本文選題：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 + 超聲生物顯微鏡��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：[研究背景] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)是一種以累及周圍關(guān)節(jié)為主,漸進(jìn)性、多系統(tǒng)性自身免疫疾病。RA在我國(guó)發(fā)病率約為0.4%,在全世界約為0.5%-1.0%。目前RA的發(fā)生學(xué)機(jī)制尚未完全明了,研究顯示,RA和環(huán)境、患者的遺傳因素、免疫水平、激素水平有一定關(guān)系；同時(shí)一些特殊人群如嗜煙人群,糖尿病患者,肥胖者的RA發(fā)病率也較高。此外,不同人種,不同性別發(fā)病也有較大差異。因此,RA可能為易感個(gè)體被感染因子直接或間接激發(fā),同時(shí)B細(xì)胞、T細(xì)胞、及多種細(xì)胞因子共同參與的關(guān)節(jié)及全身性病變。RA以滑膜炎為首發(fā)改變,逐步累及關(guān)節(jié)軟骨、韌帶、肌腱,造成軟骨破壞及骨侵蝕,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。如未獲得及早有效治療,RA三年內(nèi)關(guān)節(jié)破壞率達(dá)70%,不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,還給社會(huì)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因臨床目前尚無(wú)有效藥物可逆轉(zhuǎn)RA關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞,因此,早期診斷RA,盡早開始有效治療,對(duì)控制和延緩RA病情發(fā)展,降低RA致殘率有重要意義。 RA早期特征性病理改變是炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、滑膜細(xì)胞增生及新生血管形成。以滑膜為首發(fā)病變,關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn),形成富含毛細(xì)血管的肉芽組織----血管翳；后者侵蝕破壞軟骨和骨,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能喪失。顯然,新生血管形成是產(chǎn)生和維持RA血管翳的重要標(biāo)志,它增強(qiáng)了血管翳的侵襲性,在RA的侵蝕和破壞過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。研究顯示新生血管形成在RA早期即開始作用并貫穿整個(gè)RA病程。因此,觀察RA滑膜病理改變,尤其新生血管的形成對(duì)于RA的早期診斷、活動(dòng)性判斷、療效觀察和預(yù)后判斷均有重要意義。2010版美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)/歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)合會(huì)(ACR/EULAR)修訂的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)指出滑膜炎是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎早期診斷指標(biāo)之一。 同時(shí),侵入滑膜和腱鞘的炎性反應(yīng)細(xì)胞和新生血管能產(chǎn)生包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF),腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)等在內(nèi)的等多種細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子以網(wǎng)絡(luò)形式相互作用,不但進(jìn)一步促進(jìn)新血管的形成,同時(shí)也是關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞的基礎(chǔ)。VEGF是一種特異作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能細(xì)胞因子,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂、增生、遷移,最終導(dǎo)致新生血管生成增加。此外,VEGF還可增加血管通透性,促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)滲出,導(dǎo)致慢性炎癥形成和發(fā)展。