【摘要】： 目的: 探討在睪丸扭轉(zhuǎn)術(shù)中應(yīng)用彩色多普勒(CDU Color Doppler Ultrasonography)和超聲造影(CEUS Contrast-Enhanced Ultrasonography)判斷缺血睪丸活力的價值。 方法: 1.動物模型制作 選取56只體重約2.0-2.5kg健康雄性新西蘭大白兔,隨機分7組,進行動物實驗:(1)正常對照組(n=8),(2)假手術(shù)組(n=8),(3)0.5h組(n=8),(4)1.5h組(n=8),(5)3h組(n=8),(6)6h組(n=8),(7)12h組(n=8)。采用水合氯醛灌腸和戊巴比妥靜注聯(lián)合麻醉,正常對照組不作任何手術(shù)處理;假手術(shù)組無菌條件下在距左側(cè)陰囊上方1cm處,將皮膚切開,鈍性分離并游離精索,暴露精索10min后,切口關(guān)閉縫合;0.5h, 1.5h,3h ,6h ,和12h組分別游離精索后,用動脈夾將精索完全夾閉,彩色多普勒顯示左側(cè)睪丸無血流信號,然后將切口縫合,夾閉精索連同動脈夾埋置皮下,分別計時0.5h, 1.5h,3h ,6h ,和12h,制成5組左側(cè)睪丸缺血(扭轉(zhuǎn))模型。CDU及CEUS檢查時,戊巴比妥耳緣靜脈注射麻醉,彩超檢測睪丸內(nèi)無血流信號,證實缺血模型制作成功,剪開縫線,將動脈夾移除,溫生理鹽水紗布濕敷10min后,依次行CDU、CEUS檢查及睪丸出血試驗(TBT Testicular Bleeding Test)。 2.CDU、CEUS 使用GE Vivid7彩超儀,9L變頻線陣淺表探頭,分別觀察并記錄雙側(cè)睪丸的形態(tài),實質(zhì)回聲,取睪丸最大縱切面,測量睪丸的上下徑(A)、前后徑(B)及左右徑(C),計算睪丸體積V=A*B*C*π/4*0.9;觀察并記錄雙側(cè)睪丸實質(zhì)及包膜血流信號(連續(xù)觀察取睪丸血流顯示最豐富的一幅記錄保存),分別計算左右睪丸彩色血流顯示面積百分比r(r=血流顯示面積/睪丸最大縱切面面積),并計算左右睪丸彩色血流顯示面積百分率之比R(R=r左/r右)。 儀器調(diào)至小血管造影模式,造影參數(shù)頻率3.2/6.4MHz,MI 0.10, TIs 0.0。探頭垂直固定于左側(cè)睪丸的最大縱切面,經(jīng)兔耳緣靜脈快速團注SonoVue,劑量0.2ml/kg,緊接1ml生理鹽水快速注射。團注造影劑同時啟動超聲儀器內(nèi)置計時器,觀察并存儲睪丸造影灌注圖像。灌注結(jié)果按照完全均勻灌注、完全不均勻灌注、灌注缺損和無灌注進行分類:完全均勻灌注,睪丸實質(zhì)內(nèi)造影劑彌漫性充填,回聲分布均勻;完全不均勻灌注,睪丸實質(zhì)內(nèi)造影劑彌漫性充填,回聲分布不均勻;灌注缺損,睪丸實質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)局部沒有灌注的區(qū)域;無灌注,睪丸實質(zhì)內(nèi)完全沒有造影劑的灌注。選取整個睪丸縱切面為感興趣區(qū),繪制時間-強度曲線(TICs Time-Intensity Curves),對灌注參數(shù)到達時間(AT Ariving Time)、達峰時間(TTP Time to Peak intensity)和峰值增強值("縋I Peak Intensity)進行統(tǒng)計學(xué)分析。 3睪丸出血試驗和睪丸病理形態(tài)學(xué)及超微細胞結(jié)構(gòu)觀察 各實驗組睪丸造影后,陰囊皮膚縱行切開,打開鞘膜腔,在睪丸白膜作長約5mm,深達睪丸髓質(zhì)楔形切口,觀察創(chuàng)口10分鐘內(nèi)是否有充分出血。按照Arda出血試驗分級標準,將觀察結(jié)果分為3級:Ⅰ級,充分出血,即在切取活體標本時創(chuàng)口出血或滲血;Ⅱ級,不充分出血,即睪丸被切開后并無立即出血,但在10分鐘以內(nèi)開始出血;Ⅲ級,不出血,即在10分鐘之內(nèi)無出血或滲血。 觀察并記錄缺血睪丸溫鹽水濕敷前后的大體外觀顏色變化;取各組左側(cè)睪丸組織常規(guī)制作HE染色光鏡及透視電鏡標本,倒置顯微鏡和透視電鏡對睪丸組織病理及細胞超微結(jié)構(gòu)進行觀察。 4.數(shù)據(jù)收集及統(tǒng)計學(xué)分析 實驗保存的所有灰階圖像及超聲造影圖像均由兩名高年資超聲醫(yī)師評價,包括二維灰階回聲的均勻性以及造影圖像的分類,其中造影結(jié)果評價后分為4類:完全均勻灌注,完全不均勻灌注,灌注缺損及無灌注。左右睪丸血流顯示面積及睪丸切面面積均采用Image-Pro Plus 5.0專業(yè)計算機圖像處理軟件測量,重復(fù)測量3次取平均值。采用SAS V 8.1統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析,根據(jù)采集數(shù)據(jù)采用配對資料兩樣本均數(shù)比較的t檢驗,完全隨機設(shè)計資料的非參數(shù)統(tǒng)計(Kruskal-Wallis H),完全隨機設(shè)計資料的方差分析及雙向有序資料的x2檢驗,計量數(shù)據(jù)結(jié)果用算術(shù)均數(shù)±標準差( x±s)表示。 結(jié)果: 1.動物模型制作 5組兔睪丸缺血模型通過動脈夾將左側(cè)精索完全夾閉,彩超檢測睪丸內(nèi)無血流供應(yīng),動脈夾移除前彩色多普勒再次檢測睪丸內(nèi)均無血流信號,證實模型制作成功,本實驗睪丸缺血模型制作成功率100%(40/40)。 