【摘要】：第一部分靶向微泡-干細胞復合體的制備 目的制備一種新型靶向微泡-干細胞復合體。 方法采用“生物素-親和素”橋連法構(gòu)建攜抗ICAM-1抗體的靶向微泡（MBICAM-1）。用帶正電荷的多聚賴氨酸（PLL）對MBICAM-1進行包覆和修飾，使靶向微泡表面帶正電荷。采用靜電吸附法將PLL修飾的MBICAM-1與兔骨髓間充質(zhì)干細胞（MSCs）共同孵育，制備MBICAM-1-MSCs復合體，，流式細胞儀檢測靶向微泡與MSCs的結(jié)合率。 結(jié)果MBICAM-1經(jīng)PLL修飾后，微泡表面帶正電荷，但微泡形態(tài)、粒徑以及與損傷內(nèi)皮細胞（HUVEC）的結(jié)合率與未經(jīng)PLL修飾的MBICAM-1無顯著性差異（P＞0.05）。PLL修飾的MBICAM-1與MSCs結(jié)合形成MBICAM-1-MSCs復合體，且MSCs與MBICAM-1之間的比例為1:40時，二者之間結(jié)合率達（29.45±2.88）%。結(jié)論成功制備MBICAM-1-MSCs復合體,當MSCs與MBICAM-1之間的比例為1:40時，其結(jié)合率最大。 第二部分微泡介導聲輻射力增強MSCs歸巢修復損傷血管內(nèi)皮的研究 目的探討微泡介導聲輻射力增強MSCs歸巢修復損傷血管內(nèi)皮的有效性。 方法將42只雌性新西蘭大白兔，隨機分為對照（C）組6只，實驗組36只。實驗組建立髂動脈球囊損傷模型，術后隨機分為：手術（O）組、手術+超聲輻照（O+US）組、手術+微泡+超聲輻照（O+MB+US）組、手術+MSCs（O+M）組、手術+復合體（O+TM）組、手術+復合體+超聲輻照（O+TM+US）組。在髂動脈球囊損傷模型建立后即刻，將雄性MSCs或靶向微泡-干細胞復合體移植至損傷動脈內(nèi)孵育30min，超聲輻照組使用功率0.66w,占空比100%頻率為1MHZ的脈沖超聲經(jīng)體外輻照損傷的髂動脈5min。Real-Time PCR檢測血管組織SRY mRNA的表達。另取42只雌性兔做相同的分組處理，用雄性MSCs或靶向微泡-干細胞復合體連續(xù)治療7d，移植后7d、14d、21d、28d取血管組織Real-Time PCR檢測eNOS mRNA的表達。移植后28d取血管組織進行相關指標測定，HE染色檢測血管形態(tài)學改變，免疫組織化學檢測PCNA、CD31、vWF的表達。 結(jié)果細胞移植后即刻，在（O+M）組、（O+TM）組、（O+TM+US）組均可檢測到SRY mRNA的表達，其余各組幾乎無表達（P0.05）。（O+TM+US）組較（O+M）組和（O+TM）組表達明顯增加（P0.05）。細胞移植后7d、14d、21d、28d均可檢測到eNOS mRNA的表達，與對照組相比，其它各組表達均減少。除對照組外，（O+TM+US）組在各時間段表達量最高，（O+M）組和（O+TM）組次之，（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組最低（P0.05）。細胞移植后28d，HE染色（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組內(nèi)膜增生最明顯，（O+M）組、（O+TM）組和（O+TM+US)新生內(nèi)膜面積/中膜面積(IA/MA)、管腔狹窄率均低于（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組，且（O+TM+US）組低于（O+M）組和（O+TM）組（P0.05）。同時，PCNA的表達在（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組最高，（O+M）組和（O+TM）組次之，（O+TM+US）組最低（P0.05）。CD31和vWF的表達在（O+TM+US）組最高，（O+M）組和（O+TM）組次之，其余各組幾乎無表達（P0.05）。 結(jié)論復合體聯(lián)合超聲輻照組較單純細胞組或單純復合體組促進細胞歸巢及修復損傷血管內(nèi)皮效果更顯著。證實微泡介導聲輻射力可增強MSCs歸巢修復損傷血管內(nèi)皮。
[Abstract]:Preparation of a first partially-targeted microvesicle-stem cell complex Objective To prepare a novel targeting microvesicle-stem cell complex Method for constructing targeted microvesicle (MBIC) with anti-ICAM-1 antibody by using 鈥渂iotin-affinity鈥

本文編號：2321661