因此,目前認(rèn)為VEGF是參與RA最重要的細(xì)胞因子之一,在整個(gè)新生血管的形成過(guò)程中處于核心地位[10] TNF-α是RA中另一種重要免疫調(diào)節(jié)因子,由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,通過(guò)調(diào)節(jié)血管新生和滑膜炎性改變,降解軟骨基質(zhì)等過(guò)程參與RA關(guān)節(jié)病變。TNF-α產(chǎn)生于免疫反應(yīng)早期,通過(guò)自分泌和旁分泌的方式產(chǎn)生大量炎性介質(zhì),刺激纖維樣細(xì)胞增殖并增加IL-6、IL-8等細(xì)胞因子的釋放；同時(shí)又反過(guò)來(lái)活化環(huán)境中的巨噬細(xì)胞,促進(jìn)自身生成,從而在滑膜細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間形成了一個(gè)正反饋,使炎癥持續(xù)發(fā)展,激發(fā)炎性連鎖反應(yīng)。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示,在血管內(nèi)皮細(xì)胞中TNF-α對(duì)血管新生的作用是通過(guò)整合素αvβ-3來(lái)完成的[14]。整合素為細(xì)胞黏附分子家族的成員之一,正常生理?xiàng)l件下在血管內(nèi)皮低表達(dá)或不表達(dá),而在腫瘤誘導(dǎo)的新生血管組織高表達(dá),說(shuō)明其對(duì)血管的生成起重要作用。研究顯示整合素αvβ-3可能在多環(huán)節(jié)影響類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病變滑膜血管新生,在血管生成中起著重要的調(diào)節(jié)作用。 動(dòng)物模型在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制,早期診斷,藥物治療等研究中具有非常重要的價(jià)值。膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis, CIA)以多發(fā)性關(guān)節(jié)炎性改變并伴有關(guān)節(jié)損害為特征,是國(guó)內(nèi)外較為理想的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型之一。大鼠則因飼養(yǎng)容易,實(shí)驗(yàn)成本低廉而成為首選。采用何種敏感而有效的手段或指標(biāo)對(duì)RA模型進(jìn)行實(shí)時(shí)觀察和監(jiān)測(cè),即活體觀察RA模型關(guān)節(jié)病理變化過(guò)程,尤其滑膜血管翳的形成和發(fā)展,對(duì)RA實(shí)驗(yàn)研究至關(guān)重要。組織病理檢查毫無(wú)疑問(wèn)可以準(zhǔn)確反映關(guān)節(jié)滑膜病變,但需要處死動(dòng)物,實(shí)驗(yàn)無(wú)法連續(xù)性進(jìn)行。血液生化指標(biāo)多波動(dòng)較大,且特異性不理想。普通X線因無(wú)法顯示滑膜及軟骨,對(duì)RA早期滑膜改變?cè)\斷價(jià)值有限。微型CT圖像分辨率約為90μm,微型核磁為500μm,對(duì)于大鼠關(guān)節(jié)細(xì)微結(jié)構(gòu)的辨別仍顯不足。且CT、MRI均適合瞬時(shí)圖像的采集,難以進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察。缺乏理想的專門針對(duì)小動(dòng)物(如大鼠)的骨關(guān)節(jié)影像學(xué)方法是目前RA實(shí)驗(yàn)研究中面臨的問(wèn)題。 超聲對(duì)人體軟組織,特別是含液體的組織細(xì)微結(jié)構(gòu)具有較高的分辨力。RA關(guān)節(jié)滑膜囊內(nèi)多有液體滲出,與增生的滑膜之間形成良好的反射界面,使滑膜增生的形態(tài)學(xué)改變得以直觀顯示。目前,高頻超聲對(duì)RA的診斷價(jià)值已得到臨床認(rèn)可,彩色多普勒、頻譜多普勒、能量多普勒等超聲技術(shù)的應(yīng)用增加了超聲早期診斷RA的準(zhǔn)確性及敏感性,尤其能量多普勒成像(power Doppler imaging PDI),克服了彩色多普勒顯像對(duì)血流角度的依賴性,特別適用于顯示滑膜低速血流,且不易被干擾,可靠性較高。但超聲檢查應(yīng)用于類風(fēng)濕動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究鮮見報(bào)道,尤其在RA小動(dòng)物模型的應(yīng)用,至今國(guó)內(nèi)未見報(bào)道。原因在于鼠體格小,肢體關(guān)節(jié)纖細(xì),臨床常用高頻超聲探頭頻率多為15-20MHz,軸向辨率約3mm,對(duì)大鼠關(guān)節(jié)細(xì)微結(jié)構(gòu)顯示欠佳。 超聲生物顯微鏡(ultrasoundbiomicroscopy, UBM)由高頻率換能器與高分辨率超聲儀結(jié)合而成,探頭頻率20-100MHz,軸向分辨力可達(dá)100-20μm[27]。