發(fā)布時(shí)間：2019-11-12 06:25

【摘要】：目的探討anti-EGFR-PEG-SPIO納米分子探針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)高表達(dá)肺腺癌細(xì)胞的靶向性及利用MRI對(duì)其監(jiān)測(cè)的可行性。方法制備anti-EGFR靶向納米分子探針(anti-EGFR-PEG-SPIO)及非靶向納米分子探針(PEG-SPIO),行電鏡(TEM)觀察,并測(cè)量水合粒徑及弛豫率等表征。之后將不同F(xiàn)e濃度(0、10、20、40、60、80μg/ml)的anti-EGFR-PEG-SPIO和PEG-SPIO分別與H460細(xì)胞孵育2 h后,進(jìn)行體外MR成像,觀察其T2WI信號(hào)強(qiáng)度及信號(hào)強(qiáng)度變化率。行H460細(xì)胞普魯士藍(lán)染色和電鏡觀察細(xì)胞攝取Fe情況。結(jié)果不同F(xiàn)e濃度anti-EGFR-PEG-SPIO及PEG-SPIO探針?lè)謩e與H460細(xì)胞孵育2 h后,前者顯示H460細(xì)胞的信號(hào)強(qiáng)度隨Fe濃度的升高而明顯減低,Fe濃度為60μg/ml時(shí),相對(duì)于0、10、20、40、80μg/ml,信號(hào)強(qiáng)度變化率約為-58.2%、-82.7%、-94.4%和-98.3%;而后者顯示H460細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度減低相對(duì)不明顯。普魯士藍(lán)染色及TEM結(jié)果顯示anti-EGFR-PEG-SPIO的H460細(xì)胞內(nèi)可見大量鐵顆粒沉積,而PEG-SPIO的腫瘤細(xì)胞內(nèi)僅可見少量鐵顆粒沉積。結(jié)論自行制備的anti-EGFR-PEG-SPIO分子探針對(duì)H460肺腺癌細(xì)胞具有靶向效應(yīng),采用3.0T MR掃描儀可對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
【圖文】：

O和PEG-SPIO的T2WI信號(hào)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.41，P＞0.05)，F(xiàn)e濃度為10、20、40、80μg/ml時(shí)，anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO的T2WI信號(hào)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.94、10.40、13.98、7.71，P均＜0.01)。表1不同F(xiàn)e濃度anti-EGFＲ-PEG-SPIO及PEG-SPIO分子探針與H460細(xì)胞孵育后T2WI信號(hào)強(qiáng)度(－x±s)Fe濃度(μg/ml)anti-EGFＲ-PEG-SPIOPEG-SPIO01441．50±43．121424．33±58．6410603．00±26．14831．83±38．1920246．33±29．15526．33±28．604081．17±7．55287．00±34．098025．17±3．19198．33±18．14圖4T2WI信號(hào)強(qiáng)度A．a(chǎn)nti-EGFＲ-PEG-SPIO(下排)和PEG-SPIO(上排)的T2WI信號(hào);B．a(chǎn)nti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO探針T2WI信號(hào)強(qiáng)化趨勢(shì)圖3討論EGFＲ在多種上皮性腫瘤中呈高度表達(dá)或過(guò)表達(dá)，如非小細(xì)胞型肺癌、乳腺癌、胃癌、宮頸癌及頭頸部腫瘤，而在正常表皮細(xì)胞常不表達(dá)，具有較高的組織特異性。研究［3-5］表明anti-EGFＲ單克隆抗體與肺腺癌腫瘤細(xì)胞有很強(qiáng)的結(jié)合能力。SPIO具有良好的水溶性及超順磁效應(yīng)，常被用作MＲIT2負(fù)順磁效應(yīng)對(duì)比劑、藥物傳遞的載體及腫瘤的熱療［6-8］。利用anti-EG-FＲ單克隆抗體作為載體，可將SPIO攜帶至腫瘤細(xì)胞表面，通過(guò)EGFＲ配體介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)化并將其攝入細(xì)胞漿，降低腫瘤T2值，對(duì)藥物的釋放監(jiān)測(cè)及提高腫瘤診斷敏感性具有重要價(jià)值，可實(shí)現(xiàn)MＲI對(duì)腫瘤治療監(jiān)測(cè)的可視化。本研究采用anti-EGFＲ抗體修飾PEG包裹的SPIO，構(gòu)建anti-EGFＲ-PEG-SPIO靶向MＲI分子探針，利用不同F(xiàn)e濃度的分子探針與H460細(xì)胞孵育，根據(jù)腫瘤細(xì)胞攝取不同F(xiàn)e含量的對(duì)比劑而形成細(xì)胞T2信號(hào)強(qiáng)度差異，從細(xì)胞水平探討腫瘤的監(jiān)測(cè)可視化以及細(xì)胞靶向成像在臨床診療中的應(yīng)用。TEM顯示磁性納米粒子具有良好分散?

中，分別將Fe濃度為0、10、20、40、80μg/ml的anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO探針與1×106的H460細(xì)胞孵育2h，PBS溶液沖洗3次，經(jīng)胰蛋白酶消化后重懸于0.5ml1%瓊脂糖的EP管。采用3.0TMＲ掃描儀、動(dòng)物小線圈對(duì)懸浮細(xì)胞進(jìn)行成像。采用T2WI快速自旋轉(zhuǎn)回波序列:TＲ3000ms，TE90.4ms，層厚1mm，層間距1mm，矩陣256×256，F(xiàn)OV8cm×8cm信號(hào)強(qiáng)度分析:分別選擇每各樣本大小一致、同一橫截面的ＲOI(面積＞30mm2)測(cè)量T2WI信號(hào)強(qiáng)度，同一樣品測(cè)量6次，計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以－x±s表示。不同F(xiàn)e濃度anti-EGFＲ-PEG-SPIO及PEG-SPIO探針與H460細(xì)胞孵育后T2WI信號(hào)強(qiáng)度比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK及LSD檢驗(yàn);相同F(xiàn)e濃度下，anti-EGFＲ-PEG-SPIO與PEG-SPIO探針的T2WI信號(hào)差異采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1Anti-EGFＲ靶向與非靶向納米聚合物的表征TEM所測(cè)SPIO的粒徑為9.2nm，納米粒子分布均勻，無(wú)粘連(圖1A、B)。耦聯(lián)anti-EGFＲ前后納米聚合物水合粒徑約38.5nm和45.7nm(圖1C)。MＲI所圖1anti-EGFＲ靶向與非靶向納米聚合物的表征A、B．SPIO的電鏡圖及粒徑直徑分布圖;C．耦聯(lián)anti-EGFＲ前后納米聚合物水合粒徑;D．a(chǎn)nti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO的Ｒ2值圖2anti-EGFＲ-PEG-SPIO和PEG-SPIO的MTT圖3體內(nèi)H460細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)an-ti-EGFＲ-PEG-SPIO(A)和PEG-SPIO(B)的普魯士藍(lán)染色(×200);anti-EGFＲ-PEG-SPIO(C)和PEG-SPIO(D)的細(xì)胞攝取電鏡表現(xiàn)(×20000)箭示Fe顆粒染色聚積中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)2017年第33卷第12期ChinJMedImagingTechnol，，2017，Vol33，No12·1799·

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