2. CDU、CEUS 正常組左側(cè)睪丸體積大小為0.62±0.102(mm3),假手術(shù)組左側(cè)睪丸體積大小為0.63±0.069(mm3),組內(nèi)比較兩組均無顯著差異(P=0.251和0.3810.05),各缺血組左側(cè)睪丸體積較右側(cè)明顯增大, 0.5h、1.5h、3h、6h和12h組左側(cè)睪丸體積大小分別為1.09±0.184(mm3)、1.23±0.099(mm3)、1.28±0.280(mm3)、1.12±0.092(mm3)和1.14±0.141(mm3),組內(nèi)比較差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(各組P0.0001),正常組、假手術(shù)組、0.5h組和1.5h組睪丸呈均勻細小等回聲,3h組、6h組和12h組睪丸回聲不均勻,局部出現(xiàn)低回聲,隨缺血時間延長,低回聲范圍逐漸擴大;正常組及對照組左右睪丸血流顯示面積百分率比值R比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,R值分別為1.00±0.185、1.04±0.196,0.5h、1.5h、3h、6h和12h組R值分別為1.57±0.193、1.67±0.175、0.74±0.267、0.54±0.100和0,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=110.22,P0.0001,SNK法兩兩比較)。實驗組0.5h及1.5h組各8例均為完全均勻灌注,與正常對照組及假手術(shù)組灌注模式相同,3h組8例均為完全不均勻灌注,6h組7例為灌注缺損,1例無灌注,12h組8例全部為無灌注,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義( x2=43.0487,P0.0001)。TICs分析結(jié)果:正常對照組、假手術(shù)組、0.5h、1.5h、3h和6h組AT值分別為4.1±0.83(s)、4.5±0.76(s)、6.3±1.04(s)、8.3±2.12(s)、12.1±3.91(s)和20.7±6.32(s)( x 2=50.0846,P0.0001);PPT分別為9.5±0.76(s)、10.4±1.41(s)、14.3±2.76(s)、22.4±3.96(s)、36.8±4.40(s)、50.0±3.11(s) ( x 2=52.7090,P0.0001);"縋I分別為4.1±0.83(dB)、7.5±1.27(dB)、7.5±1.26(dB),4.9±0.90(dB)、3.9±0.65(dB)和1.81±0.88(dB)(F=83.73,P 0.0001),12h組8例均為無灌注,"縋I降為0(dB)。 3.睪丸出血試驗、大體及光鏡病理和超微細胞結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)觀察 按照Arda等三級評分標準對睪丸出血試驗結(jié)果進行分級:正常對照組、假手術(shù)組、0.5h組、1.5h組各8例均為Ⅰ級,3h組8例均為Ⅱ級,6h組4例為Ⅱ級,4例為Ⅲ級,12h組2例為Ⅱ級,6例為Ⅲ級( x2 =42.6357,P0.0001)。 正常對照組和假手術(shù)組睪丸均呈卵圓形,色澤粉紅,睪丸包膜表面及引帶可見豐富小血管。切開白膜達深部髓質(zhì),可見粉紅的活動性出血。各缺血組睪丸體積增大,失去正常形態(tài),呈彎鉤狀或球形,顏色發(fā)黑。0.5h組和1.5h組溫敷后顏色轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色;3h組和6h組溫敷后顏色逐漸由暗黑色轉(zhuǎn)為暗紅色;12h組睪丸外觀顏色發(fā)黑,溫敷后顏色未變化。 正常對照組、假手術(shù)組、0.5h和1.5h組光鏡睪丸生精小管上皮及間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)變化輕微甚至無改變,間質(zhì)血管輕度充血,電鏡觀察滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張,線粒體輕度水腫或無變化;3h組光鏡下部分小管內(nèi)皮細胞脫落,間質(zhì)明顯充血,部分紅細胞溢出小血管,電鏡觀察細胞核染色質(zhì)呈顆粒狀聚集,并可見染色質(zhì)邊集,間質(zhì)小血管內(nèi)可見血小板粘附、聚集;6h組光鏡下小管上皮大部脫落,部分與基膜完全分離,管腔閉塞,部分精曲小管管壁破裂,精子及脫落上皮細胞溢出管腔,間質(zhì)內(nèi)可見片狀出血,電鏡觀察滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體高度水腫擴張,部分細胞器溶解,細胞核固縮,部分核膜破裂;12h組鏡下組織大片狀出血,僅見生精小管輪廓,電鏡下細胞核碎裂,細胞器溶解消失。 主要結(jié)論: CDU和CEUS對于缺血睪丸再灌注后血流檢測敏感,可用于睪丸扭轉(zhuǎn)術(shù)中判斷睪丸血供、預(yù)測睪丸活力,對于外科手術(shù)決定保留或切除扭轉(zhuǎn)睪丸具有重要指導(dǎo)意義和實用價值。
【圖文】：

TICs各參數(shù)測量AT、PPT、"縋I
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R699.8;R445.1

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本文編號：2681525