本文關(guān)鍵詞： 超聲造影劑 納米級 脂質(zhì) 顯影 納米顆粒 納泡 葉酸受體 超聲分子成像 靶向診療 腫瘤　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分納米級超聲造影劑的制備及其特性研究目的制備新型納米級脂質(zhì)超聲造影劑(UCAs),并對其基本特性及顯影效果進(jìn)行研究。方法采用機(jī)械振蕩法制備脂質(zhì)UCAs,針對制備過程中3個主要影響因素,設(shè)置正交試驗,篩選最優(yōu)制備條件,并在此條件下制備納米級UCAs,檢測其粒徑、分散度、Zeta電位、穩(wěn)定性及體外增強(qiáng)顯影效果。結(jié)果正交試驗結(jié)果顯示,機(jī)械振蕩時間對粒徑影響有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),納米級UCAs最優(yōu)制備條件為:DPPA量為0.5 mL,機(jī)械振蕩時間為90 s,離心時間為3 min;在此條件下制備出的納米級UCAs平均粒徑為(313.20±6.90)nm,分散度為0.15,Zeta電位為-12.40mV,體外增強(qiáng)顯影效果與聲諾維相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.02,P0.05)。4℃冰箱保存20h后觀察,該造影劑基本特性無明顯改變。結(jié)論本實(shí)驗制備的納米級UCAs粒徑小,分散均一,性質(zhì)穩(wěn)定,具備良好的顯影能力,且易于修飾,為進(jìn)一步載藥或構(gòu)建納米粒復(fù)合體等方面的研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分雙葉酸靶向納米級超聲造影劑對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞尋靶能力初步研究目的制備一種新型的雙葉酸靶向納米級超聲造影劑((FOL)2-NBs),探討其在體外與人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的靶向結(jié)合效果,為腫瘤血管外分子成像和治療奠定基礎(chǔ)。方法將L-2-AD作為分枝單元在DSPE-PEG2000-COOH的羧基末端構(gòu)建樹枝狀結(jié)構(gòu)。游離羧基DSPE-PEG2000-(COOH)2通過NHS/DCC活化并偶聯(lián)至FOL-NH2,以產(chǎn)生 DSPE-PEG2000-AD-(FOL)2 的綴合物,即每個 DSPE-PEG2000 連接兩個FOL分子,并由1 H NMR證實(shí)。將一定量的DSPE-PEG2000-AD-(FOL)2,DPPC,司盤60和吐溫80按固定比例混合,加入到1.5mLEP管中,1.0mLPBS定容,通入C3F8氣體置換管內(nèi)空氣后密封。將混合物置于60℃的恒溫水浴鍋中加熱至完全溶解,再次用C3F8氣體置換管內(nèi)空氣。將EP管在機(jī)械振蕩器中振蕩90s,用PBS將混合物稀釋至5 mL,300 rpm離心5 min,收集底層溶液,即為新型(FOL)2-NBs。采用上述方法制備非靶向納米級超聲造影劑及單葉酸靶向納米級超聲造影劑(FOL-NBs,即每個DSPE-PEG2000鏈連接一個FOL分子)作為對照。DelsaNano C納米激光粒度和Zeta電位分析儀檢測粒徑、分散度及Zeta電位;采用醫(yī)用彩色多普勒超聲診斷儀檢測其體外增強(qiáng)顯影效果;采用流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡檢測三組納米級超聲造影劑對FR過表達(dá)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的靶向結(jié)合能力。結(jié)果1 H NMR提示DSPE-PEG2000-AD-(FOL)2綴合物的成功合成,純度為90%。在普通光鏡下觀察納泡呈圓形,分布均勻且無明顯聚集。非靶向、單葉酸靶向及雙葉酸靶向組納米級超聲造影劑的平均粒徑分別為(129.43±12.33)nm,(244.10±35.09)nm,(286.87±22.96)nm,且后者顯著大于前兩者(P0.01,P0.05)。體外顯影試驗證實(shí),三組在醫(yī)用彩色多普勒超聲診斷儀上均顯示出良好的增強(qiáng)顯影效果。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與非靶向組及單葉酸靶向組相比,雙葉酸靶向組介導(dǎo)的對MCF-7靶向結(jié)合能力顯著提高(96.76%vs 0.52%,P0.001;96.76%vs 33.33%,P0.001)。熒光顯微鏡下觀察,無靶向NB組中的Hochest染料標(biāo)記的細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光,細(xì)胞膜周圍無其他熒光現(xiàn)象,FOL-NB組中可見Hochest染料標(biāo)記的細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光,周圍圍繞少量DiI染料標(biāo)記的紅色熒光,(FOL)2-NB組也可見呈藍(lán)色熒光的細(xì)胞核,周圍可見紅色熒光團(tuán),并且大部分黏附在細(xì)胞膜上,相比FOL-NB組熒光強(qiáng)度強(qiáng)。結(jié)論通過增加每個DSPE-PEG2000鏈的葉酸含量,成功地制備了一種新型雙葉酸靶向納米級超聲造影劑,較之傳統(tǒng)的單葉酸靶向納米級超聲造影劑,其與FR過表達(dá)的腫瘤細(xì)胞靶向結(jié)合能力更強(qiáng),有望作為FR過表達(dá)腫瘤血管外分子成像和治療的理想造影劑。
[Abstract]:A new type of nano - sized UCAs was prepared by the method of mechanical oscillation . The results showed that the particle size , dispersion , zeta potential , stability and enhanced development of the nano - sized UCAs were studied . Results 1 H NMR showed that DSPE - PEG2000 - AD - ( FOL ) 2 conjugate was successfully synthesized and the purity was 90 % . The results showed that the average particle size of nano - scale ultrasound contrast agent was ( 129.43 鹵 12.33 ) nm , ( 244.10 鹵 35.09 ) nm , ( 286.87 鹵 22.96 ) nm , and the latter was significantly greater than that of the two ( P0.01 , P0.05 ) . The results of flow cytometry showed that compared with non - target group and single - folate - targeting group , the target binding ability of the two - folate - targeting group was significantly improved ( 96.76 % vs 0.52 % , P0.001 ; 96.76 % vs 33.33 % , P0.001 ) . Compared with the traditional single - folate - targeting nano - scale ultrasound contrast agent , the novel double - folate - targeted nano - ultrasound contrast agent is successfully prepared by increasing the folate content of each DSPE - PEG2000 chain , and is expected to be an ideal contrast agent for the imaging and treatment of FR overexpression tumors .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R445.1;R737.9

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本文編號：1522813