UBM是近年新興的活體成像技術(shù),逐步用于觀察小動(dòng)物模型及人類淺表組織。該技術(shù)具有非侵入性、高分辨率、實(shí)時(shí)性等獨(dú)特優(yōu)勢(shì),目前UBM在小動(dòng)物心血管疾病、胚胎發(fā)育等領(lǐng)域的研究應(yīng)用逐漸成為熱點(diǎn),而在肌骨關(guān)節(jié)的應(yīng)用尚處于起步階段。 本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎基礎(chǔ)上加以改進(jìn),通過(guò)二次免疫加強(qiáng)法對(duì)SD大鼠尾根部及腹股溝皮內(nèi)多點(diǎn)注射Ⅱ型膠原乳劑,建立類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠模型---膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)。嘗試使用UBM動(dòng)態(tài)連續(xù)在體觀察CIA大鼠關(guān)節(jié)變化,并采用能量多普勒成像對(duì)滑膜血流進(jìn)行半定量分析,目前這一研究尚鮮見報(bào)道。本研究試圖從臨床癥狀,聲像學(xué)特點(diǎn),病理學(xué)改變等多角度,結(jié)合VEGF、TNF-α、αvβ-3表達(dá)水平,動(dòng)態(tài)觀察RA發(fā)生發(fā)展過(guò)程,分析滑膜細(xì)胞增生,炎性活動(dòng)、血管生成與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制的關(guān)系；探討UBM對(duì)RA小動(dòng)物模型早期診斷的可能性及應(yīng)用價(jià)值。此外,實(shí)驗(yàn)通過(guò)UBM觀察不同抗血管生成藥物對(duì)RA的治療作用,為RA抗血管生成靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),并進(jìn)一步評(píng)價(jià)UBM在RA小動(dòng)物模型藥物療效觀察中應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)主要包括以下三個(gè)部分： 第一章超聲生物顯微鏡在建立大鼠CIA模型中的應(yīng)用 [目的] 1.探討UBM能否應(yīng)用于大鼠關(guān)節(jié)檢查,初步總結(jié)大鼠正常關(guān)節(jié)及CIA聲像圖特點(diǎn)。 2.通過(guò)滑膜厚度及PDI血流分級(jí)半定量分析探討CIA大鼠關(guān)節(jié)聲像圖表現(xiàn)與滑膜增生,血管新生的關(guān)系,評(píng)價(jià)UBM對(duì)CIA早期小動(dòng)物模型的應(yīng)用價(jià)值。 [方法] 1.110只雌性SD大鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表分成2組：空白對(duì)照組,10只；膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)組100只。 2.CIA組采用牛Ⅱ型膠原乳劑二次免疫誘導(dǎo)制備RA大鼠模型。II型膠原乳劑分初次免疫與加強(qiáng)免疫兩次注射給藥。將大鼠用10%水合氯醛(注射劑量0.3ml/100g體重)腹腔注射麻醉后,初次免疫將濃度為lmg/mL的Ⅱ型膠原乳劑以0.2ml/只的劑量在CIA組大鼠尾根部進(jìn)行多點(diǎn)皮內(nèi)注射。2周后加強(qiáng)免疫一次,使用不完全弗氏佐劑配制的濃度為lmg/mL的Ⅱ型膠原乳液于大鼠腹股溝皮下注射,劑量0.2ml/只。對(duì)照組同期同部位0.2ml/只生理鹽水注射。 3.試驗(yàn)當(dāng)天注射造模藥物前及注射造模藥物后每5天對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行一般狀態(tài)及局部關(guān)節(jié)腫脹度觀察,測(cè)量體重、關(guān)節(jié)炎指數(shù)。 4.實(shí)驗(yàn)第0天、15天、35天UBM檢查實(shí)驗(yàn)大鼠四肢關(guān)節(jié),記錄檢出滑膜增厚關(guān)節(jié)數(shù)目(檢出關(guān)節(jié)數(shù)),PDI顯示關(guān)節(jié)腔內(nèi)出現(xiàn)血流信號(hào)的關(guān)節(jié)數(shù)目(血流關(guān)節(jié)數(shù)),測(cè)量膝、踝、足爪關(guān)節(jié)滑膜厚度,增生范圍,PDI觀察滑膜血流,根據(jù)血流信號(hào)豐富程度半定量評(píng)分。 5.第35天將造模成功的部分CIA大鼠及未成功CIA大鼠、空白組大鼠全部處死,取四肢關(guān)節(jié)進(jìn)行病理檢查,對(duì)滑膜病理?yè)p害半定量評(píng)分。