本文選題：臍帶間充質(zhì)干細胞　切入點：腫瘤細胞　出處：《第三軍醫(yī)大學》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景放射性肺損傷是胸部惡性腫瘤(肺癌、食管癌、乳腺癌、胸腺瘤等)進行放射治療時引起的正常肺組織損傷。美國放射腫瘤治療協(xié)作組(RTO)根據(jù)肺損傷發(fā)生在放療后的不同時間分為:放療后3月內(nèi)出現(xiàn)的急性放射性損傷(Acute radiation-induced pneumonitis,ARP)和放療3月后出現(xiàn)的放射性肺纖維化(Radiation-induced pulmonary fibrosis,RPF)[1]。目前用于治療放射性肺損傷的糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和中醫(yī)藥等能夠緩解早期癥狀[2-4],但對晚期的放射性肺纖維化無效。所以迫切需要尋找一個有效的治療手段。間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,因其具有自動歸巢到受損部位[5]、分化為組織細胞[6,7]、旁分泌[8-10]等特點廣泛用于再生醫(yī)學領(lǐng)域�，F(xiàn)研究最廣的MSCs主要來源于脂肪、臍帶和骨髓�；A研究發(fā)現(xiàn)臍帶來源的MSCs(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)較另外兩種來源的MSCs具有取材更方便、細胞活力更強[11]、免疫原性更弱[12]、分泌更多細胞因子[13]等優(yōu)勢。目前國內(nèi)外已陸續(xù)開展了一些MSCs治療肺部疾病(急性呼吸窘迫綜合征[14]、特發(fā)性肺纖維化[15]、細支氣管肺泡炎[16]等)的初步臨床研究,均未發(fā)生嚴重不良事件。因上述研究多為小樣本研究,其有效性需II期臨床研究證實。MSCs治療上述疾病的移植方法主要有腹腔內(nèi)[17]、氣管[18]、靜脈植入[19]三種方式。已有研究者在肺損傷幼鼠模型中證實MSCs經(jīng)氣管植入安全且療效優(yōu)于靜脈植入[20]。關(guān)于MSCs治療肺部疾病的劑量研究顯示單次植入1×106/kg至1×108/kg[14,21,22]之間是安全的。雖然MSCs治療肺部急慢性疾病的臨床研究取得了初步成就,但是目前尚無MSCs治療RPF的相關(guān)報道。已有基礎研究結(jié)果顯示脂肪來源的MSCs通過分泌肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF)和前列腺素-2(Prostaglandin 2,PGE-2)降低射線導致的大鼠肺組織纖維化損傷[5];骨髓來源的MSCs能夠提高射線輻照小鼠的存活率,肺組織病理學發(fā)現(xiàn)MSCs治療組的膠原沉積減少,MSCs治療組TNF-α的分泌增加,IL-10的分泌減少[23];因此存在MSCs治療RPF的可行性。但是MSCs治療RPF的前提是MSCs或MSCs的條件培養(yǎng)基對原發(fā)的胸部腫瘤無增殖促進作用。目前,有關(guān)MSCs對腫瘤的影響的研究結(jié)果有很多是矛盾的,多數(shù)專家認為MSCs對腫瘤細胞增殖促進還是抑制與腫瘤類型[24,25]和MSCs的組織來源[26]密切相關(guān)。因此,有必要在進行RPF的臨床試驗實施前確定我們選用的臨床級UC-MSCs或MSCs的條件培養(yǎng)基對肺癌細胞的影響。基于以上背景,為探索UC-MSCs治療RPF的安全性和有效性。本研究先從細胞水平觀察UC-MSCs對RPF原發(fā)腫瘤增殖影響,隨后從臨床水平初步探索UC-MSCs治療RPF的安全性和有效性,為其進一步臨床研究提供理論依據(jù)。研究目的1.了解UC-MSCs對肺癌細胞增殖的影響;2.初步探索UC-MSCs治療RPF的安全性和有效性;3.觀察UC-MSCs治療RPF患者前后血清和支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β1等細胞因子的變化。研究內(nèi)容1.UC-MSCs對肺癌細胞增殖的影響1.1 UC-MSCs條件培養(yǎng)基對肺癌細胞增殖的影響收集12h、24h、48h的UC-MSCs條件培養(yǎng)基分別與H446和H157細胞共培養(yǎng),連續(xù)共培養(yǎng)6天,每天同一時間采取MTT、CCK和細胞計數(shù)的方法檢測上述兩種腫瘤細胞的增殖情況。1.2 UC-MSCs對H446細胞增殖的影響選用P5-P10代的UC-MSCs與H446細胞按1:1、2:1、3:1比例共培養(yǎng),連續(xù)共培養(yǎng)6天,每間隔1h使用IncuCyte軟件檢測腫瘤細胞增殖情況。2.UC-MSCs治療RPF的臨床觀察2.1 UC-MSCs治療RPF的安全性根據(jù)納入標準入組RPF患者,在UC-MSCs植入前、植入后3天、植入后3月、植入后6月收集外周血,檢查血常規(guī)、肝腎功了解有無毒理學影響,并觀察UC-MSCs植入前后有無皮膚過敏、心血管等不良事件。