第一部分雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑的制備與體外尋靶效果實(shí)驗(yàn)研究 目的：制備攜載兩種抗體的雙靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑，并檢測(cè)其基本理化性質(zhì)，并觀察其對(duì)體外缺氧細(xì)胞的尋靶效果。 方法：將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）、二苯基磷酰基疊氮化物（DPPA）、生物素化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE-PEG2000-biotin）及甘油、PBS溶液等混合均勻后，分別先后與鏈霉親和素（streptavidin）和P選擇素單克隆抗體及ICAM-1單克隆抗體孵育制得雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑；通過光學(xué)顯微鏡及電子顯微鏡分別觀察并測(cè)定微泡形態(tài)、均一性、分散度以及濃度，利用Malvern激光粒徑檢測(cè)儀及表面電位檢測(cè)儀分別檢測(cè)微泡粒徑與分布情況、表面電位等物理特性，利用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定抗體接合效率；通過培養(yǎng)人臍靜脈血細(xì)胞，建立急性缺血模型，評(píng)價(jià)雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑的體外尋靶能力。 結(jié)果：雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑大小較為均一，平均濃度為（3.79±0.4）×10~9/ml，平均粒徑為（1668±260.2）nm、平均表面電位為－1.24mV；對(duì)缺血內(nèi)皮細(xì)胞的粘附作用顯著。流式細(xì)胞儀檢測(cè)其抗體結(jié)合效率為81.47%。 結(jié)論：雙靶向超聲微泡造影劑粒徑均一，分散度良好，帶負(fù)電荷，其物理性質(zhì)適應(yīng)毛細(xì)血管內(nèi)流動(dòng)和邊集，為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)時(shí)缺血炎癥區(qū)域顯影創(chuàng)造條件。 第二部分雙靶向超聲微泡造影劑評(píng)價(jià)缺血再灌注心肌的實(shí)驗(yàn)研究 目的：制備攜載P選擇素單抗及ICAM-1單抗的雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑，活體小鼠心肌缺血再灌注模型觀察并評(píng)價(jià)其顯像效果。 方法：采用生物素-親和素法將微泡與生物素化抗體連接，制得攜載P選擇素單抗及ICAM-1單抗的雙靶向脂質(zhì)超聲微泡造影劑，免疫熒光染色分別標(biāo)記兩種抗體，激光共聚焦顯微鏡觀察造影劑與抗體的連接情況，建立小鼠心肌缺血再灌注模型分別檢測(cè)各型造影劑對(duì)缺血炎性組織的顯像情況，Sonomath系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。 結(jié)果：免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示單靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑表面可見明亮的紅色環(huán)狀熒光，雙靶向超聲微泡造影劑因同時(shí)包繞兩種熒光物質(zhì)顯示黃色熒光，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其抗體結(jié)合效率分別為98.65%和81.47%，24只小鼠中有22只建模成功，示部分左室前壁心肌缺血。MCE顯像后記錄的圖像經(jīng)Sonomath超聲影像分析儀顯示雙靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑有更高的增強(qiáng)顯像效果（P0.01）和延遲顯像效果（P0.05）。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中，利用生物素-親和素法所制備的雙靶向脂質(zhì)微泡超聲造影劑不僅有良好的顯像特性，同時(shí)對(duì)心肌缺血炎性區(qū)域有良好的靶向粘附性能，相比單連接P選擇素的單靶向脂質(zhì)微泡有更明顯的靶區(qū)滯留效應(yīng)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R445.1
【部分圖文】：

圖 1-1 激光共聚焦顯微鏡下觀察：微泡大小較均勻，分散度良好-1 The dual targeted microbubbles have a Size in uniform and in Good dispobserved by Laser confocal microscopy1 10 100 1000 10Size (d.nm)Statistics Graph (1 measurements)-2 馬爾文粒徑檢測(cè)儀結(jié)果：微泡平均粒徑為（1668±260.2) nm，粒徑分布The microvesicles average particle size was (1668 + / - 260.2 nm) with uniform

-100 0 100 Zeta Potential (mV)Record 111: BIOTINATED 02 ZETA 1 1-3 微泡表面電位檢測(cè)結(jié)果：微泡平均表面電位為－1.24e microbubble surface potential was －1.24 mV calculatedMastersizer2000

圖 1-5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)合 P 選擇素抗體的微泡造影劑結(jié)合效率為 98.65%Fig.1-5 the antibody combined efficiency of microbubble coated with P-selectin was 98.65%calculated by flow cytometry
【參考文獻(xiàn)】

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1 肖雁冰,王智彪,李發(fā)琪;新型超聲微泡對(duì)比劑——Sono Vue的應(yīng)用進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊(cè));2005年02期

2 劉學(xué)兵;王志剛;許川山;;載藥脂質(zhì)超聲微泡造影劑的制備及應(yīng)用研究[J];中國(guó)介入影像與治療學(xué);2008年02期

3 李新立;周艷麗;;缺血性心肌病[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2012年07期

4 王志剛;超聲微泡造影劑在疾病診斷與治療中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2005年08期

5 王志剛;;超聲分子影像學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2009年06期

6 李美瑜;肖云彬;賓建國(guó);吳爵非;楊莉;胡廣全;劉瑩;黃瑞珠;賓建平;;體外評(píng)價(jià)攜Sialyl Lewis~x和抗ICAM-1單抗雙配體超聲微泡的靶向黏附性能[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2010年07期

本文編號(hào)：2892981