本文關(guān)鍵詞：預(yù)定位技術(shù)用于超聲分子成像的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 液態(tài)氟碳 預(yù)定位技術(shù) 超聲檢查 分子成像 相變

【摘要】：背景：超聲分子成像是醫(yī)學(xué)分子影像學(xué)的重要組成部分,運(yùn)用超聲造影的方式對(duì)組織器官或病灶進(jìn)行分子水平成像與探測(cè)。超聲分子成像不僅具有傳統(tǒng)超聲成像的優(yōu)勢(shì)(如,無電離輻射、非侵入性及高時(shí)間和高空間分辨率),還能從分子水平上反應(yīng)疾病發(fā)生及發(fā)展的過程。靶向造影劑是超聲分子成像的基礎(chǔ)與關(guān)鍵,目前基于靶向造影劑對(duì)腫瘤進(jìn)行靶向顯影與治療是超聲分子成像領(lǐng)域的一大研究熱點(diǎn)。理想的腫瘤靶向造影劑應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①循環(huán)穩(wěn)定性,②循環(huán)持久性,③能通過腫瘤新生血管內(nèi)皮間隙(380～780 nm)。基于此,液態(tài)氟碳納米粒孕育而生,該種造影劑既可以穿過腫瘤新生血管間隙,又可以在腫瘤組織內(nèi)通過觸發(fā)形成微泡,從而增強(qiáng)超聲顯像。目前,常用的靶向造影劑尋靶方式主要為直接靶向法,即攜帶配體的造影劑直接與靶區(qū)組織內(nèi)受體結(jié)合。該種方法簡(jiǎn)便易行,但往往難以獲得高效的靶向�？贵w分子通過Fc段與疏水基連接,通過Fab與抗原表面連接,然而有研究表明,在靶向造影劑的制備過程中抗體與造影劑表面連接的部位是隨機(jī)的,也就是說,既可以是Fc段,也可以是Fab段,這樣就導(dǎo)致部分造影劑喪失靶向能力。那么如何實(shí)現(xiàn)超聲造影劑與靶組織的高效結(jié)合,進(jìn)而提高超聲分子成像的敏感性是目前亟待解決的問題。預(yù)定位技術(shù)來源于核醫(yī)學(xué),被廣泛應(yīng)用于放射免疫顯像和放射免疫治療領(lǐng)域。在預(yù)定位技術(shù)中,將尋靶分子與效應(yīng)分子分開,先向體內(nèi)注射尋靶分子,當(dāng)尋靶分子在靶組織中濃度達(dá)最高峰時(shí)再注射效應(yīng)分子。研究表明,預(yù)定位技術(shù)能提高腫瘤/非腫瘤的顯像比值。目的：1.制備相變型鏈霉親和素化PLGA納米粒(PLGA-SA/PFPs)、相變型靶向納米粒(PLGA-Ab/PFPs)、普通相變型納米粒(PLGA/PFPs),研究體外熱致相變及聲致相變?cè)鰪?qiáng)超聲顯影的效果,探討不同PFP加入量、不同LIFU作用時(shí)間及作用強(qiáng)度對(duì)納米粒聲致相變的影響。2.探討預(yù)定位技術(shù)于體外提高超聲造影劑靶向腫瘤細(xì)胞的能力,為進(jìn)一步研究預(yù)定位技術(shù)于體內(nèi)提高超聲分子成像敏感性提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：1.采用單乳化法制備PLGA/PFPs,采用碳二亞胺法制備PLGA-SA/PFPs及PLGA-Ab/PFPs,用顯微鏡加熱板法進(jìn)行熱致相變,用LIFU進(jìn)行聲致相變,并使用DFY圖像分析系統(tǒng)對(duì)相變前后的超聲圖像進(jìn)行對(duì)比分析。采用聲致相變法對(duì)納米粒制備過程中不同PFP加入量、不同LIFU作用強(qiáng)度及作用時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。2.采用流式細(xì)胞儀、激光共聚焦顯微鏡及BCA蛋白質(zhì)濃度測(cè)定法檢測(cè)鏈霉親和素及抗體與納米粒的結(jié)合情況。3.采用兩步法預(yù)定位技術(shù)靶向SKOV3卵巢癌細(xì)胞,第一步加入生物素化CEA抗體,第二步加入PLGA-SA/PFPs。使用貼壁細(xì)胞法觀察靜止?fàn)顟B(tài)下納米粒與細(xì)胞的結(jié)合情況,使用平行板流動(dòng)腔法觀察流動(dòng)狀態(tài)下納米粒與細(xì)胞的結(jié)合情況。結(jié)果：1.制備的PLGA-SA/PFPs、PLGA-Ab/PFPs及PLGA/PFPs平均粒徑分別為(395.2±60.25) nm、(346.2±74.49) nm及(310.7±91.87)nm。顯微鏡下納米粒大小及分布均一,呈球形,表面可見數(shù)量不等的小孔。2.流式細(xì)胞儀測(cè)得納米粒與鏈霉親和素及抗體的結(jié)合效率分別為(95.02±0.62)%及(99.69±0.20)%。激光共聚焦顯微鏡下PE標(biāo)記鏈霉親和素化納米粒表面有紅色熒光,說明鏈霉親和素結(jié)合在納米粒表面,結(jié)合FITC標(biāo)記二抗的靶向納米粒(納米粒被DiI染成紅色熒光)表面呈黃色熒光,說明抗體結(jié)合在納米粒表面。BCA法測(cè)得每個(gè)納米粒上平均結(jié)合的鏈霉親和素及抗體分子個(gè)數(shù)為4648及1780。3.通過優(yōu)化PLGA/PFPs的制備參數(shù)及相變條件得到PFP加入量為400 1,聲功率為8.5W的LIFU作用3min可明顯增強(qiáng)超聲顯像。熱致相變可以觀察到明顯的氣泡產(chǎn)生,聲致相變可明顯增強(qiáng)超聲顯像。4.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不管納米粒是在靜止?fàn)顟B(tài)還是流動(dòng)狀態(tài),預(yù)定位靶向組細(xì)胞結(jié)合的納米粒數(shù)明顯多于其余各組。結(jié)論：1.制備的PLGA-SA/PFPs、PLGA-Ab/PFPs及PLGA/PFPs可發(fā)生熱致相變及LIFU致相變,且鏈霉親和素及抗體與納米粒均具有較高的結(jié)合效率,可用于下一步的預(yù)定位靶向?qū)嶒?yàn)。2.預(yù)定位技術(shù)能提高超聲造影劑靶向腫瘤細(xì)胞的能力,可提高超聲分子成像的敏感性,在腫瘤的靶向顯影與治療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：液態(tài)氟碳 預(yù)定位技術(shù) 超聲檢查 分子成像 相變
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R445.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一章 相變型納米粒的制備及體外特性研究17-28
• 1.1 引言17
• 1.2 材料17-18
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 1.4 結(jié)果20-26
• 1.5 討論26-27
• 1.6 小結(jié)27-28
• 第二章 預(yù)定位技術(shù)用于超聲分子成像的體外實(shí)驗(yàn)28-37
• 2.1 引言28
• 2.2 材料28-29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 2.4 結(jié)果30-34
• 2.5 討論34-36
• 2.6 小結(jié)36-37
• 全文總結(jié)37-38
• 本研究的局限性38
• 今后的研究方向38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 文獻(xiàn)綜述43-49
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 致謝49-50
• 碩士期間發(fā)表的論文50

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1 錢夢(mèng)，

本文編號(hào)：615620