表面聲波傳感器的檢測(cè)原理是基于表面聲波的傳播,并根據(jù)平臺(tái)表面的質(zhì)量和粘彈性的改變來實(shí)現(xiàn)對(duì)生物大分子的微量定量檢測(cè)。表面聲波傳感器因其具有高工作頻率、高靈敏度,以及免標(biāo)記、易操作和實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),正日益廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域。構(gòu)建信號(hào)放大系統(tǒng)是進(jìn)一步提高表面聲波傳感器檢測(cè)靈敏度的重要途徑。由于表面聲波穿過芯片表面時(shí)可檢測(cè)到芯片表面的動(dòng)態(tài)變化,信號(hào)放大系統(tǒng)可顯著改善表面聲波平臺(tái)的檢測(cè)效果。本論文分別構(gòu)建了金納米顆粒信號(hào)放大體系與辣根過氧化物酶（HRP）催化聚多巴胺的信號(hào)放大體系,探討了其放大原理及檢測(cè)條件,并將其用于體液中外泌體的檢測(cè)。外泌體是一種細(xì)胞外囊泡（EVs）亞型,包含有RNA,DNA,脂質(zhì)和蛋白質(zhì)等成分。近年來,外泌體及其包含物的生物學(xué)效應(yīng)及臨床應(yīng)用研究正引起人們的高度關(guān)注,外泌體也逐步被認(rèn)可為新一代的腫瘤分子標(biāo)志物。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的高靈敏定量檢測(cè)并使檢測(cè)方法適用于臨床,我們?cè)诒砻媛暡ㄆ脚_(tái)上構(gòu)建了一個(gè)雙抗體夾心體系,在實(shí)現(xiàn)高靈敏檢測(cè)的同時(shí)也對(duì)適用于該平臺(tái)的信號(hào)放大體系進(jìn)行了系統(tǒng)的探討,課題主要由以下兩個(gè)部分組成:第一部分:基于金納米顆粒信號(hào)放大原理的表面聲波傳感器定量檢測(cè)外泌體... 

【文章來源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SAW芯片的實(shí)物圖片

外泌體的表征結(jié)果

湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文12的外泌體懸浮液。從圖1-4中可以看出，CD63和EpCAM在MCF-7和PANC-1細(xì)胞系以及肺癌患者臨床樣本所提取的外泌體中均有高度表達(dá)，證明了我們傳感平臺(tái)的廣泛適用性和臨床應(yīng)用前景。圖1-4MCF-7和PANC-1細(xì)胞系以及肺癌患者臨床樣本所提取的外泌體中CD63和EpCAM的表達(dá)結(jié)果1.4.2可行性研究為了達(dá)到使用表面聲波傳感器超靈敏檢測(cè)外泌體的，我們首先將外泌體結(jié)合到固定有抗CD63抗體的SAW芯片上，然后將AuNPs偶聯(lián)到芯片上以進(jìn)行信號(hào)放大。在這項(xiàng)工作中，場(chǎng)效應(yīng)掃描電鏡（SEM）被用來確認(rèn)外泌體的捕獲以及SAW芯片上金納米顆粒的附著。如圖1-5A所示，可以明顯看到芯片表面的通道上存在著具有特征性典型雙層膜結(jié)構(gòu)的外泌體。與此同時(shí)，在對(duì)照組中，由于我們沒有滴加含有外泌體的懸浮液，使得芯片上沒有外泌體顆粒的存在（內(nèi)圖）。這表明外泌體已經(jīng)通過膜表面的CD63蛋白與芯片上固定的抗CD63抗體之間的結(jié)合而被錨定在SAW芯片上。在圖1-5B中，將生物素偶聯(lián)的抗體和鏈霉親和素修飾的AuNP滴加到芯片上后，可以清楚地看到大小均一的金納米顆粒附著在芯片表面。而作為對(duì)照，當(dāng)在沒有外泌體存在的情況下，僅在芯片上滴加抗體和AuNPs時(shí)，芯片上的AuNPs則幾乎不可見。為了驗(yàn)證圖1-5B中所示的這些小顆粒確實(shí)是AuNPs，我們又補(bǔ)充進(jìn)行了EDS實(shí)驗(yàn)，EDS表征結(jié)果如圖1-6所示。EDS結(jié)果表明，芯片表面上存在大量的金元素，這表明圖1-5B中所示的這些大小均一的小顆粒確實(shí)是AuNPs，其他物質(zhì)（例如碳，氧，硅等）則可能來自與基底材料。與此同時(shí)，由于芯片表面的外泌體沒

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Surface acoustic wave devices for sensor applications[J]. 劉博,陳曉,蔡華林,穆罕默德·阿里·穆罕默德,田祥光,陶璐琪,楊軼,任天令.  Journal of Semiconductors. 2016(02)



本文編號(hào)：3220786