2.2 UC-MSCs治療RPF的有效性在UC-MSCs植入前、植入后3月、植入后6月行6min步行距離(Six-minute walk distance,6MWD)、圣喬治問卷(St George’s Respiratory Questionnaire,SGRQ)、肺功能和胸部CT檢查和觀察臨床癥狀變化情況。2.3 UC-MSCs治療RPF的細胞因子變化在UC-MSCs植入前收集外周血,檢測血清中IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β1、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(Mysterious motorist program-1,MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-7(Mysterious motorist program-7,MMP-7)等細胞因子,通過纖支鏡對RPF病灶部位灌洗收集BALF重復查上述細胞因子,然后單次植入UC-MSCs(劑量為1×106/kg)在UC-MSCs植入治療后第3天和植入后第3月檢測血清上述細胞因子,第6月檢測血清和BALF中上述細胞因子。研究結(jié)果:1.UC-MSCs對肺癌細胞增殖的影響1.1 UC-MSCs條件培養(yǎng)基對肺癌細胞增殖的影響在共培養(yǎng)前5天,UC-MSCs條件培養(yǎng)基對H446細胞和H157細胞增殖影響不明顯。在共培養(yǎng)第6天,12h的UC-MSCs條件培養(yǎng)基對H446細胞和H157細胞增殖有促進作用,48h的UC-MSCs條件培養(yǎng)基對上述細胞增殖有抑制作用。且抑制程度可能與共培養(yǎng)時間呈正相關(guān)。1.2 UC-MSCs對H446細胞增殖的影響UC-MSCs與H446細胞在不同比例下共培養(yǎng)均不促進H446細胞增殖,且在1:1的條件下能夠抑制上述細胞增殖。2.UC-MSCs治療RPF的臨床觀察2.1 UC-MSCs治療RPF的安全性2.1.1血常規(guī)(紅細胞、血紅蛋白、白細胞、血小板),肝功(轉(zhuǎn)氨酶),腎功(肌酐、尿素氮、尿素)在UC-MSCs治療前后變化無統(tǒng)計學差異(P0.05);UC-MSCs植入前后未發(fā)現(xiàn)皮膚過敏和心血管不良事件。2.2 UC-MSCs治療RPF的有效性2.2.1 8例RPF患者中有6例自覺氣促、咳嗽等呼吸道癥狀明顯好轉(zhuǎn);2.2.2 CT肺密度值在UC-MSCs植入前與植入后第3月、第6月自身前后比較有下降;2.2.3圣喬治呼吸問卷在UC-MSCs植入前與植入后第3月、第6月比較有統(tǒng)計學差異(P0.05),6分鐘步行距離變化無統(tǒng)計學差異(P0.05);2.2.4肺功能指標FEV1、MVV、DLCO在UC-MSCs植入后第3月、第6月較前有改善,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。2.3 UC-MSCs治療RPF的細胞因子變化血清和灌洗液中TGF-β1在UC-MSCs植入前與植入后比較有下降趨勢,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結(jié)論:1、48h的UC-MSCs條件培養(yǎng)基對H446、H157細胞增殖有抑制作用;且抑制程度均可能與共培養(yǎng)時間呈正相關(guān)。UC-MSCs與H446細胞在不同比例下共培養(yǎng)均不促進H446細胞增殖,且在1:1的條件下能夠抑制上述細胞增殖。2、臨床觀察UC-MSCs治療RPF未發(fā)現(xiàn)對肝腎功和骨髓造血功能的毒副反應;且能夠改善患者癥狀、圣喬治呼吸困難評分和CT肺密度值。3、UC-MSCs治療RPF可能通過減少TGF-β1的分泌降低纖維化程度。
[Abstract]:Radiation - induced lung injury in patients with chest malignant tumors ( lung cancer , esophageal cancer , breast cancer , thymoma , etc . ) was studied . Bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) are widely used in the field of regenerative medicine because they have the advantages of self - renewal and multi - directional differentiation . MSCs are mainly derived from fat , umbilical cord and bone marrow . kg[14,21,22]涔嬮棿鏄畨鍏ㄧ殑.铏界劧MSCs娌葷枟鑲洪儴鎬ユ參鎬х柧鐥呯殑涓村簥鐮旂┒鍙栧緱浜嗗垵姝ユ垚灝，

本文編號：1710916