本文關(guān)鍵詞：活性氧調(diào)控血小板凋亡及輻射對產(chǎn)板型巨核Meg-01細胞影響的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2014年

活性氧調(diào)控血小板凋亡及輻射對產(chǎn)板型巨核Meg-01細胞影響的初步研究

王秀娟  

【摘要】：目的研究Dibucaine（辛可卡因）和Thrombin（凝血酶）對血小板作用過程中活性氧的產(chǎn)生及抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）對其引起凋亡或酶切的作用，以及X射線對血小板凋亡和巨核細胞增殖分化等影響并探討可能機制； 方法流式細胞術(shù)檢測活性氧的產(chǎn)生、血小板GPIba的表達和線粒體膜電位的去極化；Western-blot法測定凋亡蛋白Caspase-3和抗凋亡蛋白Bcl-xL的表達水平和血小板酶切片段GC的表達。予以Meg-01細胞1、3、5、7(Gy)的X射線照射，CCK-8試劑盒檢測細胞增殖能力，流式細胞術(shù)檢測細胞CD41和GPIba的表達以及AnnexinV-FITC細胞凋亡檢測試劑盒檢測細胞凋亡情況。 結(jié)果Dibucaine和Thrombin處理的血小板產(chǎn)生活性氧較對照組分別增加約1.64倍和1.5倍，而用NAC預(yù)處理組活性氧的產(chǎn)生明顯低于刺激組。Dibucaine單獨處理的血小板膜糖蛋白GPIba的表達明顯減少，且離心后的上清中GC片段明顯增多；而予以NAC（N-乙酰半胱氨酸）、DTT（二硫蘇糖醇）等還原劑預(yù)先處理后再予以Dibucaine處理，血小板GPIba的表達減低明顯受到抑制，上清液GC片段的表達也明顯降低。Dibucaine處理組中△Ψm正常血小板為（13.52±3.01）%， NAC+Dibucaine組為（86.30±9.37）%；Thrombin處理組中△Ψm正常的血小板為（76.58±5.28）%，NAC+Thrombin組為（93.00±3.03）%，，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P值均0.001）。Dibucaine處理的血小板，Caspase-3被激活后裂解的小片段明顯多于DMSO對照組；預(yù)先用NAC處理血小板，再予Dibucaine處理，Caspase-3活化后裂解的小片段明顯減少；Dibucaine或Thrombin處理的血小板抗凋亡蛋白Bcl-xL的表達較DMSO對照組或空白組比較均有所減少；NAC預(yù)處理血小板后再予以Dibucaine或Thrombin處理，Bcl-xL的表達較Dibucaine或Thrombin單獨處理組明顯增多。予以2.5Gy~10Gy X射線照射，血小板線粒體膜電位和GPIba有小幅波動，但沒有顯著性差異。產(chǎn)板型巨核Meg-01細胞受到劑量大于3Gy的單次X射線照射后24小時，增殖能力較對照組明顯受到抑制，CD41或GPIba的表達較對照組明顯增多，細胞受到照射后48小時,凋亡較對照組比較無顯著差異，但3Gy以上照射的細胞壞死較對照比較有明顯差異。 結(jié)論Dibucaine或Thrombin引起的血小板凋亡過程中，活性氧參與了其酶切和凋亡的調(diào)控；抗氧化劑NAC可明顯抑制Dibucaine或Thrombin引起的血小板酶切與凋亡，并且主要是通過對活性氧的抑制或清除來發(fā)揮抗凋亡等作用的；2.5Gy~10Gy的X射線照射不能引起血小板的凋亡與酶切。產(chǎn)板型巨核Meg-01細胞受到劑量大于3Gy的單次X射線照射，增殖明顯受到抑制，而分化程度明顯增加，細胞有晚期壞死的發(fā)生。此研究結(jié)果對進一步探討血栓與止血、血小板減少以及輻射對造血系統(tǒng)的損傷具有一定的臨床意義，其研究成果有望應(yīng)用于相關(guān)疾病的治療或指導(dǎo)新藥的研發(fā)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R815
【目錄】：

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