發(fā)布時(shí)間：2018-11-10 06:45

【摘要】：第一部分靶向微泡-干細(xì)胞復(fù)合體的制備 目的制備一種新型靶向微泡-干細(xì)胞復(fù)合體。 方法采用“生物素-親和素”橋連法構(gòu)建攜抗ICAM-1抗體的靶向微泡（MBICAM-1）。用帶正電荷的多聚賴氨酸（PLL）對(duì)MBICAM-1進(jìn)行包覆和修飾，使靶向微泡表面帶正電荷。采用靜電吸附法將PLL修飾的MBICAM-1與兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）共同孵育，制備MBICAM-1-MSCs復(fù)合體，，流式細(xì)胞儀檢測(cè)靶向微泡與MSCs的結(jié)合率。 結(jié)果MBICAM-1經(jīng)PLL修飾后，微泡表面帶正電荷，但微泡形態(tài)、粒徑以及與損傷內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的結(jié)合率與未經(jīng)PLL修飾的MBICAM-1無顯著性差異（P＞0.05）。PLL修飾的MBICAM-1與MSCs結(jié)合形成MBICAM-1-MSCs復(fù)合體，且MSCs與MBICAM-1之間的比例為1:40時(shí)，二者之間結(jié)合率達(dá)（29.45±2.88）%。結(jié)論成功制備MBICAM-1-MSCs復(fù)合體,當(dāng)MSCs與MBICAM-1之間的比例為1:40時(shí)，其結(jié)合率最大。 第二部分微泡介導(dǎo)聲輻射力增強(qiáng)MSCs歸巢修復(fù)損傷血管內(nèi)皮的研究 目的探討微泡介導(dǎo)聲輻射力增強(qiáng)MSCs歸巢修復(fù)損傷血管內(nèi)皮的有效性。 方法將42只雌性新西蘭大白兔，隨機(jī)分為對(duì)照（C）組6只，實(shí)驗(yàn)組36只。實(shí)驗(yàn)組建立髂動(dòng)脈球囊損傷模型，術(shù)后隨機(jī)分為：手術(shù)（O）組、手術(shù)+超聲輻照（O+US）組、手術(shù)+微泡+超聲輻照（O+MB+US）組、手術(shù)+MSCs（O+M）組、手術(shù)+復(fù)合體（O+TM）組、手術(shù)+復(fù)合體+超聲輻照（O+TM+US）組。在髂動(dòng)脈球囊損傷模型建立后即刻，將雄性MSCs或靶向微泡-干細(xì)胞復(fù)合體移植至損傷動(dòng)脈內(nèi)孵育30min，超聲輻照組使用功率0.66w,占空比100%頻率為1MHZ的脈沖超聲經(jīng)體外輻照損傷的髂動(dòng)脈5min。Real-Time PCR檢測(cè)血管組織SRY mRNA的表達(dá)。另取42只雌性兔做相同的分組處理，用雄性MSCs或靶向微泡-干細(xì)胞復(fù)合體連續(xù)治療7d，移植后7d、14d、21d、28d取血管組織Real-Time PCR檢測(cè)eNOS mRNA的表達(dá)。移植后28d取血管組織進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，HE染色檢測(cè)血管形態(tài)學(xué)改變，免疫組織化學(xué)檢測(cè)PCNA、CD31、vWF的表達(dá)。 結(jié)果細(xì)胞移植后即刻，在（O+M）組、（O+TM）組、（O+TM+US）組均可檢測(cè)到SRY mRNA的表達(dá)，其余各組幾乎無表達(dá)（P0.05）。（O+TM+US）組較（O+M）組和（O+TM）組表達(dá)明顯增加（P0.05）。細(xì)胞移植后7d、14d、21d、28d均可檢測(cè)到eNOS mRNA的表達(dá)，與對(duì)照組相比，其它各組表達(dá)均減少。除對(duì)照組外，（O+TM+US）組在各時(shí)間段表達(dá)量最高，（O+M）組和（O+TM）組次之，（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組最低（P0.05）。細(xì)胞移植后28d，HE染色（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組內(nèi)膜增生最明顯，（O+M）組、（O+TM）組和（O+TM+US)新生內(nèi)膜面積/中膜面積(IA/MA)、管腔狹窄率均低于（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組，且（O+TM+US）組低于（O+M）組和（O+TM）組（P0.05）。同時(shí)，PCNA的表達(dá)在（O）組、（O+US）組、（O+MB+US）組最高，（O+M）組和（O+TM）組次之，（O+TM+US）組最低（P0.05）。CD31和vWF的表達(dá)在（O+TM+US）組最高，（O+M）組和（O+TM）組次之，其余各組幾乎無表達(dá)（P0.05）。 結(jié)論復(fù)合體聯(lián)合超聲輻照組較單純細(xì)胞組或單純復(fù)合體組促進(jìn)細(xì)胞歸巢及修復(fù)損傷血管內(nèi)皮效果更顯著。證實(shí)微泡介導(dǎo)聲輻射力可增強(qiáng)MSCs歸巢修復(fù)損傷血管內(nèi)皮。
[Abstract]:Preparation of a first partially-targeted microvesicle-stem cell complex Objective To prepare a novel targeting microvesicle-stem cell complex Method for constructing targeted microvesicle (MBIC) with anti-ICAM-1 antibody by using 鈥渂iotin-affinity鈥

本文編號(hào)：2321661