滑膜細(xì)胞增生評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：滑膜細(xì)胞排列整齊,無(wú)增生,少于3層,為0分；滑膜增生5-6層,無(wú)明顯淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),1分；滑膜增生6層以上,出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),2分；滑膜增生明顯伴血管翳形成,為3分；出現(xiàn)軟骨,骨侵蝕為4分。單只大鼠滑膜病理評(píng)分以諸病變關(guān)節(jié)中病理評(píng)分最高者計(jì)入。病理關(guān)節(jié)數(shù)為單只大鼠滑膜病理評(píng)分≥1分的關(guān)節(jié)個(gè)數(shù)。 6.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述采用χ±s表示,兩組間比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)、配對(duì)樣本T檢驗(yàn),空白組全部是0的情況下根據(jù)其余各組的95%置信區(qū)間是否包含0來(lái)判斷結(jié)果。多組間比較采用單因素方差分析,首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊性,則組間多重比較采用LSD法；若方差不齊則采用近似方差分析Welch法；組間多重比較采用Dunnett'sT3法。相關(guān)性比較采用Pearson、Spearman相關(guān)分析；計(jì)數(shù)資料的統(tǒng)計(jì)描述用率來(lái)表示,兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果] 1.CIA組共72只大鼠造模成功,造模成功率72%。CIA成功組大鼠臨床表現(xiàn),UBM聲像學(xué)特征及病理改變與空白組、CIA未成功組有顯著性差異(P0.05),空白組和CIA未成功組無(wú)顯著性差異(P0.05)。 2. UBM、AI對(duì)CIA大鼠陽(yáng)性檢出率分別為88%和44%,二者具有顯著性差異(P0.01)。 3.CIA成功組大鼠UBM聲像學(xué)指標(biāo)(檢出關(guān)節(jié)數(shù),檢出血流關(guān)節(jié)數(shù)、關(guān)節(jié)滑膜厚度,滑膜UBM分級(jí),血流PDI分級(jí))隨病程發(fā)展而增加,注射造模藥物后第35與第15天相比具有顯著性差異(P0.01)。 4.CIA成功組大鼠病理關(guān)節(jié)數(shù)、滑膜病理評(píng)分均高于未成功組,具有顯著性差異(P0.01)。 5.CIA成功組滑膜厚度與滑膜病理評(píng)分、PDI分級(jí)、UBM分級(jí)呈正相關(guān)(r分別為0.649、0.528、0.619,P0.01)；血流PDI分級(jí)與滑膜病理評(píng)分、UBM分級(jí)呈正相關(guān),r分別為0.610、0.690,P0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)論] 1.本研究成功建立了RA早期大鼠模型,其臨床特點(diǎn)、關(guān)節(jié)變化及病理改變符合RA病理特征。 2.UBM能夠清晰觀察CIA大鼠滑膜增厚,血管新生,關(guān)節(jié)積液,是RA早期診斷、病情評(píng)估等實(shí)驗(yàn)研究的理想影像學(xué)方法。 3.滑膜厚度和血流PDI分級(jí)可做為早期診斷RA,評(píng)估滑膜增生及血管新生程度的客觀指標(biāo)。 第二章RA早期UBM聲像特點(diǎn)與VEGF、TNF-α、αvβ-3相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究 [目的] 1.觀察VEGF, TNF-α, αvβ-3在CIA大鼠血清及滑膜組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá),探討其在滑膜炎癥及血管新生中的作用,為RA血管抑制靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2.分析CIA大鼠UBM聲像學(xué)指標(biāo)與血清、滑膜組織VEGF, TNF-α, αvβ-3表達(dá)相關(guān)性,探討滑膜厚度、PDI血流分級(jí)等聲像學(xué)指標(biāo)無(wú)創(chuàng)性評(píng)估RA早期滑膜增生和血管翳形成的價(jià)值。 [方法] 1.110只實(shí)驗(yàn)大鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表分為兩組,空白對(duì)照組10只,CIA組100只。采用牛Ⅱ型膠原乳劑二次免疫誘導(dǎo)制備CIA大鼠模型,對(duì)照組同期給與生理鹽水注射。 2.注射造模藥物前(第0天)及注射藥物后第15、35天大鼠心臟取血2ml,分離血清,采用酶聯(lián)免疫吸附分析法測(cè)定VEGF, TNF-α, αvβ-3水平。 3.注射造模藥物前(0天)及注射藥物后第15、35天使用UBM觀察大鼠四肢關(guān)節(jié)滑膜厚度,血流及關(guān)節(jié)積液等聲像圖變化。 