131 I標(biāo)記VEGF siRNA抑制人肝細(xì)胞癌生長的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 21:52
目的：研究131I標(biāo)記VEGFsiRNA在BALB/c裸鼠體內(nèi)的血液動力學(xué)、生物分布以及對BALB/c裸鼠皮下荷人肝細(xì)胞癌生長的抑制作用，以建立體內(nèi)肝細(xì)胞癌核素顯像、基因和放射性核素靶向協(xié)同治療體系。方法：以人肝細(xì)胞癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞懸液建立BALB/c裸鼠皮下肝細(xì)胞癌模型。設(shè)計(jì)人血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）小干擾RNA，利用BH試劑間接Bolton-Hunter法使VEGFsiRNA標(biāo)記上131I，以氧化鐵超順磁性納米顆粒（SPIO）SilenceMag包裹131I-VEGFsiRNA。然后進(jìn)行：（1）血液動力學(xué)研究：6只67w齡、瘤體10.0mm×10.0mm左右的皮下荷HepG2肝細(xì)胞癌BALB/c裸鼠（簡稱荷瘤裸鼠）隨機(jī)分成兩組（每組3只），一組腫瘤部位覆以小磁體（0.8T）作為外加磁場組，另一組不加外加磁場作為非外加磁場組。以尾靜脈注射131I-VEGFsiRNA-SilenceMag（0.2ml，100uCi，1.5nmolsiRNA）后，分別在第0.5h、1....
【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：58 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
HepG2人肝癌細(xì)胞圖：A、B兩圖分別為100×和200×圖，可見HepG2人肝癌細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞輪廓清晰，貼壁生長，指數(shù)生長期成簇聚集
圖 2 BA L B / c 裸鼠 臀部 皮 下荷 He p G2 肝細(xì) 胞癌 實(shí) 體圖 ， 圖 中箭 頭所 指 為腫 瘤 。213 1 I標(biāo)記 2. 1 13 1 I標(biāo)記 B H試劑 情 況 N a13 1 I 的比 活 度很 重 要， 50 μ l 體積 內(nèi)放 射 性 活度 大 于 1. 0 mC i 時(shí)13 1 I 標(biāo)記 B H 試劑 效 率較 好， 反 應(yīng)體 積 過 大會 影 響標(biāo) 記率 ， 本 實(shí) 驗(yàn)中 這一 步 反應(yīng) 體 積 均能 夠 保證 小 于 20 0 μl 。反 應(yīng)前 N a13 1 I 液比 活 度為 1 . 0~ 2. 0 mC i/ 5 0 μl 時(shí)容 易 操 作 且標(biāo) 記 率 也 較穩(wěn) 定 。 2. 2 13 1 I- B H偶聯(lián) VE GF s iR NA 的情 況 13 1 I- BH 與 VE GF si R N A 偶 聯(lián)反 應(yīng) 體 積 過高 會 降低 偶聯(lián) 率 ，所 以D M F 溶 解氮 氣 吹 干 的1 3 1 I - BH 晶體 是 本步 驟 中 偶 聯(lián)體 積 的關(guān) 鍵 ， 過少 的 D M F 使13 1 I - BH 晶體 溶解 不 全 ， 20 μl DM F 溶解 兩次 能 將 大部 分 13 1 I - BH 晶體 溶 解 ，偶 聯(lián) 率 見表 2 。 表 11 31 I 標(biāo)記 率、 偶 聯(lián)率 、 利 用率 以 及 s iR N A 回 收 率等 情 況。 N a13 1 I 液 比活 度 （m C i/ 5 0 μl ）13 1 I- BH 標(biāo) 記率 （ % ）13 1 I 與V E GF si R N A偶 聯(lián)率 （% ） 13 1 I 利用 率（ % ）
