發(fā)布時(shí)間：2020-04-03 13:15

【摘要】：目的：探索簡(jiǎn)單、高效、安全、無細(xì)胞外鐵產(chǎn)生的超低微濃度菲立磁-硫酸魚精蛋白復(fù)合物標(biāo)記大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法；將標(biāo)記干細(xì)胞移植入大鼠脊髓損傷模型，分別使用3.0T FSE T2WI、3DFIESTA、ESWAN序列于移植后14天檢測(cè)移植標(biāo)記干細(xì)胞在活體內(nèi)的MR信號(hào)及圖像信噪比，探索出一種最佳的3.0T MR活體示蹤序列。方法：（1）貼壁法培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。待3代細(xì)胞匯合至90%時(shí)，更換無血清培養(yǎng)液，根據(jù)菲立磁和硫酸魚精蛋白濃度的不同分為四組：一組[（7.50:1.00）μg/ml]；二組[（10.00:1.20）μg/ml]；三組[（15.00:1.80）μl/ml]；四組為對(duì)照組。加入培養(yǎng)液混勻，置于5%CO2孵育箱中孵育15分鐘，補(bǔ)加血清后繼續(xù)孵育至次日。標(biāo)記結(jié)束后普魯士藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞標(biāo)記率、透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)外鐵分布、臺(tái)盼蘭染色檢測(cè)細(xì)胞活力、并行3.0T MR檢測(cè)標(biāo)記細(xì)胞MR信號(hào)。（2）選取標(biāo)記效果最佳的菲立磁和硫酸魚精蛋白濃度[（10.00:1.20）μg/ml]體外標(biāo)記3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，制備大鼠橫斷脊髓損傷模型，隨機(jī)法分為兩組，一組移植未標(biāo)記干細(xì)胞組二組移植標(biāo)記干細(xì)胞組，每組6只大鼠。于移植后14天行3.0T MR FSET2WI、3DFIESTA、ESWAN檢測(cè)，并對(duì)移植干細(xì)胞在3種MR序列的磁共振信號(hào)變化率、圖像信噪比進(jìn)行單因素方差分析。并處死一只大鼠行HE和普魯士藍(lán)染色與磁共振信號(hào)分布進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果：（1）原代細(xì)胞培養(yǎng)5-7天便可見星形或長(zhǎng)梭形貼壁細(xì)胞匯合至80-90%，連續(xù)傳代培養(yǎng)8-12天至三代細(xì)胞，便可見形態(tài)均一的長(zhǎng)梭形細(xì)胞。（2）菲立磁與魚精蛋白[（10.00:1.20）μg/ml]可高效標(biāo)記大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，普魯士藍(lán)染色幾乎所有細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均可見藍(lán)染顆粒，細(xì)胞外未見藍(lán)染顆粒，透射電子顯微鏡觀察見胞漿內(nèi)大量黑色針刺狀高密度電子致密物，四組細(xì)胞間細(xì)胞活力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，體外磁共振可以檢測(cè)到104個(gè)標(biāo)記細(xì)胞。（3）移植后第14天標(biāo)記干細(xì)胞在三種序列圖像上的標(biāo)記BMSCs信號(hào)降低依次分別為：（43.40±3.20）%、（77.80±3.59）%、（79.60±3.58）%，總體間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，F(xiàn)SET2WI與3DFIESTA、ESWAN序列間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，3DFIESTA、 ESWAN序列間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， P＞0.05；圖像信噪比依次為：20.95±1.91、45.70±9.40、44.50±8.29，總體間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05FSET2WI與3DFIESTA、ESWAN序列間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05，3DFIESTA、ESWAN序列間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。對(duì)照組脊髓內(nèi)未見明顯低信號(hào)影。脊髓普魯士藍(lán)染色顯示損傷區(qū)附近大量藍(lán)染顆粒。對(duì)照組脊髓普魯士藍(lán)染色未見明顯藍(lán)染顆粒。結(jié)論：（1）使用超低微濃度菲立磁和魚精蛋白（10.00：1.20μg/ml）可高效標(biāo)記大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；（2）體外磁共振可檢測(cè)到104個(gè)標(biāo)記細(xì)胞；（3）3.0T MRFSET2WI、3DFIESTA、ESWAN序列均可以檢測(cè)到SPIO標(biāo)記BMSCs在大鼠脊髓內(nèi)的MR信號(hào)，其中以3DFIESTA、ESWAN序列效果最佳。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R445.2

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本文編號(hào)：2613417