4.注射藥物后第35天處死對(duì)照組大鼠(10只)、部分造模成功CIA大鼠(22只)和造模不成功大鼠(18只),取四肢關(guān)節(jié)進(jìn)行病理切片檢查,半定量評(píng)估關(guān)節(jié)滑膜病理?yè)p傷,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同前。 5.滑膜病理評(píng)分≥1者,使用鼠αvβ-3、VEGF、TNF-α免疫組織化學(xué)試劑盒,嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行滑膜VEGF, TNF-α, αvβ-3表達(dá)水平測(cè)量,結(jié)果采用半定量計(jì)分法判定：①按陽(yáng)性著色程度評(píng)分：0分為無(wú)著色,與背景一致；1分為淺黃色,略高于背景色；2分為棕黃色,明顯高于背景色。3分為棕褐色。②按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分：陰性為0分,1分為10%以下；11-50%為2分；51-75%為3分；75%以上為4分。①②兩項(xiàng)得分乘積,0-1分為陰性(一),2-4分為弱陽(yáng)性(+),5-8分為中度陽(yáng)性(++),9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。 6.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述采用Z+s表示,多組間比較采用單因素方差分析,首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),若檢測(cè)結(jié)果方差齊性,則組間多重比較采用LSD法；若方差不齊則采用近似方差分析Welch法,組間多重比較采用Dunnett's T3法；相關(guān)性比較采用Pearson、Spearman相關(guān)分析；P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果] 1.CIA成功組大鼠注射造模藥物后血清VEGF、TNF-α、αvβ-3水平隨時(shí)間升高,第35天與第15天、第0天相比具有顯著性差異(P0.05)。 2.CIA成功組大鼠在注射造模藥物后第35天血清VEGF、TNF-α、αvβ-3水平分別為98.29±13.86pg/ml,27.37±5.10pg/ml,2.15±0.58pg/ml,高于CIA未成功組和對(duì)照組,具有顯著性差異(P0.05)。 3.CIA未成功組血清VEGF、TNF-α、αvβ-3水平和對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P0.05)。 4.CIA成功組大鼠滑膜VEGF、TNF-α、αvβ-3免疫組化表達(dá)水平分別為2.23±0.92、1.91±0.97、1.81±0.91,與未成功組和對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；CIA未成功組和對(duì)照組滑膜VEGF、TNF-α、αvβ3表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(P0.05)。 5.CIA成功組大鼠滑膜厚度與滑膜VEGF、TNF-α、αvβ-3表達(dá)水平呈正相關(guān),r分別為0.713、0.749、0.548,P0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6.CIA成功組大鼠滑膜PDI分級(jí)與滑膜VEGF、TNF-α、αvβ-3表達(dá)水平呈正相關(guān),r分別為0.576、0.635、0.789,P0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)論] 1.CIA大鼠血清VEGF和TNF-α, αvβ-3含量隨病程進(jìn)展而增加,與臨床關(guān)節(jié)評(píng)分及病理評(píng)分相一致,血清VEGF和TNF-α, αvβ-3升高與類風(fēng)濕活動(dòng)有關(guān)。 2.CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜VEGF, TNF-α, αvβ-3的高表達(dá)與RA關(guān)節(jié)滑膜增生及血管生成關(guān)系密切。 3.滑膜厚度、血流PDI分級(jí)分別與滑膜VEGF, TNF-α, αvβ-3表達(dá)呈正相關(guān),UBM是無(wú)創(chuàng)性評(píng)價(jià)滑膜增生和血管生成的有效工具。 第三章UBM在RA早期靶向治療實(shí)驗(yàn)研究中的應(yīng)用 [目的] 1.觀察貝伐單抗和益普賽治療前后CIA大鼠UBM關(guān)節(jié)聲像圖、臨床癥狀、血清學(xué)指標(biāo)等變化情況,評(píng)估抗血管生成對(duì)早期RA治療效果,為RA靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2.