圖 3 A 為1 31 I- VE GF s iR N A -S i l e n c e M a g 產(chǎn)物 點(diǎn) 樣于 薄層 層 析硅 膠 板， 以 丙酮 和 生理 鹽 水（ 1: 1 ）為 展開 劑， 層析 后放 射 性 層 析 掃描 儀的 掃 描圖 ；B 為13 1I- VE GF si R N A -S i le n c e M a g 產(chǎn) 物 點(diǎn) 樣于 新 華 一 號 濾紙， 以甲 醇 和 5% 醋 酸 銨（ 1 : 1 ）為 展 開劑 ， 層析 后放 射 性層 析 掃描 儀 的 掃描 圖。 313 1 I -V E GF si R N A- S il e nc e Ma g 在B AL B / c裸鼠 體 內(nèi) 血液 動 力 學(xué) 外加 磁場 組 與非 外 加 磁場 組 給 藥 后血 液 cp m 值均 隨 時(shí)間 推 移 逐漸 降 低 ， 兩組 血 液 半衰 期 分別 約為 3 .2 h和 4 .4 h ，見 圖 4 。
本文編號：2903952
【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：58 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
HepG2人肝癌細(xì)胞圖：A、B兩圖分別為100×和200×圖，可見HepG2人肝癌細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞輪廓清晰，貼壁生長，指數(shù)生長期成簇聚集
圖 2 BA L B / c 裸鼠 臀部 皮 下荷 He p G2 肝細(xì) 胞癌 實(shí) 體圖 ， 圖 中箭 頭所 指 為腫 瘤 。213 1 I標(biāo)記 2. 1 13 1 I標(biāo)記 B H試劑 情 況 N a13 1 I 的比 活 度很 重 要， 50 μ l 體積 內(nèi)放 射 性 活度 大 于 1. 0 mC i 時(shí)13 1 I 標(biāo)記 B H 試劑 效 率較 好， 反 應(yīng)體 積 過 大會 影 響標(biāo) 記率 ， 本 實(shí) 驗(yàn)中 這一 步 反應(yīng) 體 積 均能 夠 保證 小 于 20 0 μl 。反 應(yīng)前 N a13 1 I 液比 活 度為 1 . 0~ 2. 0 mC i/ 5 0 μl 時(shí)容 易 操 作 且標(biāo) 記 率 也 較穩(wěn) 定 。 2. 2 13 1 I- B H偶聯(lián) VE GF s iR NA 的情 況 13 1 I- BH 與 VE GF si R N A 偶 聯(lián)反 應(yīng) 體 積 過高 會 降低 偶聯(lián) 率 ，所 以D M F 溶 解氮 氣 吹 干 的1 3 1 I - BH 晶體 是 本步 驟 中 偶 聯(lián)體 積 的關(guān) 鍵 ， 過少 的 D M F 使13 1 I - BH 晶體 溶解 不 全 ， 20 μl DM F 溶解 兩次 能 將 大部 分 13 1 I - BH 晶體 溶 解 ，偶 聯(lián) 率 見表 2 。 表 11 31 I 標(biāo)記 率、 偶 聯(lián)率 、 利 用率 以 及 s iR N A 回 收 率等 情 況。 N a13 1 I 液 比活 度 （m C i/ 5 0 μl ）13 1 I- BH 標(biāo) 記率 （ % ）13 1 I 與V E GF si R N A偶 聯(lián)率 （% ） 13 1 I 利用 率（ % ）
圖 3 A 為1 31 I- VE GF s iR N A -S i l e n c e M a g 產(chǎn)物 點(diǎn) 樣于 薄層 層 析硅 膠 板， 以 丙酮 和 生理 鹽 水（ 1: 1 ）為 展開 劑， 層析 后放 射 性 層 析 掃描 儀的 掃 描圖 ；B 為13 1I- VE GF si R N A -S i le n c e M a g 產(chǎn) 物 點(diǎn) 樣于 新 華 一 號 濾紙， 以甲 醇 和 5% 醋 酸 銨（ 1 : 1 ）為 展 開劑 ， 層析 后放 射 性層 析 掃描 儀 的 掃描 圖。 313 1 I -V E GF si R N A- S il e nc e Ma g 在B AL B / c裸鼠 體 內(nèi) 血液 動 力 學(xué) 外加 磁場 組 與非 外 加 磁場 組 給 藥 后血 液 cp m 值均 隨 時(shí)間 推 移 逐漸 降 低 ， 兩組 血 液 半衰 期 分別 約為 3 .2 h和 4 .4 h ，見 圖 4 。
本文編號：2903952
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