(yè)”海天闊[N];楚雄日?qǐng)?bào)(漢);2013年

7 記者 趙瑩瑩;“小候鳥”期盼情感關(guān)愛“歸巢”[N];人民政協(xié)報(bào);2013年

8 記者 徐凱;誠心筑巢鳳歸來[N];四川日?qǐng)?bào);2013年

9 本報(bào)記者 姜巽林;打好“服務(wù)牌”,引來“歸巢鳳”[N];溫州日?qǐng)?bào);2012年

10 通訊員 楊子發(fā) 尹圣洲;千余外出打工農(nóng)民返鄉(xiāng)成為“歸巢鳳”[N];三峽日?qǐng)?bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 李露;微泡聯(lián)合超聲上調(diào)SDF-1/CXCR4促M(fèi)SCs歸巢修復(fù)缺血心肌的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 周欠欠;功能化金納米材料促進(jìn)樹突狀細(xì)胞歸巢并增強(qiáng)免疫應(yīng)答作用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

3 李銘;共聚焦激光顯微內(nèi)鏡在體干細(xì)胞歸巢示蹤及結(jié)腸粘膜菌群與生理狀態(tài)相關(guān)性研究[D];山東大學(xué);2016年

4 郭靜;干細(xì)胞修復(fù)心肌損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

5 王龔;超聲聯(lián)合微泡介導(dǎo)CXCR-4轉(zhuǎn)染BMSCs靶向歸巢并修復(fù)糖尿病腎病的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

6 蘇中淵;胚胎干細(xì)胞來源的間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢及胚胎干細(xì)胞表面分子的研究[D];浙江大學(xué);2010年

7 陸愛珍;吸入一氧化氮誘導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞歸巢防治支氣管肺發(fā)育不良的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 任志午;周圍神經(jīng)Wallerian變性對(duì)干細(xì)胞歸巢/遷移的動(dòng)員作用及趨化性再生的潛在分子機(jī)制[D];南開大學(xué);2012年

9 陳鑫;趨化因子SDF-1和MCP-1在心肌梗死后骨髓間質(zhì)干細(xì)胞歸巢中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳偉健;局部低劑量X線輻照對(duì)BMSCs向周圍神經(jīng)損傷部位歸巢影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2015年

2 頡瀅;工程化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠腸炎的治療研究[D];南京大學(xué);2016年

3 呂佳;缺血損傷時(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在種間歸巢能力的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

4 曹星宇;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)家兔心梗后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植心肌歸巢影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

5 馮磊;低劑量輻射對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢特性的影響[D];蘇州大學(xué);2008年

6 李金東;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞三種移植途徑在急性腎梗阻模型中的歸巢研究[D];中南大學(xué);2012年

7 紀(jì)騰;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及其向腫瘤局部歸巢機(jī)制的初步探索[D];華中科技大學(xué);2010年

8 馬紹華;同種異體EGFP-BMSCs在小鼠缺血肌袋存活和歸巢能力的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

9 劉穎;人臍血基質(zhì)細(xì)胞聯(lián)合移植促進(jìn)造血細(xì)胞歸巢植入及支持造血重建的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 賈曉蕾;不同劑量及頻次人骨毮間充質(zhì)干細(xì)胞在NOD小鼠體內(nèi)歸巢特性的研究[D];南京大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：636338