評(píng)價(jià)UBM在CIA靶向治療過(guò)程中評(píng)估炎性反應(yīng)和治療效果的作用,探討聲像學(xué)指標(biāo)能否作為觀察RA藥物療效,指導(dǎo)用藥的客觀指標(biāo)。 [方法] 1.將前期實(shí)驗(yàn)造模成功的50只CIA大鼠,根據(jù)侵犯關(guān)節(jié)數(shù)和程度相匹配原則分為3組：貝伐單抗治療組,20只；益賽普治療組20只；對(duì)照組,10只,不做藥物治療,同期給予生理鹽水注射。根據(jù)體重?fù)Q算相應(yīng)劑量分別于第0天,7天兩次給予,療程共14天。 2.第0、7、14天觀察3組CIA大鼠一般狀況,記錄體重,關(guān)節(jié)炎指數(shù)。 3.UBM觀察治療前后CIA大鼠膝,踝,關(guān)節(jié),測(cè)量滑膜厚度,軟骨、骨侵蝕及血流變化。檢查方法、內(nèi)容、圖像判讀標(biāo)準(zhǔn)同前。 4.酶聯(lián)免疫吸附分析測(cè)量治療前后各組CIA大鼠血清VEGF, TNF-α, αvβ-3表達(dá)水平,方法同前。 5.治療結(jié)束后CIA大鼠全部處死,取膝,踝,足爪關(guān)節(jié)制作病理切片,常規(guī)染色,進(jìn)行關(guān)節(jié)炎病理?yè)p傷評(píng)分。病理評(píng)分≥1者,進(jìn)行免疫組化檢測(cè)滑膜組織中VEGF、TNF-α、αvβ-3表達(dá)水平,方法及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同前。 6.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述采用χ±s表示,同一組治療前后比較采用配對(duì)樣本T檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),若檢測(cè)結(jié)果方差齊性,則組間多重比較采用LSD法,若方差不齊則采用近似方差分析Welch法,組間多重比較采用Dunnett's T3法；相關(guān)性比較采用Pearson Spearman相關(guān)分析；P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果] 1.藥物干預(yù)前,三組CIA大鼠UBM聲像學(xué)指標(biāo)(檢出病變關(guān)節(jié)數(shù),檢出顯示血流關(guān)節(jié)數(shù)、病變關(guān)節(jié)滑膜厚度、UBM分級(jí)、PDI分級(jí))組間無(wú)顯著性差異(P0.05)；藥物干預(yù)后檢出血流關(guān)節(jié)數(shù)及PDI分級(jí)三組間有極顯著性差異(P0.01),貝伐單抗組和益賽普組分別高于空白對(duì)照組,具有極顯著性差異(P0.01)；貝伐單抗組和益賽普組二者之間無(wú)組間差異(P0.05)。 2.藥物干預(yù)前三組CIA大鼠血清VEGF、TNF、αvβ-3水平組間無(wú)差異(P0.05),藥物干預(yù)后三組間出現(xiàn)極顯著性差異(P0.01)；貝伐單抗和益賽普組均低于對(duì)照組,具有極顯著性差異(P0.01),二者無(wú)組間差異(P0.05)。 3.貝伐單抗和益賽普組CIA大鼠治療后,AI, UBM聲像學(xué)各指標(biāo)與治療前比較下降,有顯著性差異(P0.05)。 4.對(duì)照組給予生理鹽水兩周后滑膜厚度、PDI分級(jí)較治療前增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；治療前后AI、UBM檢出病變關(guān)節(jié)數(shù)、顯示血流關(guān)節(jié)數(shù),UBM分級(jí)比較,無(wú)顯著性差異(P0.05)。 5.藥物干預(yù)后,三組間病理關(guān)節(jié)數(shù)無(wú)顯著性差異(P0.05)；滑膜VEGF、TNF-α、avβ-3表達(dá)水平及病理評(píng)分三組間有顯著性差異(P0.05)；空白對(duì)照組上述指標(biāo)均高于貝伐單抗組和益賽普組,有顯著性差異(P0.05)；貝伐單抗和益賽普組間無(wú)顯著性差異(P0.05)。 6.藥物干預(yù)后,滑膜厚度,PDI分級(jí)的下降分別與滑膜病理評(píng)分及VEGF、TNF-α、αLvp-3表達(dá)水平的下降正呈相關(guān)(P0.05)。 [結(jié)論] 1.貝伐單抗和益普賽抑制RA早期滑膜增生,減少滑膜血管新生,降低滑膜病理評(píng)分,對(duì)早期RA治療作用肯定。 2.滑膜厚度、PDI分級(jí)可作為RA治療過(guò)程中評(píng)估炎性反應(yīng)和治療效果的客觀指標(biāo),與滑膜厚度相比,PDI血流變化對(duì)靶向治療更為敏感。 3.UBM對(duì)RA藥物試驗(yàn),療效觀察有推廣應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R593.22;R445.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1861213