本文關(guān)鍵詞：漢防已甲素防治急性放射性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學(xué)》 2014年

長鏈非編碼RNA在急性放射性肺損傷中的作用及機(jī)制的初步研究

劉暢  

【摘要】：目的：采用高通量長鏈非編碼RNA (Long noncoding RNAs，LncRNAs)芯片篩選可能與放射性肺損傷相關(guān)的lncRNAs，初步在體外探討lncRNA對放射性肺損傷發(fā)生的影響及相關(guān)機(jī)制。 方法：(1)5~6周齡雌性C57BL/6小鼠共24只，分為照射組和對照組，每組12只。經(jīng)12Gy6-MeV X射線直線加速器進(jìn)行全胸照射，劑量率200cGy/min，源皮距100cm。照射后24h取右半肺經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋后進(jìn)行免疫組化檢測磷酸化-H2AX表達(dá)。左半肺則經(jīng)RNA提取、純化、標(biāo)記后進(jìn)行小鼠LncRNA基因芯片檢測。雜交信號經(jīng)生物信息學(xué)分析獲得放射性肺損傷早期差異表達(dá)的lncRNAs。相關(guān)lncRNAs最后經(jīng)Realtime PCR進(jìn)行驗(yàn)證，并進(jìn)一步進(jìn)行生物信息學(xué)分析。(2)選取經(jīng)驗(yàn)證和分析后的一種lncRNA，設(shè)計(jì)合成相應(yīng)siRNA干擾細(xì)胞中該lncRNA的轉(zhuǎn)錄。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測lncRNA敲減對肺上皮細(xì)胞Beas-2B細(xì)胞增殖能力的影響，通過流式細(xì)胞術(shù)分析lncRNA轉(zhuǎn)錄抑制對Beas-2B細(xì)胞周期分布及凋亡的影響。經(jīng)磷酸化γ-H2AX免疫熒光染色法檢測抑制該lncRNA對Beas-2B細(xì)胞中由電離輻射引起的DNA損傷情況。通過Western blot法初步確定抑制該lncRNA對肺上皮細(xì)胞電離輻射后細(xì)胞周期相關(guān)蛋白及DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)的調(diào)控。 結(jié)果：(1)免疫組化分析發(fā)現(xiàn)照射組小鼠肺組織中磷酸化-H2AX表達(dá)顯著增加（P0.05）。經(jīng)基因芯片篩選出放射性肺損傷早期304種差異表達(dá)的lncRNAs，其中62種表達(dá)上調(diào)，242種表達(dá)下調(diào)；有9種差異表達(dá)的lncRNAs位于編碼基因附近（＜300bp）。同時(shí)篩選出了97種高表達(dá)和463種低表達(dá)的mRNA，GO分析這些mRNA主要集中在應(yīng)激反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)通路，pathway分析發(fā)現(xiàn)參與P53信號、新陳代謝等信號調(diào)節(jié)通路。最后在放射性肺損傷早期肺組織中經(jīng)RealtimePCR驗(yàn)證了位于編碼基因附近的6種差異表達(dá)lncRNAs。經(jīng)生物信息學(xué)分析，選取其中1種受照后顯著上調(diào)的lncRNA進(jìn)行后續(xù)功能研究。(2)成功構(gòu)建lncRNA低表達(dá)的Beas-2B細(xì)胞穩(wěn)定株。lncRNA低表達(dá)可顯著增加Beas-2B細(xì)胞的增殖速率，并引起B(yǎng)eas-2B細(xì)胞發(fā)生明顯的G2期阻滯。減少電離輻射引起的γ-H2AX foci的數(shù)目。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)lncRNA低表達(dá)后Beas-2B細(xì)胞中周期相關(guān)RAD50、磷酸化P53和RB蛋白表達(dá)水平明顯減少，而KU70、KU80、MDM2、CDK2的表達(dá)水平明顯增加。 結(jié)論：12Gy全胸X射線照射24h后即可引起小鼠肺組織DNA損傷，并引起肺組織中l(wèi)ncRNAs的差異表達(dá)。lncRNA在體外參與對人支氣管上皮細(xì)胞增殖及放射敏感性的調(diào)控，其作用機(jī)制可能與其對細(xì)胞周期、DNA損傷修復(fù)等相關(guān)蛋白的表達(dá)調(diào)控有關(guān)，然而具體的作用途徑和分子機(jī)制還有待進(jìn)一步的深入研究。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R730.55
【目錄】：

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